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乳腺癌组织INPP4B与β-catenin表达临床意义
目的 癌细胞转移是造成乳腺癌患者死亡的主要原因之一,Ⅱ型多磷酸肌醇4-磷酸酶(inositol polyphosphate 4-phosphatasetype Ⅱ,INPP4B)是一种新发现的、具有抑癌作用的脂质磷酸酶,β-catenin是Wnt信号通路的关键因子,许多人类恶性肿瘤的发生被认为与异常激活的Wnt/β-catenin通路相关.本研究分析INPP4B和β-catenin蛋白在乳腺癌组织中的表达,并探讨其临床意义.方法 收集2014-01-10-2015-12-12沧州市中心医院病理科乳腺癌组织标本248例和同期乳腺良性病变组织标本25例,通过免疫组化法检测INPP4B和β-catenin蛋白,分析INPP4B蛋白表达与临床病理特征和β-catenin蛋白异位表达的关系.结果 248例乳腺癌组织中INPP4B阳性表达率为29.45％(73/248),低于正常乳腺组织84.00％(208/248)的阳性表达率,差异有统计学意义,P＜0.05;β-catenin蛋白在乳腺癌组织中的异位表达率为69.35％(172/248),高于正常乳腺组织的异位表达,差异有统计学意义,P＜0.05;INPP4B蛋白阳性表达率与患者年龄(t=0.430,P=0.573)、肿瘤直径(t=1.548,P=0.216)、ER(t=0.015,P=0.507)、PR(t=0.687,P=0.486)和HER2(t=0.531,P=0.481)等无关联,与乳腺癌TNM分期(t=8.364,P=0.029)以及组织学分级(t=8.107,P=0.018)呈正相关,与β-catenin蛋白异位表达呈负相关(t=-0.908,P=0.000 8);INPP4B和Ecadherin蛋白随乳腺癌TNM分期升高而降低,而Wnt1和Ki-67蛋白则随乳腺癌TNM分期升高而升高.结论 INPP4B蛋白在乳腺癌组织中表达下调,而β-catenin在乳腺癌组织中异位表达上调,两者表达呈负相关,提示INPP4B可能通过wnt/β-catenin信号通路参与乳腺癌的发生发展.
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LASS2/TMSG-1基因沉默对人肺癌95C细胞侵袭迁移机制探讨
目的 LASS2/TMSG-1是近年来新发现的一种肿瘤转移抑制基因本实验主要研究沉默LASS2/TMSG-1基因对人肺癌细胞系低转移潜能亚系95C细胞的体外侵袭迁移能力的影响,初步探讨LASS2/TMSG-1基因的作用机制.方法 采用蛋白质印迹法检测LASS2/TMSG-1在人不同转移潜能人肺癌细胞系95C(低转移潜能)和95D(高转移潜能)细胞中的表达情况.运用脂质体转染法将靶向沉默LASS2/TMSG-1基因的Psilencer2.1-U6/TMSG-1shRNA转染95C细胞(低转移潜能,LASS2/TMSG-1高表达),实验分为空白对照组(Normal)、无关阴性对照组(Control)及LASS2/TMSG-1基因沉默组(Silence)三组.应用体外侵袭实验、迁移实验检测细胞侵袭与迁移能力的变化;利用蛋白质印迹法检测LASS2/TMSG-1、ATP6L、MMP-2、MMP-9及Bcl-2在细胞中的表达水平及MMP-2的活性;使用比色法检测细胞中V-ATPase的活性;使用BCECF-AM与BCECF氢离子敏感探针检测细胞内外氢离子浓度的变化.结果 LASS2/TMSG-1在95C细胞系中的蛋白表达量(1.09±0.46)明显高于在95D细胞系中的表达(0.53±0.25),差异有统计学意义,z=1.925,P＜0.05.转染LASS2/TMSG-1shRNA 48 h后,Silence组LASS2/TMSG-1 mRNA表达量为0.76±0.03,Control组为1.56士0.10,Normal组为1.66±0.42,差异有统计学意义,H=10.56,P＜0.05;Silence组LASS2/TMSG-1蛋白表达量为0.56±0.09,Control组为1.57±0.08,Normal组为1.66±0.08,差异有统计学意义,H=14.84,P＜0.05.