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注射用重组人干扰素β1b的分离纯化及质量研究
目的:研制注射用重组人干扰素β1b(rhIFN-β1b)并对其质量进行鉴定.方法:采用高压匀浆破菌、离心分离包涵体、有机抽提、酸沉淀、Sephacryl S-200、Sephadex G-75等进行分离纯化,通过各种方法对终产品进行鉴定.结果:纯化的rhIFN-β1b比活性平均为2.59×107IU·mg-1,纯度超过99%,复性纯化后平均活性回收率为51.89%,其他各项技术指标均符合质量控制标准.结论:建立了大规模制备rhIFN-β1b的纯化工艺,研制出了符合规程要求的注射用rhIFN-β1b纯品,为临床研究奠定了基础.
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注射用重组人干扰素β1b规模化分离纯化工艺的建立及其产品质量的检定
目的 建立注射用重组人干扰素β1b(recombinant human interferonβ1b,rhIFNβ1b)规模化纯化工艺,并对该工艺制备产品的质量进行检定.方法 采用高压均质机对rhIFNβ1b/BL21菌体进行破碎,离心提取包涵体,经有机抽提及酸化沉淀获得粗制rhIFNβ1b;通过Sephacryl S-200和Sephadex G-25层析纯化获得rhIFNβ1b原液,连续生产3批.将原液稀释,加入保护剂,经分装、冻干制备成品.同时对原液及成品的质量进行检定.结果 3批rhIFNβ1b原液蛋白产量可达6～7g,平均回收率可达15.1％,平均效价为1.1×107IU/mg,HPLC纯度和SDS-PAGE纯度均超过97％,一级序列和二级结构具有良好的一致性.每批rhIFNβ1b原液可制备出20 000～30 000支成品,且各项检定项目均合格.结论 建立了rhIFNβ1b规模化分离纯化工艺,制品的产量、纯度及活性均较高,符合rhIFNβ1b工业化生产的要求.
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重组人干扰素β1b治疗复发缓解型多发性硬化症的安全性及临床疗效
目的 观察重组人干扰素β1b(rhIFNβ1b)治疗复发缓解型多发性硬化症(RRMS)的安全性及临床疗效.方法 选择20名健康志愿者.分为1.5、3、6和9 MIU 4个剂量组,每天按剂量皮下注射1次rhIFNβ1b.连续注射8 d,观察药物的安全性、耐受性和药代动力学.选择101例RRMS患者.随机分为观察组(52例)和对照组(49例),每周3次分别注射6 MIU的rhIFN[31b和25 mg人血白蛋白.用药1年后.2组均注射6 MIU的rhIFNβ1b,每周3次.用药1年.定期随访并进行各项指标及核磁共振成像(MRI)检查.观察药物的临床疗效,同时进一步观察安全性.结果 安全性观察显示,rhIFNβ1b在9 MIU剂量范围内耐受性良好.观察组和对照组分别注射rhIFNβ1b后.可显著减少RRMS患者头部与脊髓中病灶数量或缩小病灶体积.并显著降低复发率,且随着用药时间的延长,效果更加明显.结论 rhIFNβ1b安全性和耐受性良好,临床影象学评价疗效显著.
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地高辛标记探针检测重组人干扰素β1b中DNA残留量
为检测注射用重组人干扰素β1b半成品中外源性DNA残留量,以重组人干扰素β1b工程菌基因组DNA为模板,用地高辛标记探针,并以此探针进行点杂交.结果证明,该方法检测灵敏度较好,特异性较强,操作较安全简便,可用于重组人干扰素β1b制备过程中的质量监控及半成品的检定.
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重组人干扰素β1b中ox-IFN β1b含量测定
目的:建立重组人干扰素β1b(IFN β1b)中氧化型干扰素(ox-IFN β1b)的测定方法.方法:RP-HPLC色谱条件:RP-C8色谱柱(Grace Vydac,4.6 mm×250 mm,5μm),柱温40 ℃,0.1％ TFA-10％乙腈-水溶液为流动相A,0.1％ TFA-乙腈溶液为流动相B,梯度洗脱,流速为1.0 mL· min-１,检测波长214 nm.结果:ox-IFN β1b峰与峰3的分离度约为4.0,理论塔板数大于20 000;6次进样的RSD小于5.0％;2个厂家共6批IFNβ1b原液中均检出ox-IFN β1b,用面积归一化法计算百分含量为0.47％～0.96％.结论:新建方法可有效分离和测定不同厂家IFNβ1b原液中的ox-IFN β1b,对IFN β1b质量标准的提高具有重要意义.
