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CINⅠ的转归及p16INK4a蛋白表达在分流CINⅠ中的临床意义
目的：探讨子宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅰ的转归，分析影响CINⅠ病变进展的相关因素，并评价p16INK4a蛋白表达在预测CINⅠ病变进展中的价值。方法回顾性分析2010年8月—2013年7月在南京医科大学第一附属医院就诊，初次液基薄层细胞学检查（TCT）结果为≤低度鳞状上皮内病变[LSIL；包括正常、未明确诊断意义的不典型鳞状上皮细胞（ASCUS）和LSIL]且高危型HPV阳性，并经阴道镜下子宫颈活检组织病理诊断为CINⅠ的患者104例，随访1年观察病变的转归，同时对患者年龄、初次TCT结果、高危型HPV DNA载量、子宫颈脱落细胞中HPV L1壳蛋白及子宫颈组织中p16INK4a蛋白表达情况与CINⅠ病变进展的关系行单因素及多因素分析。结果（1）104例CINⅠ患者中，初次检查TCT结果正常者15例、ASCUS 78例、LSIL 11例；1年后随访时复查：TCT结果正常且高危型HPV阴性者52例，高危型HPV阳性和（或）TCT结果≥正常但经阴道镜检查评估并行子宫颈活检组织病理检查诊断为正常者30例、CINⅠ10例、CINⅡ5例、CINⅢ7例。78.8%（82/104）的患者病变消退；9.6%（10/104）的患者病变持续；11.5%（12/104）的患者病变进展，其中4.8%（5/104）病变进展为CINⅡ，6.7%（7/104）进展为CINⅢ，无一例进展为子宫颈浸润癌。（2）104例CINⅠ患者中，行p16INK4a蛋白检测者88例，其中30例（34%，30/88）p16INK4a蛋白呈阳性表达，58例（66%，58/88）p16INK4a蛋白呈阴性表达；行免疫细胞化学HPV L1壳蛋白检测者94例，其中49例（52%，49/94）HPV L1壳蛋白阳性表达，45例（48%，45/94）HPV L1壳蛋白阴性表达。（3）单因素分析显示，患者年龄、高危型HPV DNA载量、初次TCT结果、HPV L1壳蛋白表达与CINⅠ病变进展无明显相关关系（P>0.05），而p16INK4a蛋白阳性表达与CINⅠ病变进展明显相关（P<0.05）。多因素分析显示，p16INK4a蛋白阳性表达是影响CINⅠ病变进展的危险因素（OR=5.1，95%CI为1.162～22.387，P=0.031）。（4）30例p16INK4a蛋白阳性表达的CINⅠ患者中8例（27%，8/30）病变进展，58例p16INK4a蛋白阴性表达者中4例（7%，4/58）病变进展，两者比较，差异有统计学意义（P<0.05）。p16INK4a蛋白阳性表达预测CINⅠ病变进展的敏感度为75%，特异度为71%，阳性预测值27%，阴性预测值93%。结论高危型HPV阳性且TCT结果≤LSIL的CINⅠ患者1年内病变进展率较低，无子宫颈浸润癌发生。p16INK4a蛋白阳性是影响CINⅠ病变进展的危险因素，对于预测CINⅠ病变进展有一定的价值，可用于分流CINⅠ，筛查出高危人群进行重点随访。
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免疫细胞化学p16/Ki-67双染色法检测对于细胞学诊断为ASCUS、LSIL和ASC-H患者分流的意义