质粒瞬时转染48 h后,体外侵袭实验显示,Silence组穿膜细胞数为50.67±6.74,Control组为25.33±10.21,Normal组为27.17±6.40,差异有统计学意义,H=11.39,P＜0.05;体外迁移实验显示,Silence组穿膜细胞数为98.50±10.70,Control组为26.50±4.87,Normal组为30.25±7.81,差异有统计学意义,H=15.89,P＜0.05.与Nor-mal组及Control组相比,沉默组细胞V-ATPase的C亚基ATP6L的mRNA(z=2.31,P＜0.05;z=2.46,P＜0.05)及蛋白表达(z=2.62,P＜0.05;z=2.61,P＜0.05)升高,V-ATPase的活性(z=3.13,P＜0.05;z=3.14,P＜0.05)和细胞外氢离子浓度(P均＜0.05)升高,而细胞内氢离子浓度与其他两组相比明显降低(P均＜0.05);并且MMP-2、MMP-9和Bcl-2蛋白的表达(P均＜0.05)及MMP-2的活性升高(P=0.05).结论 LASS2/TMSG-1是一种肿瘤转移抑制基因,可能参与抑制肺癌侵袭及转移过程.沉默LASS2/TMSG-1基因表达后,V-ATPase质子泵中关键性C亚基(ATP6L)的表达上升,且基因沉默后其V-ATPase活性增强、细胞内H+浓度下降及细胞外H+浓度上升,反向提示LASS2/TMSG-1可以通过结合ATP6L亚基抑制V-ATPase活性,从而改变细胞内外氢离子浓度,进而影响MMP-2、MMP-9的表达及MMP-2的活性,进而改变肿瘤细胞的侵袭迁移能力等生物学行为.该过程中,Bcl-2可能参与诱导了MMP-2及MMP-9的表达.
关键词： LASS2/TMSG-1 v-ATPase 基质金属蛋白酶 Bcl-2 侵袭迁移 -
白细胞介素1β对两种肿瘤细胞活性氧含量及侵袭迁移能力影响
目的：探讨白细胞介素1β(IL-1β)对口腔鳞癌CAL-27细胞及非小细胞肺癌A549细胞增殖、活性氧(ROS)含量及侵袭迁移能力的影响。方法用外源性重组人IL-1β作用于口腔鳞癌CAL-27细胞及非小细胞肺癌A549细胞,CCK8法检测其增殖能力,活性氧含量检测试剂盒检测其细胞内ROS含量的变化,Transwell法观察IL-1β作用后细胞侵袭迁移能力的改变,使用方差分析方法对所得结果进行统计学分析。结果 IL-1β对两组细胞增殖能力无影响,50及100 ng/mL浓度的IL-1β在8、12 h可上调CAL-27细胞ROS含量(F8 h=24.436,P8 h=0.001；F12 h=64.579,P12 h﹤0.05),在4、8及12 h可上调A549细胞ROS含量(F4 h=19.888,P4 h=0.002；F8 h=30.249,P8 h﹤0.05；F12 h=32.703, P12 h=0.001),促进两组细胞侵袭迁移(FCAL-27侵袭=159.783,PCAL-27侵袭﹤0.05；FCAL-27迁移=264.045,PCAL-27迁移﹤0.05；FA549侵袭=936.278,PA549侵袭﹤0.05；FA549迁移=1389.961,PA549迁移﹤0.05)。结论 IL-1β可以上调口腔鳞癌CAL-27细胞及非小细胞肺癌A549细胞ROS含量,同时促进其侵袭迁移。
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关键词：
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MiR-148a调控胃癌细胞侵袭迁移的作用机制研究
目的 研究miR-148a在胃癌侵袭迁移中的作用,为新肿瘤标志物的研究提供理论基础.方法 荧光实时定量PCR(RT-PCR)检测miR-148a在胃癌细胞系和正常胃黏膜细胞中的表达水平,HGC-27分别转染miR-148a control/miR-148a mimic和miR-148a control/miR-148a inhibitor后检测miR-148a表达水平的改变,Transwell法检测miR-148a对HGC-27细胞侵袭和迁移的影响,Western blot法检测miR-148a对胃癌细胞中c-myc蛋白表达的调控.结果 MiR-148a在胃癌细胞中的表达明显低于正常胃黏膜细胞;HGC-27转染miR-148a mimic后miR-148a表达升高,HGC-27转染miR-148a inhibi-tor后miR-148a表达下降;miR-148a能够显著抑制HGC-27细胞的侵袭和迁移;miR-148a能够明显下调c-myc蛋白的表达.结论 miR-148a通过c-myc来发挥抑制胃癌侵袭迁移的作用.
