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川芎嗪促进放射损伤小鼠骨髓微环境修复的信号传导机理研究
目的探讨川芎嗪对放射损伤小鼠骨髓造血微环境的影响及其信号传导机理.方法小鼠经60Co γ射线(6.0 Gy)照射后即胃饲磷酸川芎嗪注射液,4 mg/只,2次/d,连续13 d.分别于照射后第3,7,14天处死小鼠,取尺骨制备石蜡切片,用免疫组化方法检测骨髓组织中因子Ⅷ相关抗原和VEGF受体flk-1的表达水平;培养骨髓基质细胞,用Western blot方法分析骨髓基质细胞黏着斑激酶(磷酸化FAK)的表达水平.结果川芎嗪组小鼠造血恢复明显比对照组快,照射后第14天,川芎嗪组骨髓组织flk-1染色吸光度值(A)显著高于对照组(P＜0.05),其基质细胞磷酸化FAK的表达在第14天时已接近正常水平,而对照组的表达仍较弱.结论川芎嗪可以促进骨髓内皮细胞上flk-1的表达和基质细胞中FAK的磷酸化,是改善放射损伤小鼠骨髓微环境、促进造血恢复的的机理之一.
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肝癌组织细胞骨架连接蛋白和焦点黏附激酶的表达及其意义
目的:检测细胞骨架连接蛋白(membrane cytoskeleton cross linker protein,Ezrin)、焦点黏附激酶(focal adhesion kinase,FAK)在肝癌组织中的表达及其临床意义.方法:手术切除肝癌标本79例(其中62例附癌旁正常组织),应用免疫组化检测Ezrin,FAK的表达.结果:免疫组化染色显示,Ezrin和FAK的表达与肝癌的浸润、转移呈正相关,与分化程度呈负相关(P<0.05).结论:Ezrin,FAK的高表达与肝细胞癌的侵袭转移关系密切,它们可能是影响肝癌患者预后以及癌细胞转移的重要因素.
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应用组织芯片研究焦点黏附激酶在肝细胞肝癌中的表达
目的:检测焦点黏附激酶(focal adhesion kinase,FAK)在肝细胞肝癌(HCC)中的表达.方法:将148例HCC、137例癌旁正常肝组织及其10例正常肝组织制成组织芯片,直径为0.6 mm;采用免疫组织化学SP法,研究FAK表达情况.结果:HCC组织中FAK的阳性表达率为60.14%,癌旁正常组织FAK的阳性表达率为20.44%,正常肝组织中FAK阳性表达率为0%.在HCC组织中FAK阳性表达率均高于癌旁正常肝组织和正常肝组织(P<0.005);有门静脉分支癌栓组和包膜有侵犯组FAK阳性表达率均高于无门静脉分支癌栓组和包膜无侵犯组(P<0.005和P<0.01).结论:FAK在HCC癌组织中表达明显增高,参与肿瘤的浸润和转移,可作为HCC的治疗和判断预后的一个生物学指标.
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PTEN诱导膀胱癌BIU-87细胞凋亡机制研究
目的 研究抑癌基因PTEN对人膀胱癌细胞株BIU-87细胞凋亡的影响,并探讨其相关机制.方法 将携带野生型PTEN基因及两种突变型基因C124A-PTEN和G129E-PTEN的真核表达载体转染BIU-87细胞,Western blot检测PTEN蛋白表达及蛋白激酶B(PKB/Akt)、焦点黏附激酶(FAK)磷酸化水平的变化;应用流式细胞仪技术和激光共聚焦显微镜技术,分析转染和对照细胞在黏附状态下的凋亡情况.结果 与对照组细胞相比,转染野生型PTEN的BIU-87细胞(WT-PT/87)FAK和Akt的磷酸化水平分别降低了59％(P<0.01)和89％(P<0.01),G129E-PT/87细胞内磷酸化FAK和磷酸化Akt的水平分别下降了62％(P<0.01)和46％(P<0.05),而C124A-PT/87细胞中FAK和Akt的磷酸化水平均无明显变化.WT-PT/87与G129E-PT/87细胞凋亡率分别升至(18.5±2.1)％(t=17.34,P<0.01)和(10.1±0.5)％(t=14.58,P<0.01),明显高于对照细胞,而C124A-PT/87与GFP/87细胞凋亡率无明显升高.结论 抑癌基因PTEN诱导膀胱癌细胞的凋亡与其脂质磷酸酶抑制Akt的磷酸化有关.其蛋白磷酸酶活性参与调节Akt磷酸化,其机制可能与调节FAK的磷酸化有关.
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抑癌基因PTEN依赖其磷酸酶活性诱导人膀胱癌细胞BIU-87失巢凋亡机制
目的 研究抑癌基因PTEN对人膀胱癌细胞株BIU-87失巢凋亡的影响并探讨其可能的机制.方法 将携有野生型PTEN基因及2种突变型基因C124A-PTEN和G129E-PTEN的真核表达载体转染BIU-87细胞,利用Western blot法,检测PTEN蛋白表达与蛋白激酶B(PKB/Akt)、焦点黏附激酶(FAK)磷酸化水平的变化,并应用流式细胞仪技术和激光共聚焦显微镜技术,分析各种细胞在黏附与失黏附状态下的凋亡.结果 与对照组相比,转染野生型PTEN的BIU-87细胞中, FAK和Akt的磷酸化水平分别降低了59%(P<0.01)和89%(P<0.01),且失巢凋亡率由(8.32±0.57)%增至(37.62±2.12)%;G129E-PT/87细胞内磷酸化FAK和磷酸化Akt的水平分别下降了62%(P<0.01)和46%(P<0.05)且失巢凋亡率为(32.57±1.72)%;而转染C124A-PTEN的BIU-87细胞中,FAK和Akt的磷酸化水平及失巢凋亡率均无明显变化.结论 抑癌基因PTEN可依赖其磷酸酶活性抑制FAK和Akt的磷酸化,并诱导膀胱癌细胞发生失巢凋亡.
