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琼六糖对抗霉素A引起的肝细胞内间接氧化损伤的保护作用
目的研究琼六糖对肝细胞的间接氧化损伤的保护作用.方法利用抗霉素A诱导肝细胞内的活性氧爆发,通过二乙酰基2,7-二氯荧光素(DGFH-DA)检测细胞内的氧化状况,利用荧光显微镜和流式细胞仪记录荧光变化情况,并对抗霉素A氧化所造成的细胞凋亡现象进行形态及TUNEL实验观测.结果琼六糖能够明显减少氧化细胞的数量及荧光强度.细胞凋亡研究结果发现,琼六糖能够改善细胞形态,降低由氧化所造成的细胞凋亡的出现.结论琼六糖能够有效地抑制肝细胞内活性氧的进一步爆发,并减少细胞的氧化损伤.
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线粒体复合体Ⅲ抑制剂抗霉素A对巨噬细胞免疫功能的影响
目的 研究线粒体复合体Ⅲ抑制剂抗霉素A (AMA)对巨噬细胞免疫功能的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 AMA 0.0005,0.05,0.5,5和10 mg·L-1与RAW264.7巨噬细胞分别作用2,24和48 h后,WST-1法检测巨噬细胞增殖;AMA 0.0005,0.05和0.5 mg·L-1与RAW264.7作用2h后,定量荧光法检测巨噬细胞产生活性氧水平、线粒体膜电位和对白色念珠菌的吞噬作用;Western蛋白印迹法检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)P38蛋白磷酸化水平;Griess法检测细胞培养上清一氧化氮含量.结果 AMA作用2h对RAW264.7巨噬细胞增殖无明显影响,当作用时间延长到24和48 h后,可显著抑制RAW264.7巨噬细胞增殖(P＜0.01).AMA作用2h可显著诱导RAW264.7巨噬细胞产生活性氧(P＜0.01),降低线粒体膜电位(P＜0.01).AMA可增强RAW264.7巨噬细胞对白色念珠菌的吞噬功能,显著降低脂多糖诱导的巨噬细胞炎症介质一氧化氮的产生(P＜0.01).AMA显著诱导MAPK P38磷酸化(P＜0.01).结论 AMA能够诱导RAW264.7巨噬细胞线粒体损伤,增强巨噬细胞对白色念珠菌的吞噬功用,降低脂多糖诱导的炎症反应,可能与激活MAPK P38磷酸化,进而激活MAPK信号转导通路有关.
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抗霉素A诱导血小板凋亡的分子机制研究
目的：探讨抗霉素 A（AMA）诱导血小板凋亡及其分子机制。方法取健康志愿者单采血小板，离心洗涤得到洗涤血小板，将洗涤血小板与不同浓度的 AMA 孵育后，流式细胞术检测线粒体跨膜电位（ΔΨm）去极化、磷脂酰丝氨酸（PS）暴露、细胞内活性氧（ROS）、线粒体 ROS、P-选择素表达和整合素αⅡbβ3活化；Western blot 法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）的活化。在抑制试验中，先将洗涤血小板与线粒体靶向的 ROS 拮抗剂 Mito-TEMPO 预孵育，然后再与 AMA 孵育，流式细胞术检测相关凋亡指标。结果AMA 剂量依赖性诱导血小板ΔΨm 去极化、PS 暴露、细胞内ROS 和线粒体 ROS 升高以及 Caspase-3活化；但是 AMA 不能诱导血小板活化。线粒体靶向的 ROS 拮抗剂抑制 AMA诱导的血小板ΔΨm 去极化、PS 暴露、Caspase-3活化以及线粒体 ROS 的生成。结论 AMA 能够诱导血小板发生凋亡，线粒体 ROS 可能在 AMA 诱导的血小板凋亡过程中起重要作用。
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抗霉素诱导肾小管上皮细胞铁死亡的实验研究
目的:观察抗霉素诱导肾小管上皮细胞发生铁死亡(ferroptosis)的现象,初步探讨铁死亡参与急性肾损伤的病理生理机制.方法:以1、2.5、5、10 μmol/L抗霉素A(antimycin A)干预人近曲小管上皮细胞(HK-2)2、4、8、16、24h.MTT法检测细胞存活率,乳酸脱氢酶检测细胞活性,透射电镜检测细胞线粒体形态,Western blot检测凋亡关键蛋白(caspase3)活化,流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS).结果:HK-2细胞存活率随着抗霉素作用剂量和时间的增加而下降(P＜0.01).2.5 μmol/L抗霉素A干预HK-2细胞2h后,细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)释放明显增加(P＜0.01),电镜观察发现铁死亡特征性改变,细胞线粒体膜密度增加,线粒体嵴减少,细胞内ROS含量明显增加(P＜0.05).与抗霉素模型组相比,铁螯合剂去铁胺(deferoxamine)、铁死亡特异性拮抗剂Ferrostatin-1预处理HK-2细胞能明显减少抗霉素A损伤后LDH的释放、线粒体损伤及ROS的产生(P＜0.05),且该过程不伴有caspase3活化.结论:在缺氧诱导肾小管上皮细胞损伤过程中,铁死亡可能是肾小管上皮细胞较早出现的损伤方式;抑制细胞铁死亡的发生可以减轻缺氧对肾小管上皮细胞的损害.