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二氢丹参酮抑制人胃癌SGC7901细胞侵袭迁移作用及机制研究
目的 研究二氢丹参酮(DHT)对人胃癌SGC7901细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,并探讨其作用的分子机制.方法 利用不同浓度的DHT处理细胞后,MTT法检测DHT对细胞生长活力的影响,划痕实验观察DHT对细胞运动能力的影响,Transwell小室模型研究DHT对细胞迁移和侵袭的影响,qRT-PCR和Western blotting检测基质金属蛋白酶MMP2、MMP9和Hedgehog通路调控基因Gli1和HHIP的mRNA和蛋白表达水平.结果 与对照组相比,DHT可显著抑制SGC7901细胞的体外增殖及迁移能力,Transwell实验表明药物处理后穿膜细胞数明显低于对照组,并且呈剂量依赖性.Western blotting和qRT-PCR实验结果表明,DHT可显著抑制SGC7901细胞中MMP9的表达,降低Glil基因的mRNA和蛋白表达,并提高HHIP基因的表达水平.结论 DHT能够抑制SGC7901细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与MMP9蛋白的表达降低和Hedgehog通路活性抑制有关.
关键词： 二氢丹参酮 胃癌 侵袭迁移 基质金属蛋白酶 Hedgehog通路 -
长链非编码RNA SPRY4-IT1对髓母细胞瘤增殖及侵袭转移的影响
目的:探讨长链非编码RNA SPRY4-IT1 (LncRNA)对髓母细胞瘤增殖及侵袭转移的影响.方法:髓母细胞瘤Daoy细胞分为对照组和si-SPRY4-IT1组,分别利用脂质体Lipofectamine 2000将阴性对照荧光序列和SPRY4-IT1-siRNA转入细胞中,采用Real-time PCR检测转染后各组细胞中SPRY4-IT1的表达情况,CCK-8实验及平板克隆形成实验检测细胞增殖能力的变化,以细胞体外侵袭、迁移实验分别检测细胞侵袭、迁移能力的变化,Westem blot检测SPRY4-IT1对基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白的影响.结果:si-SPRY4-IT1组SPRY4-IT1 mRNA表达水平、细胞体外增殖能力、细胞侵袭、迁移能力、细胞MMP-2蛋白表达均较对照组明显降低(P＜0.05),而MMP-9蛋白表达未见明显变化.结论:干扰长链非编码RNA SPRY4-IT1在髓母细胞瘤Daoy细胞中的表达能显著抑制细胞的增殖、侵袭和迁移能力.
