首页 > 文献资料
-
大鼠法尼酯X受体慢病毒构建及鉴定
目的:构建大鼠法尼酯X受体(rFXR)慢病毒,为研究FXR在原发性肝细胞癌中的分子机制奠定基础.方法:以pCMX-rFXR (NM_021745.1)为模板,将rFXR克隆到pWPXL表达载体中,酶切及DNA测序鉴定后转染HEK293T细胞,包装重组慢病毒rFXR sh-RNA.Western blot鉴定后,感染Huh7细胞进行功能检测.结果:证实pWPXL-rFXR sh-RNA构建及病毒包装成功;感染Huh7后,rFXR表达明显提高;FXR靶基因SHP和BSEP的表达增加.结论:pWPXL-rFXR sh-RNA慢病毒构建及包装成功,为研究FXR的生物学功能奠定基础.
-
CDCA在C57BL/6小鼠中上调肝脏成纤维细胞生长因子21表达及其效应
目的 研究法尼酯X受体(farnesoidXreceptor,FXR)的激活对C57 BL/6小鼠肝脏中纤维细胞生长因子2( fibroblast growth factor 21,FGF21)基因表达的影响.方法 将18只3～4周龄C57BL/6小鼠随机分为3组,分别使用不同浓度鹅脱氧胆酸(chenodeoxy cholic acid,CDCA,0、10 mg/kg和50 mg/kg)给小鼠灌胃7d,处死后分别提取小鼠肝脏总RNA和总蛋白,采用RT-PCR法和Western blot法检测各组小鼠FGF21 RNA和蛋白表达水平的变化；同时用酶法测定检测小鼠血甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)及血糖( GLU)变化.结果 C57BL/6小鼠肝脏中FGF21 RNA和蛋白的表达水平呈CDCA剂量依赖型增高；小鼠血脂及血糖测定结果显示:TG,TC和血糖随CDCA浓度的升高而下降.结论 CDCA可上调C57BL/6小鼠肝脏中FGF21的表达并导致血TG、TC及GLU下降.
关键词： 法尼酯X受体 成纤维细胞生长因子21 鹅脱氧胆酸 血脂 血糖 -
法尼酯X受体上调载脂蛋白F在肝细胞中的表达
目的 研究法尼酯X受体(farnesoid X receptor,FXR)的激活在肝细胞中对载脂蛋白F(apolipoprotein F,ApoF)基因表达的影响.方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和Western blot检测不同浓度鹅脱氧胆酸(chenodeoxy cholic acid,CDCA,0、25、50、100 μmol/L)和人工合成FXR配体GW4064(0、0.02、0.2、2μmol/L)处理后HepG2和L02细胞中的小分子异二聚体伴侣(small heterodimer partner,SHP)及ApoF的mRNA和蛋白水平变化.结果 结果①经FXR天然配体CDCA处理24 h后,不同浓度处理组细胞SHP mRNA水平、ApoF mRNA和蛋白水平均显著高于未处理组(P<0.05).②经FXR人工合成配体GW4064处理24 h后,不同浓度处理组细胞SHP mRNA水平、ApoF mRNA 和蛋白水平均显著高于未处理组(P<0.05).结论 肝细胞株HepG2和L02经FXR配体CDCA或GW4064处理后,FXR 被激活,并上调ApoF的mRNA和蛋白水平.
-
法尼醋X受体上调肝细胞中成纤维细胞生长因子21的表达
目的 研究法尼酯X受体(farnesoid X receptor,FXR)对成纤维细胞生长因子21(fibroblast growth factor,FGF21)表达的影响.方法 用FXR特异性激动剂终浓度为0、50、100 μmol/L的CDCA和0、1、5μmol/L的GW4064分别处理人肝癌细胞株HepG2和人胚胎肝细胞L02细胞后,用逆转录-聚合酶链法(RT-PCR)检测FXR特异性靶基因小异源二聚体配体(small heterodimer parterner,SHP)和FGF21 mRNA的表达变化,再用Western blot法检测FGF21蛋白表达水平的变化.结果 用FXR特异性激动剂CDCA和GW4064刺激后,分别比较HepG2和L02细胞SHP与(β-actin mRNART-PCR产物光密度比值,比值均明显增高(P<0.05),反应HepG2和L02细胞内SHP mRNA水平均明显升高,表明FXR在2种细胞中被激活;分别比较HepG2和L02细胞FGF21与β-actin RT-PCR产物光密度比值以及FGF21与β-actin蛋白光密度比值,比值均明显升高(P<0.05),表明FGF21 mRNA和蛋白水平均明显升高.结论 激活的FXR可以上调FGF21的表达.
