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镁硒对氟中毒小鼠基质金属蛋白酶20及激肽释放酶4表达的影响
目的 研究镁硒对氟中毒小鼠牙胚基质金属蛋白酶20 (matrix metalloproteinases-20,MMP-20)及激肽释放酶4(kallikrein4,KLK4)表达的影响,探讨氟牙症的发病机制.方法 80只SPF级雄性ICR小鼠,按体质量采用随机数字表法分为对照组、加镁组、加硒组、加氟组、镁硒组、镁氟组、硒氟组、镁硒氟组共8组.对照组、加镁组、加硒组、镁硒组饮用双蒸水,加氟组、镁氟组、硒氟组、镁硒氟组饮用F-质量浓度为50 mg/L的氟化双蒸水.对照组和加氟组常规饲料喂养,加镁组和镁氟组用添加MgSO4·7H20 162.5 mg/kg的常规饲料喂养,加硒组和硒氟组用添加Na2SeO3·5H20 2 mg/kg的常规饲料喂养,镁硒组和镁硒氟组用添加MgSO4·7H20 162.5 mg/kg+Na2SeO3·5H20 2 mg/kg的常规饲料喂养.42 d后处死小鼠,获取切牙标本,行免疫组化染色观察MMP-20和KLK4的表达变化.结果 加氟组MMP-20阳性表达的灰度值(133.1±10.3)显著高于对照组(116.8±10.0)、加镁组(113.6±9.6)、镁硒组(108.2±15.2)、镁氟组(111.1±8.1)及镁硒氟组(108.2±11.0) (F=3.864,P＜0.05);镁硒氟组MMP-20阳性表达的灰度值显著低于加硒组(125.4±7.9)、加氟组及硒氟组(126.2±2.8) (F=3.864,P＜0.05).镁硒组KLK4阳性表达的灰度值(117.2±11.7)显著低于其余各组(对照组:137.3±7.9、加镁组:144.2±7.7、加硒组:138.88±13.31、加氟组:149.7±12.4、镁氟组:148.9±7.5、硒氟组:140.61±17.04、镁硒氟组:140.7±7.3)(F=3.668,P＜0.05).析因分析表明,镁对氟中毒小鼠MMP-20的表达影响显著(F=42.613,P＜0.05),硒对氟中毒小鼠KLK4的表达影响显著(F=6.649,P＜0.05).结论 过量氟可以抑制MMP-20的表达,但对KLK4的影响不明显;镁硒联合应用对氟牙症的形成有一定的拮抗作用.
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人牙冠及根部牙本质内基质金属蛋白酶8,20的测定及分析
背景:基质金属蛋白酶被激活后可降解细胞外基质,其对牙本质胶原的破坏对于牙周病、牙本质龋病、牙髓炎的进展及牙本质黏结的失败有重要影响.目的:检测冠根部牙本质内基质金属蛋白酶的含量及其分布特点.方法:牙本质粉经盐酸胍提取,然后经EDTA循环脱矿,再经盐酸胍提取.采用免疫印迹与免疫酶联吸附反应检测提取物中基质金属蛋白酶8,20的含量,对比二者在牙冠部和牙根部内的分布特点.结果与结论:免疫印迹结果及免疫酶联吸附检测结果均显示,提取物中含有基质金属蛋白酶8,20.未矿化牙本质提取蛋白G1中基质金属蛋白酶8,20含量较低,EDTA反复提取矿化牙本质蛋白E1中含量较高,脱矿后提取蛋白G2中2种基质金属蛋白酶的含量低.基质金属蛋白酶8,20在牙冠和牙根部表达量基本类似.提示冠根部牙本质中含有基质金属蛋白酶8,20,它们大多存在于矿化牙本质中,其在牙根和牙冠中的含量基本类似.
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转录因子c-fos/c-jun调控成釉细胞基质金属蛋白酶20基因的表达
背景：基质金属蛋白酶20是在成釉细胞中特异性表达的一种蛋白酶，其在牙齿釉质发育过程中具有重要作用。从分子角度研究基质金属蛋白酶20可受到的调控机制，为进一步做动物实验奠定基础。目的：通过研究转录因子c-fos/c-jun对小鼠成釉细胞基质金属蛋白酶20基因的调控作用，初步确定c-fos/c-jun在牙釉质发育中的作用。方法：首先构建 c-fos 真核表达载体重组质粒，分别利用双荧光素酶基因检测报告系统和定时定量 RT-PCR法分析c-jun、c-fos转染成釉细胞对基质金属蛋白酶20基因活性的影响；并利用基因定点突变和双荧光素酶基因检测报告系统进一步分析c-jun、c-fos对基质金属蛋白酶20基因活性的影响。结果与结论：双荧光素酶基因检测报告系统和定时定量RT-PCR法分析显示c-jun、c-fos转染转染小鼠成釉细胞后，基质金属蛋白酶20基因表达显著上调；突变基质金属蛋白酶20启动子的AP1结合位点后，c-fos/c-jun失去上调基质金属蛋白酶20启动子的转录活性的作用。结果提示c-fos/c-jun对基质金属蛋白酶20基因表达具有重要的调节作用，表明其在釉质发育过程中有其重要的生物学意义。