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Salen-Mn通过阻滞TGF-β/Smad2信号通路抑制肾细胞癌786-O细胞的侵袭迁移
目的 探讨TGF-β/Smad2信号通路在锰-双希夫碱复合物(Salen-Mananese,Salen-Mn)抑制肾细胞癌侵袭转移中的作用. 方法 MTT法检测Salen-Mn对肾细胞癌786-O细胞的细胞活性影响.用伤口愈合实验和Transwell侵袭迁移实验检测Salen-Mn对肾细胞癌786-O细胞的侵袭迁移能力.用Western blot以及real-time PCR检测Salen-Mn对肾细胞癌786-O细胞内上皮间质转化相关蛋白标志物(E-cadherin、N-Cadherin、Vimentin和Snail)的表达.通过Western和siRNA转染技术检测TGF-β/Smad2信号通路在Salen-Mn对EMT调控中的作用. 结果 Salen-Mn可以抑制肾细胞癌786-O细胞的增殖和侵袭迁移(P＜0.05).与此同时,Salen-Mn能在mRNA和蛋白水平上调E-cadherin的表达,并下调N-Cadherin、Vimentin和Snail的表达(P＜0.05).Western blot结果显示,Salen-Mn能够抑制肾细胞癌786-O细胞内TGF-β和p-Smad2的表达,且TGF-β的过表达能够逆转Salen-Mn对EMT和侵袭迁移的抑制. 结论Salen-Mn通过下调TGF-β/Smad2信号通路抑制肾细胞癌的侵袭转移,这为肾细胞癌的临床治疗提供了一定的理论依据.
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外泌体在卵巢癌诊治中的研究现状
卵巢癌是女性生殖系统中死亡率高的恶性肿瘤,其发病隐匿,在早期缺乏典型症状及有效的诊断方法,5年总生存率仅约30％[1].大部分患者就诊时已处于晚期,发生盆腹腔转移,虽然手术及辅助化疗已在改善卵巢癌患者的存活率方面取得了一定的进展,但是卵巢癌的复发和化疗耐药仍广泛存在,这些都给临床诊疗带来很大困难.外泌体(exosomes)可来源于多种类型的细胞,具有广泛的生物学作用,可参与到细胞通讯、免疫监视、抗原递呈等生理、病理过程.越来越多的研究发现外泌体与多种肿瘤的发生、发展密切相关.文章从非卵巢癌细胞及卵巢癌细胞来源的外泌体两个方面,就外泌体对卵巢癌的侵袭迁移、免疫逃逸和化疗耐药的影响及其在临床诊治中的研究现状进行综述.
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芦荟苷对非小细胞肺癌的增殖和抗转移作用
目的:探讨芦荟苷对非小细胞肺癌的增殖和抗转移作用的调控及其机制.方法:qPCR检测不同浓度的芦荟苷对非小细胞肺癌的细胞活性影响情况;分析芦荟苷对非小细胞肺癌细胞增殖行为的影响情况;流式细胞术实验检测芦荟苷对非小细胞肺癌细胞凋亡行为和细胞周期的影响;Transwell侵袭实验和划痕愈合实验检测芦荟苷对非小细胞肺癌细胞侵袭和迁移能力的影响,裸鼠体外成瘤实验检测芦荟苷对非小细胞肺癌细胞成瘤能力的影响;Western blot检测增殖相关蛋白的表达情况.结果:100 μmol/L的芦荟苷对非小细胞肺癌的细胞活性的抑制作用佳;而随着时间的进展,芦荟苷对非小细胞肺癌细胞的增殖能力有直接抑制作用,可以在一定程度上千扰非小细胞肺癌细胞的生长进程;而合适浓度芦荟苷对非小细胞肺癌细胞侵袭和迁移能力有直接的抑制作用,同时可以抑制体外成瘤能力,干扰增殖蛋白的表达.结论:芦荟苷可以抑制非小细胞肺癌细胞的增殖和侵袭行为,对其转移有一定的抑制作用.