目的 在细胞学诊断为未明确诊断意义的不典型鳞状上皮细胞(ASCUS)、低级别鳞状上皮内病变(LSIL)、不除外高度病变的不典型鳞状上皮细胞(ASC-H)的患者中,评价免疫细胞化学p16/细胞增殖相关核抗原(Ki-67)双染色法对其中高级别子宫颈病变[包括子宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅱ、CINⅢ]的筛查效能,并分析p16/Ki-67双染色法对于ASCUS、LSIL、ASC-H患者分流的意义.方法 收集2015年10月-2016年3月在北京大学第一医院妇科门诊就诊的液基薄层细胞学检查(TCT)结果为ASCUS、LSIL、ASC-H的患者共251例,对其子宫颈脱落细胞分别行p16/Ki-67双染色法检测、高危型HPV(HR-HPV)检测[采用第2代杂交捕获技术(HC-Ⅱ)检测HR-HPV DNA],并行阴道镜活检组织的病理检查,以组织学病理诊断为“金标准”,采用敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和受试者工作特征(ROC)曲线下面积比较p16/Ki-67双染色法和HR-HPV检测的筛查效能.结果 (1)251例患者的子宫颈脱落细胞中,p16/Ki-67双染色的总阳性率为21.1％(53/251).其中,细胞学诊断为ASCUS患者的子宫颈脱落细胞中p16/Ki-67双染色的阳性率为13.9％ (15/108),LSIL患者为21.6％(22/102),ASC-H患者为39.0％(16/41),3者比较,差异有统计学意义(x2=78.516,P＜0.05);阴道镜活检后病理诊断为低级别子宫颈病变(包括正常子宫颈、CINⅠ)患者的子宫颈脱落细胞中p16/Ki-67双染色的阳性率为13.0％(28/215),高级别子宫颈病变患者为69.4％(25/36),两者比较,差异有统计学意义(x2=7.932,P＜0.05).(2)以阴道镜活检后的病理诊断为“金标准”,在细胞学诊断为ASCUS、LSIL、ASC-H的患者中,p16/Ki-67双染色法筛查高级别子宫颈病变的特异度(分别为89.8％、83.3％、88.9％)及阳性预测值(分别为33.3％ 、31.8％、81.3％)均明显高于HR-HPV检测(特异度分别为71.4％、15.6％、40.7％,阳性预测值分别为26.3％、12.6％、38.5％;P均＜0.05),其受试者工作特征(ROC)曲线下面积(分别为0.799、0.708、0.909)也均明显大于HR-HPV检测(分别为0.696、0.531、0.561;P均＜0.05).结论 对于细胞学诊断为ASCUS、LSIL、ASC-H的患者,p16/Ki-67双染色法可作为筛查其高级别子宫颈病变的有效检测手段,其筛查效能明显优于HR-HPV检测.
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P16INK4A联合HPV L1壳蛋白检测在宫颈鳞状上皮内病变诊断中的应用
目的 初步探讨P16INKA联合HPV L1壳蛋白检测在宫颈鳞状上皮内病变诊断中的应用价值.方法 选择在温州市人民医院就诊患者,收集69例宫颈鳞状上皮内病变标本,行P16INK4A、HPV L1壳蛋白检测,分析P16INK4A、HPV L1壳蛋白及P16INK4A联合HPV L1壳蛋白在各级宫颈病变中的表达差异.结果 P16INK4A在LSIL组、HSIL组、SCC组中的阳性率分别为45.5％、85.2％、100.0％.同LSIL组比较,P16INK4A在HSIL组及SCC组阳性率明显升高(P＜0.01).HPV L1壳蛋白在LSIL组、HSIL组、SCC组中的阳性率分别为63.6％ 、18.5％、0％,HPV L1壳蛋白在LSIL组中阳性率明显低于HSIL组及SCC组(P＜0.01).随着宫颈病变加重,P16 +/L1-阳性率有升高趋势(P＜0.01),P16-/L1+阳性率有下降趋势(P＜0.01).LSIL组中P16 +/L1-阳性率明显低于HSIL组和SCC组(P＜0.01),SCC组P16 +/L1-阳性率较HSIL组有明显提高(P＜0.05).LSIL组中P16-/L1+阳性率明显低于HSIL组和SCC组(P＜0.01).P16 +/L1-较P16INK4A、HPV L1壳蛋白单一检测筛查HSIL+特异性明显升高(P＜0.01).结论 P16INK4A联合HPV L1壳蛋白有望成为诊断宫颈鳞状上皮内病变的有效指标.