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四物汤配方颗粒对骨髓抑制小鼠骨髓基质细胞某些物质表达的影响
目的 观察四物汤配方颗粒对骨髓抑制小鼠造血功能的影响,探讨其对造血微环境调控作用机制.方法 50只小鼠随机分成5组:正常组、模型组、3个不同剂量给药组.观察各组骨髓有核细胞(BMNC)对骨髓基质细胞(BM-SC)的黏附能力,应用免疫印迹法(WB)测定四物汤配方颗粒对骨髓抑制小鼠BMSC层粘连蛋白(LN)、纤维粘连蛋白(FN)、焦点黏附激酶(FAK)的影响.结果 四物汤配方颗粒各组均能明显促进LN、FN、FAK表达;并具有剂量依赖性,表现出高剂量组BMSC对正常骨髓细胞的黏附能力明显、对LN、FN、FAK表达高.结论 四物汤配方颗粒可通过对骨髓抑制小鼠造血微环境的改善,促进骨髓造血功能的恢复.
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焦点黏附激酶和基质金属蛋白酶2在肝细胞肝癌中的表达
目的:检测焦点黏附激酶(FAK)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)在肝细胞肝癌中的表达,并探讨二者之间的关系.方法:将148例肝细胞肝癌、137例癌旁正常肝组织及10例正常肝组织制成组织芯片,直径为0.6mm;采用免疫组织化学SP法,研究FAK和MMP-2的表达情况.结果:148例肝细胞肝癌组织中FAK和MMP-2的阳性表达率分别为60.1%(89/148)和57.4%(85/148);137例癌旁正常组织FAK和MMP-2的阳性表达率分别为20.4%(28/137)和22.6%(31/137);10例正常肝组织中FAK和MMP-2的阳性表达率均为0%.两者在肝细胞肝癌组织中阳性表达率高于癌旁正常肝组织和正常肝组织(P＜0.005);有门静脉分支癌栓组和包膜有侵犯组FAK阳性表达率均高于无门静脉分支癌栓组和包膜无侵犯组(P＜0.005或P＜0.01);有门静脉分支癌栓组、包膜有侵犯组及分化差组MMP-2阳性表达率均高于无门静脉分支癌栓组、包膜无侵犯组及分化好组.FAK的阳性表达与MMP-2的阳性表达有密切联系(P＜0.005).结论:FAK和MMP-2在肝细胞肝癌癌组织中表达明显增高,参与肿瘤的浸润和转移,且FAK和MMP-2在肝细胞肝癌癌组织中表达具有密切联系,可作为肝细胞肝癌治疗和判断预后的一个生物学指标.
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细胞培养密度对MCF7细胞calpain2和FAK的水解及活性影响
目的:探讨细胞培养密度对乳腺癌MCF7细胞钙激活中性蛋白酶2(calpain 2)和焦点黏附蛋白(FAK)的水解及活性的影响.方法:常规培养乳腺癌细胞MCF7,分别以1×106、5×106、1×107个细胞传代于不同的6 cm皿中,培养36 h后,形成不同的培养密度(分别为低密度、正常密度和高密度),裂解细胞,提取蛋白行Western blot检测calpain 2和FAK的表达,用磷酸化抗体检测FAK的Y397位点磷酸化水平;MCF7细胞高密度培养并calpain 2抑制剂处理后,用Western blot法检测FAK水解情况和磷酸化水平.结果:不同密度培养对calpain 2的表达没有明显影响,但可影响calpain 2的水解,培养密度加大,水解程度加强;培养密度也可以影响FAK的水解模式,低密度培养细胞的FAK以较大的水解片段为主,高密度培养的FAK则以较小片段为主,高密度培养细胞FAK Y397磷酸化水平比低密度的低;给予calpain 2特异性抑制剂后,高密度培养细胞FAK大片段增多,小片段减少,其Y397位点的磷酸化水平增高.结论:细胞高密度培养可使MCF7细胞calpain 2的活性增强,FAK的水解程度加大,降低FAK的磷酸化.
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牙龈卟啉单胞菌对牙龈上皮细胞焦点黏附成分paxillin和FAK的作用
目的:研究牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)对牙周组织的破坏机制,探讨菌毛的致病作用.方法:应用Western blot法检测P.gingivalis ATCC 33277及其fimA缺陷突变株对Hela细胞及永生化人牙龈上皮细胞 (immortalized human gingival epithelial cells, IHGE细胞) 的焦点黏附成分——焦点黏附蛋白paxillin和焦点黏附激酶 (focal adhesion kinase,FAK) 蛋白表达的影响.结果:P.gingivalis ATCC 33277野生株和fimA缺陷突变株能够使HeLa细胞和IHGE细胞的paxillin和FAK发生降解,fimA缺陷突变株对paxillin和FAK的降解能力较野生株显著减弱.在IHGE细胞中,paxillin和FAK的降解呈时间依赖性和MOI依赖性.结论:菌毛介导的P.gingivalis的黏附和侵入可能对焦点黏附成分的降解起促进作用,IHGE细胞较Hela细胞更适用于牙周致病菌的研究.