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肿瘤相关成纤维细胞通过转化生长因子β调节胃癌细胞转移能力的研究
目的:通过研究肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblast,CAF)促进胃癌细胞侵袭迁移的能力,探讨胃癌转移机制.方法:从胃癌组织分离CAF.通过transwell小室模型和Western印迹法检测CAF与胃癌细胞共培养对胃癌细胞侵袭迁移能力、上皮细胞间充质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)的影响.使用ELISA和定量PCR分别检测CAF转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)分泌水平和TGFB mRNA表达水平.进一步通过Western印迹法检测共培养后胃癌细胞中TGF-β信号通路标志物Smad2和磷酸化Smad2的表达水平.使用TGF-β拮抗剂阻断TGF-β信号通路,检测CAF对胃癌细胞EMT及侵袭迁移能力影响.结果:CAF促进MKN28侵袭迁移和发生EMT.CAF的TGF-β1分泌量较高于NF.与CAF共培养后,TGF-β信号通路活化.TGF-β拮抗剂抑制CAF诱导胃癌细胞发生EMT和CAF促胃癌细胞侵袭迁移的能力.结论:CAF通过分泌TGF-β诱导胃癌细胞发生EMT,从而促进了胃癌细胞侵袭能力,可能是胃癌转移的重要机制.
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LASS2/TMSG-1基因过表达对人肺癌95D细胞体外侵袭迁移能力的影响及其机制
目的 分析LASS2/TMSG-1基因过表达对人肺癌95D细胞体外侵袭迁移能力的影响,初步探讨LASS2/TMSG-1基因的作用机制.方法 运用脂质体转染法将前期已构建好并冷冻保存的PcDNA3-TMSG-1质粒通过脂质体转染法瞬时转染入95D细胞(高转移潜能,LASS2/TMSG-1低表达),使外源性LASS2/TMSG-1基因在细胞内过表达即LASS2/TMSG-1过表达组,同时设立转染空白质粒的空白对照组和未转染质粒的阴性对照组.应用体外侵袭及迁移实验检测人肺癌95D细胞侵袭及迁移能力的变化;应用qRT-PCR和Western blot法检测LASS2/TMSG-1 mRNA及蛋白的表达;应用Western blot法检测ATP6L、MMP-2及MMP-9在细胞中的表达水平;应用明胶酶谱法检测肿瘤细胞中MMP-2及MMP-9的活性;使用比色法检测细胞中V-ATPase的活性;使用BCECF H+敏感探针检测细胞外H+浓度的变化.结果 LASS2/TMSG-1过表达组细胞的LASS2/TMSG-1表达水平明显升高,而ATP6L表达水平下降,其V-ATPase活性及细胞外H+浓度降低,与空白对照组和阴性对照组相比差异均具有统计学意义(P ＜0.05);MMP-2、MMP-9的表达及活性均降低,与其他两组相比差异有统计学意义(P＜0.05);并且LASS2/TMSG-1过表达组细胞的体外侵袭及迁移能力明显低于其他两组(P＜0.05).结论 LASS2/TMSG-1可能通过结合ATP6L亚基抑制V-ATPase活性,改变细胞外H+浓度,影响MMP-2、MMP-9的表达及活性,进而改变肿瘤细胞的体外侵袭迁移能力等生物学行为.
关键词： 肺肿瘤 LASS2/TMSG-1 v-ATPase 基质金属蛋白酶 侵袭迁移 -
黄芩素对星形细胞瘤SHG-44细胞增殖、侵袭迁移的影响
目的:观察黄芩素干预人星形细胞瘤SHG-44细胞株后,肿瘤细胞形态、增殖、凋亡、细胞周期以及运动侵袭能力的变化.方法:以体外培养的人星形细胞瘤SHG-44细胞为研究对象,用黄芩素干预后,显微镜观察细胞形态变化,MTT法观察细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期,侵袭小室实验观察细胞侵袭力改变.结果:黄芩素对SHG-44细胞增殖的抑制作用随时间的延长和药物浓度的增加,抑制作用逐渐增强,有明显的时间和剂量依赖性;随黄芩素浓度增加,凋亡率增高,差异有统计学意义(P＜0.05);黄芩素将肿瘤细胞阻滞于G0/G1期,与对照组比较S期细胞减少近18％,差异有统计学意义(P＜0.05);侵袭小室实验表明随着黄芩素干预浓度增加,SHG-44细胞48 h后穿过人工基底膜的细胞数量明显更少,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:黄芩素能显著抑制SHG-44细胞的增殖、侵袭及迁移,提示黄芩素对星形细胞瘤治疗具有潜在应用价值.