关键词： 法尼酯X受体 成纤维细胞生长因子21 鹅脱氧胆酸 肥胖 -
法尼酯X受体可下调肝细胞中肝型脂肪酸结合蛋白的表达
目的 研究法尼酯X受体( farnesoid X receptor,FXR )对肝型脂肪酸结合蛋白(liver fatty acid-binding protein,L-FABP)表达的影响.方法 用终浓度为50、100 μmol/L的鹅脱氧胆酸(chenodesoxycholic acid,CDCA)以及1、5 μmol/L 的GW4064分别处理人胚胎肝细胞LO2和人肝癌细胞株HepG2后,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测FXR特异靶基因小异二聚体配体(small heterodimer partner,SHP)和L-FABP mRNA表达,再用Western blot法检测L-FABP 蛋白水平的变化.结果 LO2和HepG2细胞经FXR特异性激动剂CDCA以及GW4064刺激后,细胞内的SHP mRNA 水平均明显升高,表明FXR在这两种细胞中是有功能活性的;而L-FABP mRNA和蛋白水平显著下降(P<0 05).结论 激活后的FXR可抑制L-FABP的表达活性.
-
法尼酯X受体对脂肪酸合酶表达的影响
目的 探讨法尼酯X受体(farnesoid X receptor,FXR)对脂肪酸合酶(fatty acid synthetase,FAS)表达的影响.方法 用FXR激动剂CDCA作用人肝癌细胞株(HepG2),应用RT-PCR和Western blotting分别从mRNA水平和蛋白质水平检测FAS的表达情况.结果 用不同浓度的CDCA(25、50、75 μmol/L)分别作用于HepG2细胞,6、12、24、48 h后,FAS mRNA和蛋白质水平呈时间和剂量依赖性下调.结论 FXR激动剂可抑制脂肪酸合酶的表达.
-
法尼酯X受体的研究进展
法尼酯X受体(farnesoid X receptor, FXR)是核受体超家族的成员,可被内源性配体胆汁酸激活,在胆汁酸、胆固醇及脂蛋白代谢中起着十分重要的作用.随着新配体及靶基因的发现,FXR展示了更多的生理或病理作用.本研究将对FXR研究进展作一综述.
-
GW4064在人前列腺癌细胞中对核受体结合蛋白1的影响
目的 探讨在人前列腺癌细胞DU145中法尼酯X受体(farnesoidX receptor,FXR)的特异性激动剂GW4064对核受体结合蛋白1(nuclear receptor binding protein 1,NRBP1)的表达调控作用.方法 采用MTT法检测不同浓度GW4064(浓度分别为0.5、5.0、10.0 μmol/L)作用24 h后对DU145细胞增殖的影响.用FXR的特异性激动剂GW4064处理DU145细胞24 h后,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测FXR的特异性靶基因小异二聚体伴侣分子(small beterodimer panner,SHP)转录水平的表达情况;随后在转录水平和蛋白水平检测NRBP1的表达.结果 FXR的特异性配体GW4064各浓度实验组对细胞的活性和增殖无影响(P＞0.05).GW4064作用于DU145细胞后,SHP转录水平呈剂量依赖性升高,表明FXR在DU145细胞中具有功能活性.FXR经过活化后在转录水平和翻译水平对NRBP1的抑制作用呈剂量依赖性.结论 FXR在DU145细胞中可抑制NRBP1的表达.
-
法尼酯X受体对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块中巨噬细胞肝脂酶表达的影响
目的 探讨法尼酯X受体(FXR)激动剂GW4064对高脂饮食喂养ApoE-/-小鼠主动脉粥样硬化斑块病理变化、巨噬细胞中肝脂酶(HL)表达的影响及意义.方法 雄性ApoE-/-小鼠给予高脂喂养7周,建立动脉粥样硬化模型.随机分为ApoE-/-模型组、FXR激动剂高剂量(20 mg/kg)组、FXR激动剂低剂量(10 mg/kg)组,相同遗传背景的同龄正常C57BL/6小鼠作为对照组.给药喂养8周后处死,取主动脉全程,冰冻切片后行油红0和HE染色观察斑块面积和厚度.免疫组织化学染色观察FXR和HL的表达变化.分别采用GPO-PAP法和直接法测定小鼠血液中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平.结果 FXR激动剂20 mg/kg组的血脂水平显著低于ApoE-/-模型组(P＜0.05),油红0和HE染色显示FXR激动剂不同程度减小主动脉各段斑块的面积.免疫组化染色中FXR可显著降低HL的表达水平(P＜0.05).结论 FXR可通过下调巨噬细胞中HL的表达减少小鼠泡沫细胞的形成和动脉粥样硬化斑块的产生,以上研究成果为寻找动脉粥样硬化免疫治疗的靶点提供了方向.
