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苯乙酸对胶质瘤U-251细胞中RNA编辑酶表达的影响
目的 观察正常人脑胶质细胞和胶质瘤U-251细胞中RNA编辑酶RED1,RED2 mRNA水平的表达,并观察诱导分化剂苯乙酸对U-251细胞中RED1 mRNA表达的影响.方法 对原代培养的正常人脑胶质细胞和胶质瘤U-251细胞,应用RED1,RED2全长序列合成引物及合成的特异引物,分别通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测RED1,RED2 mRNA水平的表达.用RT-PCR及图像分析法,检测胶质瘤细胞U-251在不同浓度的苯乙酸处理前后,RED1 mRNA表达水平的变化.RED1基因表达水平用基因/β-肌动蛋白(β-actin)灰度比值表示.结果 RED1在正常人脑胶质细胞中表达极弱,在高恶性度的胶质瘤U-251细胞中明显表达.诱导分化剂苯乙酸作用后,U-251细胞中RED1表达水平降低.RED2在正常人脑胶质细胞及苯乙酸处理前后的胶质瘤细胞中,均未见表达.结论 RED1 mRNA水平高表达,可能与高恶性度胶质瘤的发生有关.诱导分化剂苯乙酸可能通过降低RED1mRNA水平的表达,作用于胶质瘤细胞的RNA编辑过程.
关键词： 胶质瘤 苯乙酸 逆转录-聚合酶链反应 -
苯乙酸对结直肠癌HCT-8细胞增殖抑制及同源盒基因表达的影响
目的探讨苯乙酸(PA)对结直肠癌HCT-8细胞株细胞增殖及同源盒(HOX)基因表达的影响.方法应用噻唑蓝(MTT)比色法,以1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mmol/L的PA作用于HCT-8细胞,分别于24、48、72 h对细胞增殖进行检测.根据引物的不同,将已知的22种HOX基因分为3组(P1、P2、P3),应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测应用PA前后3组HOX基因mRNA的表达水平.HOX基因(组)表达水平用基因(组)与β肌动蛋白(β-actin)灰度比值表示.结果 1.0～5.0 mmol/L PA作用HCT-8细胞24～72 h,随着PA浓度的增加或作用时间的延长,细胞生长抑制率明显增加,PA作用24 h为5.1%～24.3%,48 h为16.7%～72.3%,72 h为30.2%～93.4%.RT-PCR法检测,结直肠癌HCT-8细胞中P1组HOX基因表达(0.770 1±0.088 3)明显强于P2组(0.122 1±0.078 2)、P3组(0.180 6±0.081 1,P<0.01).应用2.0 mmol/L PA作用72 h后,P1组HOX基因表达(0.578 1±0.083 6)显著减弱,P2、P3组HOX基因表达(0.394 1±0.081 9)、(0.560 1±0.073 6)显著增强,与用药前比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论 PA可有效抑制结直肠癌HCT-8细胞的增殖;PA对HOX基因具有明显的调控作用,HOX基因有望成为结直肠癌基因治疗靶点.
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苯乙酸对脑胶质瘤细胞超微结构的影响
本实验旨在观察诱导分化剂苯乙酸(PA)对脑胶质瘤细胞形态及细胞周期的影响,在细胞水平探讨苯乙酸的作用机理.
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苯乙酸对人结直肠癌细胞HCT-8的G1细胞周期阻滞及增殖抑制作用
目的 探讨诱导分化剂苯乙酸(PA)对人结直肠癌细胞系HCT-8细胞周期及增殖的影响.方法 应用MTT比色法,以1.0,2.0,3.0,4.0,5.0 mmol/L的PA作用于体外培养的HCT-8细胞,分别于24,48,72h后对细胞增殖进行检测;流式细胞术分析细胞周期.结果 随着PA浓度的增加(1～5 mmol/L)或药物作用时间的延长(24～72 h),肿瘤细胞生长抑制率明显增加.PA1～5 mmol/L作用24h细胞生长抑制率为5.1%-24.3%,48h为16.7%-72.3%,72h为30.2%-93.4%.PA作用细胞72h后,G0/G1期比例显著下降,S期比例相对升高,组间差异显著(P＜0.05).结论 PA在诱导分化结直肠癌HCT-8细胞过程中,可诱导G1细胞周期阻滞,抑制细胞增殖.