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lncRNA与Wnt/β-catenin通路的相互关系在结直肠癌中的研究进展
结直肠癌是全球高发病率高死亡率的恶性肿瘤之一,其发病机制研究一直受到国内外的高度关注.长链非编码RNA (long non-coding RNA,lncRNAs)是一类长度大于200个核苷酸但无蛋白编码功能的RNA.近期的研究显示IncRNA可通过参与细胞信号转导,并影响信号通路中相关分子的表达,对肿瘤的发生发展产生促进或抑制作用.其中lncRNA与Wnt/β-catenin信号通路的相互调节作用与结直肠癌的发生发展关系密切,lncRNA或Wnt/β-catenin信号通路中相关分子的变化均会影响结直肠癌的增殖、侵袭迁移及耐药.深入了解lncRNA与Wnt/β-catenin信号通路的相互调节作用,可以进一步阐明结直肠癌的发病机制,为结直肠癌的个体化治疗提供新的治疗靶点.
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白藜芦醇对食管鳞癌Eca-109细胞侵袭迁移及EMT的影响
目的:研究白藜芦醇( RES)对食管鳞癌 Eca-109 细胞侵袭迁移及上皮间质转化( EMT)的影响. 方法:用不同浓度(50和100 μmol/L)的RES处理Eca-109细胞,采用细胞划痕实验、Transwell小室实验检测细胞迁移侵袭能力,荧光定量PCR检测EMT蛋白 E-cadherin、N-cadherin、Vimentin 和 MMP-2、MMP-9 mRNA 的表达, Western blot 检测 E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP-2和MMP-9蛋白表达. 结果:与对照组比较,RES各浓度(50 μmol/L和100 μmol/L)组均可明显抑制Eca-109细胞侵袭迁移(P<0. 01),下调N-cadherin、Vimentin、MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达(P<0. 05~P<0. 01),增加E-cadherin mRNA和蛋白表达(P<0. 01). 结论:RES抑制Eca-109细胞侵袭迁移能力,其机制可能通过下调MMP-2、MMP-9的表达,调控EMT蛋白( E-cadherin、N-cadherin和Vimentin)的表达、抑制上皮间质转化过程.
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11，12-脱水-二（2-氯乙基）氨基-3，19-环磷酸酯穿心莲内酯抗胃癌细胞增殖、侵袭迁移的机制研究
目的：研究脱水穿心莲内酯衍生物[11，12-脱水-二（2-氯乙基）氨基-3，19-环磷酸酯穿心莲内酯]抑制胃癌SGC7901细胞增殖、侵袭及迁移的作用，并探讨其可能的作用机制。方法取 SGC7901细胞，加入11，12-脱水-二（2-氯乙基）氨基-3，19-环磷酸酯穿心莲内酯中，分别设置20、40、60、80和100μmol· L－15个药物浓度组；不加11，12-脱水-二（2-氯乙基）氨基-3，19-环磷酸酯穿心莲内酯的单纯细胞为空白对照组，分别置于培养箱孵育24、48、72 h；采用 MTT 法检测细胞增殖与细胞活力；采用 Transwell 小室测定24 h 后 SGC7901细胞的侵袭能力，并通过蛋白免疫印迹（Western blot）法检测48 h 细胞增殖与迁移相关蛋白 Akt、p-AKT、JNK、p-JNK、MMP-2、MMP-9的表达情况。结果与空白对照组相比：20、40、60、80和100μmol·L－15个药物浓度组能明显抑制 SGC7901细胞增殖，并呈时间和浓度依赖性（P ＜0．01）。空白对照组迁移和侵袭能力无显著变化，11，12-脱水-二（2-氯乙基）氨基-3，19-环磷酸酯穿心莲内酯（40μmol·L－1组）处理 SGC7901细胞迁移和侵袭能力较空白对照组明显减弱（P ＜0．01）。采用11，12-脱水-二（2-氯乙基）氨基-3，19-环磷酸酯穿心莲内酯（40μmol·L－1）处理 SGC7901细胞48 h后，可明显抑制 p-AKT、p-JNK、MMP-2及 MMP-9的表达水平。结论11，12-脱水-二（2-氯乙基）氨基-3，19-环磷酸酯穿心莲内酯可降低胃癌 SGC7901细胞的增殖、侵袭和迁移能力，其作用机制可能是通过抑制 p-AKT、p-JNK、MMP-2、MMP-9蛋白的表达。