-
激活法尼酯X受体上调核心蛋白聚糖表达对肾小管上皮细胞转分化的作用
目的 研究激活法尼酯X受体(FXR)对核心蛋白聚糖(decorin)表达的变化及其对肾小管上皮细胞-间充质转分化的影响.方法 (1)采用不同浓度的FXR特异性激动剂CDCA及拮抗剂Guggulsterones处理肾小管上皮细胞(HK-2),观察decorin的mRNA和蛋白表达的变化；(2)将HK-2细胞分为对照组,TGF-β1诱导组(20 ng/ml),TGF-β1诱导加CDCA组(100 μmol/L)和TGF-β1诱导加CDCA、Guggulsterones共处理组,48 h后观察各组细胞的形态变化,检测各组decorin 、E-cadherin和α-SMA的mRNA和蛋白表达的情况.结果 (1)CDCA激活HK-2细胞FXR,decorin的mRNA和蛋白表达升高,且呈剂量依赖.在100 μmol/L CDCA和不同浓度Guggulsterones共处理HK-2细胞,随着Guggulsterones浓度升高,decorin的mRNA和蛋白表达逐渐减低；(2)RT-PCR和Western blot显示,decorin在对照组、TG F-β1组无表达,在TGF-β1 +CDCA组明显上调(与TGF-β1组比,P＜0.05),在TGF-β1+CDCA+Guggulsterones组表达显著下降；E-cadherin在对照组高表达,在TGF-β1组显著下调,在TGF-β1+CDCA组显著上调(与TGF-β1组比,P＜0.05),在TGF-β1 +CDCA+Guggulsterones组表达显著下降；α-SMA在对照组无表达,在TGF-β1组显著上调,在TGF-β1+CDCA组显著下调(与TGF-β1组比,P＜0.05),在TGF-β1 +CDCA+Guggulsterones组表达显著上调.结论 CDCA激活肾小管上皮细胞FXR能够通过上调decorin的表达,从而抑制TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞-间充质转分化.
-
核受体参与调控细胞自噬的研究进展
核受体是一种转录调节因子,参与细胞生长、分化、凋亡、物质代谢及肿瘤形成等几乎所有的生物学过程,并可受与其结合的小分子调控.自噬是一种特殊的程序性细胞死亡方式,是高度保守的代谢过程,一旦发生自噬缺陷或自噬过量都会引起相应疾病的发生发展.近年来,众多研究表明核受体与自噬相关.因此,本文主要综述核受体参与调控细胞自噬的研究进展,着重介绍几种核受体参与细胞自噬调控的机制研究,以期了解核受体参于调节细胞自噬的分子基础,为治疗相应疾病提供可能的思路及治疗策略.
-
法尼酯X受体的激活抑制结肠癌细胞生长
目的 探讨法尼酯X受体(FXR)的激活是否抑制结肠癌细胞的生长.方法 对人结肠癌HCT-116细胞进行体外培养,用四唑氮蓝还原法(MTT)和流式细胞仪测定FXR特异性激动剂GW4064对结肠癌HCT-116细胞生长的抑制作用,同时应用RT-PCR方法检测其FXR mRNA及VEGF mRNA的表达.结果 FXR特异性激动剂GW4064可上调结肠癌HCT-116细胞的FXR mRNA表达,下调VEGF mRNA的表达;对结肠癌HCT-116细胞的生长具有明显的抑制作用,并促进结肠癌HCT116细胞的凋亡,且均呈剂量及时间依赖关系.结论 FXR特异性激动剂GW4064可以显著抑制结肠癌HCT116细胞的生长,激活FXR受体可能为结肠癌的治疗提供一种潜在的靶点.
-
FXR激动剂的研究进展
FXR是一种胆汁酸激活的核激素受体，目前已在人、大鼠和小鼠等多个物种成功克隆 FXR基因，FXR在人体肝脏、肠道等多组织高表达，分别激动肝脏和肠道的FXR可以分别对肝脏疾病、肠道炎症的治疗开辟新的治疗途径。因而对FXR激动剂的新研究进展进行综述。
-
有关FXR调节代谢方面的研究进展
FXR作为一种胆汁酸激活的核受体，通过调控一系列靶基因的表达，在代谢方面的发生发展中有重要影响。因此，FXR有望作为治疗临床上代谢相关疾病的药物新靶点。因而对FXR在调节代谢方面的新研究进展进行综述。
