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FOXA1、p16在子宫内膜癌中的表达情况及其临床意义
目的:探讨FOXA1、p16在子宫内膜癌组织中的表达情况及其临床意义.方法:采用免疫组化方法检测FOXA1、p16在68例子宫内膜癌组织、11例不典型增生组织及27例正常子宫内膜组织中的表达情况,分析2者与子宫内膜癌各临床病理指标的相关性以及2者表达的相关性.结果:子宫内膜癌组织中FOXA1、p16阳性表达率均低于正常子宫内膜组织及不典型增生内膜组织,差异具有统计学意义(P＜0.05);FOXA1、p16的表达与子宫内膜癌病理分期、组织分级、肌层浸润、病理类型及淋巴结转移情况有关(P＜0.05);2者在子宫内膜癌中的表达呈正相关.结论:FOXA1和p16与子宫内膜癌的发生发展相关,2者在子宫内膜癌的发展中具有协同作用.
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FOXA1的作用机制及作为乳腺癌预后生物标志的研究进展
乳腺癌的发病具有明显的家族遗传倾向,而且与自身的雌激素水平密切相关.雌激素作用于雌激素受体(ER)从而调控的基因表达,是乳腺癌研究的重点.老年人由于雌激素分泌水平的改变以及其他机体功能的减退,是乳腺癌的高发人群.在发达国家,50％以上的乳腺癌患者是65岁以上的老年妇女[1].叉头盒蛋白Al(FOXAl)是叉头盒蛋白家族成员之一,既有ERα辅助激活因子的功能,又有辅助阻遏因子的功能[2～4],在乳腺、肝脏、胰腺、膀胱、前列腺、结肠和肺中均有表达,与包括乳腺癌在内的许多癌症的发病机制密切相关[5～8].本文综述了FOXA1的作用机制及其作为乳腺癌预后生物标志的研究进展.
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幽门螺杆菌感染与胃黏膜中FOXA1表达的相关性
背景：幽门螺杆菌（ Hp）为Ⅰ类致癌因子。转录因子FOX家族在肿瘤发生、发展中的重要作用正逐渐凸显， FOXA1是一些microRNAs（ miRNAs ）作用的关键靶向转录因子。目的：探讨 Hp 感染与胃黏膜组织中转录因子FOXA1表达的相关性。方法：选择2014年1月—2014年9月接受胃镜检查的患者80例，采用14 C-尿素呼气试验（14 C-UBT）、胃黏膜组织学检查（改良Giemsa染色）、细菌培养检测Hp感染情况，采用免疫组化SP法检测患者胃黏膜组织中FOXA1表达。结果：Hp阳性组FOXA1阳性表达率为73.8%（31/42），Hp阴性组为47.4%（18/38），组间差异有统计学意义（χ2=4.81，P<0.05）。结论：FOXA1在胃黏膜组织中的高表达提示miRNAs途径可能是Hp感染致胃上皮内瘤变乃至癌变的分子机制之一。
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转录因子FOXA1在前列腺癌中的研究进展
转录因子叉头框蛋白A1 (foxhead box A1, FOXA1) 通过与染色体结合释放出DNA结合位点, 对信号转导和细胞增殖进行调控.研究发现, FOXA1在雄激素受体 (androgen receptor, AR) 相关通路调控中起着重要作用, FOXA1参与前列腺癌 (prostate cancer, PCa) 的发生及去势抵抗性前列腺癌 (castration-resistant prostate cancer, CRPC) 和前列腺癌神经内分泌转化 (neuroendocrine di erentiation, NED) 过程, 并且其表达与患者的预后有关.本文对FOXA1在PCa中的研究进展进行综述, 为FOXA1在PCa发展中的作用及治疗提供理论依据.
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转录因子FOXA1与前列腺癌恶性程度及进展相关性研究
目的:探讨FOXA1与前列腺癌(PCa)临床分期、组织学分级及去势抵抗性前列腺癌(CRPC)的关系.方法:收集前列腺癌患者(35例)、良性前列腺增生(BPH)患者(21例)前列腺组织病理切片,应用免疫组化方法检测FOXA1和Ki-67的表达情况,进一步分析该分子阳性表达率与肿瘤临床分期、Gleason评分和CRPC的相关性.结果:PCa患者前列腺组织中FOXA1表达率明显高于BPH患者(100％vs 71.4％,P＜0.01),FOXA1的表达阳性率与Ki-67表达阳性率正相关(P＜0.001),与CRPC无明显相关性(P =0.391),但与Gleason评分(P=0.027)和肿瘤临床分期(P =0.002)相关. 结论:FOXA1在前列腺癌组织中表达阳性率增高,晚期前列腺癌高.