关键词： 脱水穿心莲内酯环磷酸酯衍生物 SGC7901 细胞 增殖 侵袭迁移 AKT JNK MMP-2 MMP-9 -
Matriptase与子宫内膜癌细胞株侵袭迁移能力的相关性研究
目的:探讨Matriptase与子宫内膜癌细胞侵袭转移能力的相关性. 方法:采用荧光定量 PCR 和 Western blot 法检测 HEC-1 A、HEC-1 B 和 RL952 细胞中 Matriptase、HAI-1 mRNA和蛋白表达水平;构建Matriptase基因SiRNA慢病毒载体,采用RNA干扰技术,对Matriptase高表达的HEC-1 A和RL952细胞进行瞬时转染,从而达到抑制Matriptase基因表达水平的目的. 应用细胞划痕实验及穿膜小室实验观察干扰前后癌细胞体外侵袭及迁移能力的改变. 结果:荧光定量PCR 检测结果显示, Matriptase 和HAI-1 mRNA 在HEC-1A细胞(0. 2123±0. 021和0. 2827±0. 049)和RL-952细胞(0. 1778±0. 013和0. 2420±0 . 032 )中为均阳性表达;在HEC-1 B细胞中为阴性表达( 0 . 000695±0 . 00012和0 . 00263±0 . 00043 ). Western blot结果显示, Matriptase和HAI-1 在HEC-1 A细胞和RL-952 细胞中为阳性表达,在HEC-1 B 细胞中为阴性表达. 转染siRNA后, HEC-1 A细胞和RL-952细胞的Matriptase mRNA和蛋白表达水平显著下降,抑制率达80%以上,HAI-1表达水平未见明显改变,Matriptase/HAI-1比值明显降低( HEC-1A:0. 75 vs 0. 11,P<0. 01;RL-952:0. 0. 73 vs 0. 12,P<0. 01). 细胞划痕实验和穿膜小室实验显示,癌细胞体外侵袭及迁移能力显著下降. 结论:Matriptase 表达水平与子宫内膜癌细胞侵袭迁移能力呈正相关, Matriptase/HAI-1比值降低亦可能抑制癌细胞的侵袭迁移.
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RNAi沉默 KDM2 A 基因对人肝癌 MHCC-97H细胞增殖、侵袭及迁移的影响
目的：探讨沉默KDM2A基因对人肝癌MHCC-97H细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法利用RT-PCR法检测KDM2A在肝癌细胞系和正常肝细胞系中的表达；分别将KDM2A-siRNA 1＃、KDM2A-siRNA 2＃和NC转入KDM2A表达量高的MHCC-97H细胞中，利用RT-PCR法检测KDM2A的沉默率；采用MTT法检测细胞的增殖能力；采用Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力。结果 KDM2A在肝癌MHCC-97H细胞系中高表达；KDM2A-siRNA 1＃和KDM2A-siRNA 2＃的沉默率分别为35．2％和46．8％；沉默KDM2A后MHCC-97H细胞的增殖能力、侵袭迁移能力明显降低（ P均＜0．05）。结论 RNAi沉默KDM2A基因表达能抑制MHCC-97H细胞的增殖、侵袭和迁移。
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槲皮素抑制宫颈癌Siha细胞增殖和侵袭实验研究