关键词： 宫颈上皮内瘤变 周期素依赖激酶抑制剂p16 L1壳蛋白 HPV -
ts-SV40LT抗原转基因干细胞增殖活性的温度调控机制分析
目的:研究温度敏感性猿猴病毒40大T抗原(ts-SV40LT)转基因干细胞增殖活性的温度调控机制.方法:用含ts-SV40LT抗原的表达质粒转染脐带间充质干细胞(UCMSCs),将其分别置于33℃和37℃培养,细胞免疫荧光方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)活性,PCR-ELISA端粒酶检测法检测端粒酶活性及细胞周期,Western Blot法检测周期素(Cyclin)D1、CyclinE、周期素依赖性蛋白激酶(CDK)2、CDK4、CDK6、P16和P21的蛋白表达情况,免疫荧光方法检测巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达.结果:细胞在33℃时培养24、48、72 h的PCNA阳性表达百分率均高于37℃时,差异有统计学意义(P＜0.01).转染tsSV40LT抗原基因后,细胞在33℃培养箱时的端粒酶活性和Plx值高于37℃时,差异有统计学意义(P＜0.01).33℃时的Cyclin D1、CyclinE、CDK2、CDK4、CDK6及Nestin表达量高于37℃时,P16、P21、NSE和GFAP的表达量低于37℃时,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论:通过tsSV40LT抗原基因的有效转染可实现干细胞在不同温度环境下的增殖调控.
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COX-2、CDKN2A在慢性乙型肝炎、肝硬化肝组织中的表达及意义
目的 了解慢性乙型肝炎(CHB)、肝硬化肝组织中COX-2、CDKN2A的表达及其与肝脏损伤程度的关系.方法 经免疫学及肝穿刺病理学证实为CHB患者46例、乙型肝炎肝硬化17例;正常肝组织10例(来自肝脏良性肿瘤手术切除的标本).应用病理学判断肝组织的炎症及纤维化程度.采用免疫组化方法、半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹分析法检测COX-2、CDKN2A在组织中的表达.结果 (1)CDKN2A mRNA第一、第二外显子在正常肝、CHB及肝硬化组织的表达水平及CDKN2A蛋白的半定量分析差异有统计学意义(F=28.75、24.86、26.43,P=0.036、0.041、0.038).(2)正常肝、CHB及肝硬化组织中的COX-2、CDKN2A蛋白水平的表达差异有统计学意义(χ<'2>=13.48、15.73,P=0.042、0.021);肝组织炎症不同级别的COX-2、CDKN2A蛋白水平的表达差异具有统计学意义(χ<'2>=22.45、23.67.P=0.038、0.027);肝组织纤维化不同程度的COX-2、CDKN2A蛋白水平的表达差异具有统计学意义(χ<'2>=24.16、22.53,P=0.024、0.037).结论 COX-2、CDKN2A表达与CHB、肝硬化发生发展过程明显相关,COX-2、CDKN2A可作为反应HBV相关肝病进展程度的良好指标.
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胰腺癌中Ring1B、LSD1及P16表达及其与预后的关系
目的:探讨胰腺癌中E3泛素连接酶亚单位Ring1B、组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)及细胞周期调节因子P16表达与及其与患者预后的关系.方法:用免疫组化法检测85例胰腺癌患者手术标本(癌组织与癌旁组织)中LSD1、Ring1B与P16蛋白的表达及分布,并选取其中6对癌组织和癌旁组织,用qRT-PCR和Western blot法检测mRNA和蛋白表达;分析三者在胰腺癌组织中表达的相关性,及其与患者生存的关系.结果:免疫组化结果显示,Ring1B与LSD1蛋白主要表达于细胞浆,P16主要表达于胞核;Ring1B与LSD1在胰腺癌组织中表达明显高于癌旁组织,而P16的表达明显低于癌旁组织(均P＜0.05);在胰腺癌组织中Ring1B、LSD1的表达与P16的表达均呈负相关(r=-476;r=-0.673,均P＜0.05).qRT-PCR结果显示,胰腺癌组织中Ring 1B和LSD1的mRNA的平均相对表达量均明显高于癌旁组织(8.908vs.1.947;7.126 vs.1.940,均P＜0.05),P16的mRNA的平均相对表达量明显低于癌旁组织(1.269vs.5.237,P＜0.05);Western blot结果显示,三者的蛋白表达趋势与mRNA表达一致.生存分析显不,Ring1B、LSD1高表达患者生存率均分别低于其低表达患者(x 2=8.958,P=0.012;x 2=8.856,P=0.010),而P16高表达患者生存率高于其低表达患者(x 2=7.867,P=0.024).结论:胰腺癌组织中Ring 1B与LSD1表达升高,P16表达降低;Ring1B、LSD1可能分别通过组蛋白泛素化和去甲基化调控P16的表达,从而影响胰腺癌预后.