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FOXA1对17β-雌二醇诱导的子宫内膜癌细胞上皮间质转化的影响及机制探讨
目的 探讨FOXA1对雌激素诱导的Ishikawa细胞上皮间质转化的影响及其机制.方法 应用子宫内膜癌lshikawa及HEC-1A细胞系.不同浓度(0、10-10、10-8、10-6 mol/L)17β-雌二醇(17β-E2)分别作用Ishikawa及HEC-1A细胞48 h后,Western blot法检测上皮标志物E-cadherin及间质标志物Vimentin蛋白表达水平,建立雌激素诱导的上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)模型.siRNA沉默叉头盒A1(FOXA1)基因或质粒转染过表达FOXA1后,RT-PCR及Western blot法检测正常对照组、EMT模型组、E2+质粒空载组、E2+ FOXA1沉默组或E2+ FOXA1过表达组上皮标志物E-cadherin、间质标志物Vimentin、雌激素受体α(ERα)蛋白表达水平;Transwell侵袭试验检测各组细胞侵袭能力.结果 与对照组相比,不同浓度E2作用Ishikawa细胞48 h后,10-8及10-6 mol/L组Ishikawa细胞中上皮标志物E-cadherin蛋白的表达水平明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01);Vimentin蛋白表达水平明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01),其中,10-8 mol/L为诱导EMT发生的佳浓度.经不同浓度E2作用后,HEC-1A细胞中E-cadherin、Vimentin蛋白表达均无明显变化,差异无统计学意义.在Ishikawa细胞中,siRNA沉默FOXA1后,促进了10-8 mol/L的E2诱导的Ishikawa细胞EMT的发生,且增强了细胞侵袭力,差异有统计学意义(P＜0.01);而FOXA1过表达后,10-8 mol/L的E2的处理则无法诱导Ishikawa细胞EMT的发生,FOXA1的过表达抑制了细胞的侵袭力.结论 FOXA1可以抑制17β-E2诱导的子宫内膜癌EMT的发生,其作用机制可能与FOXA1介导的ERα蛋白表达增加有关.
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慢病毒介导的 FoxA1高表达对乳腺癌 MCF-7细胞株增殖凋亡探究
目的：利用慢病毒载体，构建乳腺癌MCF-7高表达FoxA1细胞株，并初步探究FoxA1对乳腺癌MCF-7细胞株增殖凋亡的影响。方法将FoxA1基因重组构建慢病毒载体穿梭质粒EX-Z1010-LV201，经PCR和测序后在脂质体Lipo-fectamine2000介导下转染293T细胞包装慢病毒，嘌呤霉素筛选出稳定转染的细胞， Real-Time PCR 法检测稳定转染MCF-7细胞株中FoxA1基因的表达水平， MTT及流式细胞术对比高表达FoxA1细胞株与对照细胞株增殖凋亡差异。结果 PCR扩增和测序结果证实成功构建FoxA1慢病毒载体并包装慢病毒，成功筛选出FoxA1高表达的乳腺癌MCF-7细胞系。 MTT及流式细胞术结果显示：与对照组比较，上调FoxA1乳腺癌MCF-7细胞株增殖下降，凋亡率增加。结论成功构建了重组慢病毒载体，并筛选出稳定高表达FoxA1的MCF-7细胞株，FoxA1可能参与了乳腺癌MCF-7细胞株增殖凋亡调控，为下一步进行其机制探讨提供了依据。
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罗格列酮对耐药乳腺癌细胞影响的研究
目的：探讨罗格列酮( ROS)对耐他莫西芬( TAM)的乳腺癌细胞MCF-7/TAM体外生长的影响，及对其耐药性的逆转效果和作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝( MTT)比色分析法测定ROS作用于MCF-7/TAM细胞后的抑制率及逆转耐药的效果；采用流式细胞术检测ROS作用MCF-7/TAM细胞后的凋亡率；采用实时定量荧光 PCR 技术检测ROS作用MCF-7/TAM细胞后对FOXA1、ERα、ErbB-2和P53基因表达的影响。结果 ROS干预MCF-7/TAM细胞后，呈量-效和时-效关系抑制其增殖。半数抑制浓度(136μmol/L)的ROS对MCF-7/TAM细胞具有明显的逆转耐药效果，逆转耐药倍数为2.05倍。高浓度可诱导MCF-7/TAM细胞凋亡。半数抑制浓度(136μmol/L)的ROS作用MCF-7/TAM细胞后，能够上调FOXA1、ERα和P53基因表达水平(P<0.05)，下调ErbB-2基因表达水平(P<0．05)。结论ROS可抑制MCF-7/TAM细胞增殖，高浓度ROS可诱导其凋亡，其机制可能与上调 P53基因表达有关。 ROS 可逆转MCF-7/TAM细胞的耐药性，逆转机制可能与上调FOXA1和ERα基因表达，下调ErbB-2基因表达有关。
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miR-132在食管癌细胞系KYSE150中对靶基因FOXA1的调控作用
目的 构建miR-132真核表达载体和融合靶基因FOXA1表达载体,在食管癌细胞KYSE150中验证miR-132对靶基因FOXA1的调控作用.方法 根据miR-132序列在基因组中的位置及其上下游序列,以EC9706细胞基因组DNA为模板,扩增包含miR-132前体序列,克隆到pMD18-T Simple中,经BamHⅠ和EcoRⅠ酶切后亚克隆到质粒pcDNA3.1(+)上；通过Real-time PCR检测转染重组表达载体pcDNA3.1-miR-132的KYSE150成熟miR-132的表达水平.用生物信息学软件对miR-132的靶基因进行预测,将候选靶基因FOXA1的3′UTR区融合到pMIR荧光素酶基因下游,通过双荧光素酶报告基因检测分析miR-132对靶基因FOXA1的调控作用.将pCDNA3.1-miR-132表达质粒转染人食管癌细胞KYSE150,通过Western blot检测miR-132对FOXA1蛋白表达的影响.结果 成功构建了miR-132真核表达载体,Real-time PCR验证表明pCDNA3,1-miR-132在KYSE150细胞中能够显著地过表达成熟miR-132.生物信息学预测FOXA1可能是miR-132的靶基因.双荧光素酶报告基因分析表明miR-132能够作用于FOXA1的3′UTR.Western blot进一步证实miR-132能够抑制内源性FOXA1蛋白的表达.结论 FOXA1是miR- 132直接调控的靶基因.