目的 探讨槲皮素对人宫颈癌Siha细胞生长、增殖、黏附、迁移和侵袭的影响.方法 对数生长期人宫颈癌Siha细胞,分为对照组和20、40、80 μmol/L槲皮素组,分别加入0、20、40、80 μmol/L槲皮素进行处理;采用MTT法检测各组细胞增殖率,采用划痕试验检测各组细胞迁移距离和迁移率,采用Transwell小室检测各组侵袭细胞数和侵袭抑制率,采用实时定量PCR反应检测对照组与80 μmol/L槲皮素组细胞HOTAIR、miR-23b、MAPK1 mRNA表达水平,采用Western blot法检测各组细胞HOTAIR、miR-23b、MAPK1蛋白表达水平.结果 对照组和20、40、80 μmol/L槲皮素组细胞增殖率、细胞迁移距离、迁移率、侵袭细胞数依次降低(P＜0.05),侵袭抑制率依次增高(P＜0.05);80 μmol/L槲皮素组细胞HOTAIR mRNA(0.723±0.089)、MAPK1 mRNA(0.786±0.166)表达水平低于对照组(1.665±0.104、1.637±0.151),miR-23b mRNA表达水平(6.671±0.093)高于对照组(1.578±0.112) (P＜0.05);对照组和20、40、80 μmol/L槲皮素组细胞HOTAIR蛋白(0.97±0.15、0.72±0.09、0.54±0.11、0.33±0.07)、MAPK1蛋白(0.74±0.07、0.42±0.08、0.21±0.05、0.13±0.03)表达水平依次降低,miR-23b蛋白表达水平(0.18±0.02、0.43±0.06、0.67±0.10、0.88±0.09)依次增高(P＜0.05).结论 槲皮素明显抑制Siha细胞生长、增殖、迁移和侵袭,其机制可能与其下调长链非编码RNA HOTAIR并通过其靶向调控miR-23b/MAPK1轴有关.
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下调ALDH1A1基因表达对体外培养的鼻咽癌细胞系迁移能力的影响
目的 探讨siRNA干扰ALDH1A1基因表达对鼻咽癌5-8F和CNE2细胞迁移侵袭能力的影响.方法 将鼻咽癌5-8F和CNE2细胞分为5-8F干扰组、5-8F空载组、CNE2干扰组、CNE2空载组,利用已构建的慢病毒pMagic 4.1-ALDH1A1 siRNA载体和pMagic 4.1-shRNA空载体分别感染5-8F和CNE2细胞,建立稳定干扰ALDH1A1表达的鼻咽癌5-8F、CNE2细胞株和空载的5-8F和CNE2细胞株.4组采用Western blot法检测细胞ALDH1A1、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2、MMP-9蛋白表达,采用Transwell小室实验检测各组迁移细胞数,采用Boyden小室实验检测各组侵袭细胞数.结果 5-8F干扰组ALDH1A1蛋白表达(0.34±0.01)低于5-8F空载组(0.75±0.03),CNE2干扰组ALDH1A1蛋白表达(0.24±0.03)低于CNE2空载组(0.71±0.03);5-8F干扰组鼻咽癌细胞迁移细胞数(35.0±2.6)、侵袭细胞数(32.7±2.1)均低于5-8F空载组(117.6±3.2,105.6±4.0),CNE2干扰组鼻咽癌细胞迁移细胞数(34.0±3.0)、侵袭细胞数(32.3±1.5)均低于CNE2空载组(121.0±4.0,108.0±1.7)(P＜0.01);5-8F干扰组VEGF(0.49±0.03)、MMP-2(0.36±0.04)、MMP-9 (0.31±0.04)蛋白表达低于5-8F空载组(0.73±0.02、0.50±0.02、0.89±0.01) (P＜0.01),CNE2干扰组VEGF(0.48±0.02)、MMP-2(0.37±0.02)、MMP-9 (0.41±0.02)蛋白表达低于CNE2空载组(0.78±0.05、0.67±0.05、0.76±0.04) (P＜0.01).结论 下调ALDH1A1基因表达可抑制鼻咽癌细胞迁移侵袭.