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苯丙酮尿症筛查检测方法进展
苯丙酮尿症(phenylketonuria,PKU)是一种常染色体隐性遗传氨基酸代谢病,为一种较常见的遗传性代谢病,发病率约为1/10 000,它是由于患儿肝脏内苯丙氨酸羟化酶(phenylalanine hydroxylase,PHA)先天性缺陷或突变,四氢生物蝶呤(tetrahydrobiopterin,BH4)辅因子的合成和BH4的再循环障碍,导致苯丙氨酸(phenylalanine,Phe)代谢障碍,无法将食物中摄入的Phe分解代谢为酪氨酸(tyrosine,Tyr)等被人体利用的生理活性物质,Phe及旁路代谢产物苯乙酸、苯乳酸、苯丙酮酸等在体内蓄积损害脑及神经细胞,并且不可逆转.
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青霉素类过敏病人外周血T淋巴细胞对不同抗原的增殖反应
目的:探讨青霉素过敏病人外周血T淋巴细胞识别抗原的特异性.方法:分离出16例青霉素类过敏病人,10例健康对照者外周血单个核细胞(PBMCs),分别用青霉素G(PG)钠盐及其侧链苯乙酸(PHA)、青霉素V(PV)钾及其侧链苯氧乙酸(PHOA)、氨苄西林(AMP)及其侧链α-氨基苯乙酸(NPG)、阿莫西林(AX)及其侧链对羟基-α-氨基苯乙酸(PHPG)和青霉素类抗生素母核6-氨基青霉烷酸(6-APA)对PBMCs进行刺激,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色分析法测定T淋巴细胞的增殖情况.结果:过敏病人组外周血T淋巴细胞受到上述9种抗原刺激后增殖阳性率分别为68.75%、50%、56.25%、37.5%、50%、37.5%、37.5%、31.25%和43.75%.对青霉素类药物的阳性率均比其相应结构侧链为高,其中对PG的阳性率高.对一种刺激物、一种青霉素类药物及其侧链、其他两种或两种以上抗原的阳性率分别为25%,12.5%,62.5%.可根据其增殖情况将T细胞系(TCLs)分为两类:一类为非特异性的同时对多种刺激物发生增殖反应;另一类为特异性的仅对一种刺激物、一种药物及其侧链发生增殖反应.结论:青霉素类抗生素及其侧链、母核均可刺激青霉素类过敏病人外周血T淋巴细胞增殖,增殖的TCLs可分为特异性和非特异性两种.
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芳香族脂肪酸类诱导分化剂的研究现状
恶性肿瘤是当今严重危胁人类生命的一类疾病。联合化疗是目前常用的治疗手段，但化疗药物既作用于肿瘤细胞，又可作用于正常的细胞，毒副作用大，病人不易耐受，治疗后肿瘤复发率高。诱导分化是指恶性肿瘤在体内分化诱导剂存在下，重新分……
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HPLC法测定6-氨基青霉烷酸中苯乙酸和青霉素G含量
目的 建立6-氨基青霉烷酸中苯乙酸和青霉素G含量的测定方法.方法 用苯基柱;甲醇:pH3.5磷酸盐缓冲溶液:水(30:10:60)为流动相;检测波长220nm;流速:1.5ml/min;进样量:10μl.结果 6-氨基青霉烷酸、苯乙酸峰和青霉素G峰完全分离;样品连续测定6次,苯乙酸和青霉素G的RSD分别为0.89%和0.92%;苯乙酸在0.005～0.040 mg/ml范围内、青霉素G在0.011～0.086 mg/ml 范围内呈良好的线性关系(相关系数均大于0.9999);苯乙酸和青霉素G平均回收率分别为99.12%(RSD=2.8%)和100.05%(RSD=1.O%);检测限分别为:3.36×10-5和4.61×10-5mg/ml;定量限分别为1.135×10-4和1.076×10-5mg/ml.结论 该方法专属性好、准确度高,可用于6-氨基青霉烷酸中杂质苯乙酸和青霉素G的含量测定.
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苯乙酸对胶质瘤C6细胞中Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的影响
目的 观察诱导分化剂苯乙酸(phenylacetate,PA)对Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的影响,探讨PA诱导胶质瘤C6细胞凋亡的机制.方法 体外培养胶质瘤C6细胞,实验组给予PA浓度5.0mmol/L诱导72h,对照组不用PA,用免疫细胞化学检测Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达,图像分析比较表达水平的差异.结果 免疫细胞化学检测,两组比较.Bcl-2无明显变化(P > 0.05),实验组的Bax和Caspase-3表达增强(P<0.01).结论 PA能增强Bax和Caspase-3的表达,其诱导胶质瘤C6细胞凋亡的机制可能与此有关.