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人FoxA1 shRNA载体构建与检测
目的 构建有效的针对人FoxA1基因的shRNA干扰载体,并验证其干扰效果.方法 设计合成3对针对人FoxA1基因的和1对无同源性的shRNA片段,将合成的shRNA片段插入到干扰载体pRNAT-U6.1/Neo中,经过酶切和测序验证,成功构建人FoxA1基因的shRNA和空白对照载体.将各干扰载体和空白载体转染人正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)和胃癌细胞(SGC-7901),Realtime RT-PCR和Western-blotting检测干扰载体的干扰效率.结果 ①酶切和测序验证均表明各shRNA载体构建成功.将空载体及各干扰载体分别转染人正常胃黏膜细胞(GES-1)和胃癌细胞(SGC-7901)发现,和空白对照组相比,3组干扰载体能够从mRNA和蛋白表达水平明显抑制FoxA1的表达,但是3组质粒的抑制效率有一定的差异,以3号质粒对Foxa1的干扰效率强.结论 成功构建了三个有效的针对人FoxA1基因的shRNA干扰载体,三组质粒都能有效地抑制FoxA1在GES-1细胞和SGC-7901细胞中的表达.
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人FoxA1基因重组慢病毒载体的构建和鉴定
目的 构建叉头盒蛋白A1(Forkhead-boxA1,FoxA1)的重组慢病毒表达载体,为探究其功能和作用机制奠定基础.方法 设计基因引物,采用聚合酶链反应(PCR)扩增出FoxA1的cDNA序列,然后将其克隆至PCDH-CMV-MCS-EF1a-GFP-puro慢病毒表达载体上,经PCR、双酶切反应及DNA测序鉴定,将阳性重组FoxA1表达载体、pCMV-VSV-G和pCMV-dR8.91包装质粒共转染到HEK-293T细胞进行病毒包装收集病毒浓缩液,然后再感染293T细胞,通过观察绿色荧光蛋白来计算病毒滴度,后用病毒转染原代培养人皮肤成纤维细胞(HFFs),通过实时荧光定量PCR检测FoxA1 mRNA的表达水平.结果 重组慢病毒表达载体FoxA1经PCR扩增、酶切及测序鉴定正确,并得到滴度为1×108 TU/mL的病毒液,病毒感染人皮肤成纤维细胞后表达显著增强.结论 成功构建了人FoxA1重组慢病毒载体,并可在HFFs内高效表达,为后续FoxA1的功能和机理研究奠定了实验基础.
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FOXA1和YAP在胃癌中的表达及临床意义
目的 探讨胃癌组织中FOXA1蛋白和YAP蛋白的表达及其与胃癌患者临床病理特征的关系.方法 收集西安交通大学医学部第二附属医院2009年1月至2013年12月间临床资料保存完整的胃癌组织80例和相应癌旁正常组织80例.应用免疫组化染色测定FOXA1和YAP1在胃癌及癌旁组织中的表达,分析两者表达与胃癌临床病理特征的关系;并进一步检测两者在胃癌中表达水平的相关性.结果 FOXA1蛋白和YAP蛋白在胃癌组织中的免疫组化评分显著高于其在癌旁组织中的免疫组化评分(FOXA1:3.50±0.20 vs.1.13±0.11,P＜0.01;YAP:3.40±0.20vs.1.55±0.14,P＜0.01);FOXA1蛋白的阳性表达与肿瘤大小、浸润深度、有无淋巴结转移及TNM分期有显著相关性(P＜0.01);YAP蛋白的阳性表达与胃癌的分化程度以及淋巴结转移有显著相关性(P＜0.01);FOXA1和YAP蛋白在胃癌组织中的表达具有显著相关性(P＜0.01).结论 FOXA1和YAP在胃癌组织中存在显著高表达;FOXA1和YAP的阳性表达与胃癌患者的临床病理特征密切相关,两者在胃癌的发生发展可能有协同促进作用,联合检测这两种蛋白的表达对胃癌的临床诊断及预后判断有一定的指导意义.