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苯乙酸对大鼠胶质瘤C6细胞凋亡的影响
目的 观察苯乙酸(Phenylacetate,PA)对大鼠胶质瘤C6细胞凋亡的影响.方法 建立胶质瘤大鼠动物模型20个,其中治疗组10个给予腹腔注射PA治疗,对照组10个给予生理盐水注射,分别现察至濒死期获取标本,HE染色,TUNEL检测细胞凋亡.结果 治疗组大鼠平均生存时间(31.3±3.1)d比对照组平均生存时间(23.4±3.8)d增加,TUNEL检测治疗组细胞凋亡率(27.1±2.6)%比对照组凋亡率(1.8±0.3)%增加.结论 在体内PA能够抑制肿瘤生长,诱导胶质瘤C6细胞凋亡.
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苯丙氨酸及其代谢物影响P19细胞神经分化的形态学研究
本研究通过免疫组化及活细胞计数法研究了苯丙氨酸及其代谢物对P19细胞神经分化的影响.结果显示:在P19细胞神经分化诱导期加入苯丙氨酸及其代谢物可降低P19神经元存活率,导致P19神经元肿胀、崩解,神经突起纤细且分支少,神经纤维丝蛋白的染色性降低,同时发现P19神经元中多极神经元/单双极神经元的比例下降.本研究表明,苯丙氨酸及其代谢物可影响P19细胞的神经诱导和分化,提示母源性苯丙酮尿症中枢神经系统异常可能与其在脑发育早期神经诱导及分化过程中受到苯丙氨酸及其代谢物影响有关.
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苯乙酸对胶质瘤C6细胞增殖和凋亡的影响
目的 观察诱导分化剂苯乙酸(PA)对胶质瘤C6细胞增殖和凋亡的影响.方法 体外培养胶质瘤C6细胞,用0、2.5、5.0和7.5 mmol/L不同浓度的PA,分别在PA诱导24、48、72、96 h后,甲基噻唑基四唑(MTT)比色法检测细胞增殖抑制率,进一步用免疫细胞化学检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达变化,末端脱氧核糖核酸转移酶介导的脱氧尿嘧啶核苷酸缺口末端标记(TUNEL)检测细胞凋亡.结果 PA显著抑制c6细胞增殖,随药物浓度的增加和作用时间的延长,细胞增殖抑制率增加.PA作用后GFAP表达增强.随PA浓度和作用时间的增加,细胞凋亡率增加.结论 PA对胶质瘤C6细胞有显著的增殖抑制和诱导凋亡作用,呈时间剂量依赖性.
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贫铀对人肾小管上皮细胞的恶性转化及苯乙酸、亚硒酸钠的抑制作用
目的:探讨贫铀(DU)是否会引起人肾小管上皮细胞(HKC)向恶性表型转化,以及抑制物是否可有效地抑制这种恶性转化. 方法: 将HKC用可溶性DU溶液(0.063～0.500 g/L)作用24 h后,再与1.0～2.5 μmol/L的苯乙酸(PA)或亚硒酸钠(SS)孵育1 d～3 mo,观察不同代龄细胞的集落形成率、生长曲线、刀豆蛋白(ConA)凝集实验、半固体琼脂集落形成率及裸小鼠成瘤性;检测脆性组氨酸三联体(FHIT)蛋白在转化细胞中的表达. 结果: 传约20～30代后,HKC在半固体琼脂中形成集落,注入裸小鼠后成瘤. 部分转化细胞的FHIT蛋白表达也较正常HKC减弱. PA, SS可明显减少HKC在半固体琼脂集落形成率至(0.6±0.1)‰,裸小鼠也无皮下肿瘤形成(0/3)(P<0.05). 结论: DU可诱发HKC向恶性表型转化;用PA,SS抑制这种恶性转化的效果相似.
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LC-MS同时测定大型海藻中9个植物激素
目的:利用高效液相色谱-三重四极杆质谱(HPLC-QqQ MS)联用分析系统建立几种大型海藻中植物激素的分析方法.方法:冷冻干燥后的藻样用甲醇-水-甲酸(15∶ 4∶1,v/v/v)提取.9个中、酸性植物激素分别在Hypersil Gold C18色谱柱上实现分离,流动相为水(A)-甲醇(B),梯度洗脱,流速0.3 mL·min-1,柱温30℃.在电喷雾电离源正离子模式下,分别取m/z 130.0,204.1,136.1,220.0作为吲哚乙酸、异戊烯腺苷、异戊烯腺嘌呤和反式玉米素核苷的定量目标离子；在负离子模式下分别取153.3,91.3,93.2,143.2,59.5作为脱落酸、苯乙酸、水杨酸、赤霉素和茉莉酸的定量目标离子进行检测.结果:植物激素浓度在5 ～500μg·L-1范围内线性良好,检测限为0.0041 ～ 0.8622μg·L-1,回收率在61.33％～ 90.39％之间,RSD＜11％(n=3).结论:本法操作简单,准确可靠,适用于藻类植物激素的含量检测.
