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P21激活激酶1在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义的研究
目的 探讨甲状腺乳头状癌(PTC)中P21激活激酶1(PAK1)的表达情况及其临床意义. 方法 使用免疫组化法检测55例PTC和25例非恶性甲状腺组织中PAK1蛋白的表达情况,分析其与PTC临床病理参数的关系.结果 43.6%(24/55)的PTC组织中PAK1蛋白高表达或过表达,显著高于甲状腺良性组织的8.0%(2/25)(x2=9.950,P=0.002).在有腺体外浸润﹑临床分期较高﹑有淋巴结转移的PTC中PAK1蛋白的表达较高,差异均有统计学意义(x2=5.832,P=0.016; 2=4.448,P=0.035;x2=4.990,P=0.025);而在不同年龄﹑性别﹑肿瘤大小﹑是否多发﹑是否为双侧等分组中差异均无统计学意义. 结论 PAK1在PTC中呈高表达,可能参与肿瘤增殖﹑浸润和转移.
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膀胱移行细胞癌中PAK1蛋白表达及其临床意义
目的 探讨p21-激活激酶1(PAK1)基因在膀胱移行细胞癌中的蛋白表达及其临床病理学意义.方法 运用免疫组化和TUNEL方法,结合组织芯片技术,检测PAK1基因在100例膀胱移型细胞癌和30例癌旁正常膀胱黏膜组织中的表达及其与细胞凋亡的关系.结果 全部正常膀胱黏膜组织均呈PAK1蛋白阴性或低水平的表达.膀胱移行细胞癌中,有58%出现PAK1蛋白的过度表达;而且与肿瘤的病理分级和瘤体大小均有显著的相关性(P＜0.05),其中78%分化差(G3级)和73%瘤体直径≥3 cm的膀胱癌出现PAK1蛋白过度表达,其过度表达率明显高于分化较好(G1/G2级)(47%)和瘤体直径＜3 cm(50%)的肿瘤.另外,PAK1蛋白表达与本组膀胱移行细胞癌的细胞凋亡指数负相关(P＜0.05).结论 膀胱移行细胞癌中PAK1蛋白表达上调可能部分地通过其抗细胞凋亡效应,在肿瘤的发生发展中起重要作用;PAK1过度表达与膀胱移行细胞癌的恶性组织学表型密切相关,可以作为评估该肿瘤恶性程度的分子标记之一.
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喉癌中PAK1基因mRNA的表达及临床意义
目的 探讨PAK1(p21 activated kinase 1)基因在喉癌组织中mRNA水平表达情况及临床意义.方法 采用实时定量多聚酶链式反应(qRT-PCR)检测喉癌组织和癌旁正常黏膜组织中PAK1基因的mRNA表达情况.结果 62例喉癌中PAK1基因mRNA水平的阳性表达率为72.58%(45例),PAK1的表达与肿瘤分级、淋巴结转移、临床分期和不良预后相关(P＜0.05).结论 喉癌中PAK1基因在mRNA水平表达的上调与喉癌的发生发展密切相关,并且与病理分级、淋巴结转移、临床分期、不良预后有关,表明PAK1可能成为喉癌治疗中的新靶点.
关键词： 鳞状细胞癌 喉 PAK1 实时定量RT-PCR -
p21活化蛋白激酶1对喉癌细胞运动侵袭能力的影响
目的 探讨PAK1(p21 activated kinase 1)在喉癌中的表达及其对喉癌细胞运动侵袭能力的影响.方法 首先获取22例喉癌和癌旁新鲜组织标本,采用Western blot方法检测PAK1的蛋白表达情况,再对63例喉癌和癌旁黏膜正常组织石蜡标本进行免疫组化研究,检测PAK1蛋白的表达,后采用siRNA技术干扰FaDu喉癌细胞系的PAK1表达,同时进行细胞运动和侵袭能力的分析.结果 Western blot和免疫组化结果表明,PAK1在喉癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织.喉癌细胞经PAK1 siRNA干扰后,运动和侵袭能力明显降低.结论 PAK1的激活可能参与喉癌的发生进展,下调PAK1的活性可降低喉癌细胞的运动和侵袭能力.
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一种新型PAK1抑制剂诱导结直肠癌DLD-1细胞凋亡的机制研究
PAK1蛋白激酶在肿瘤的发生发展中发挥着重要作用,筛选开发新的PAK1抑制剂作为肿瘤治疗靶向药物具有重要意义.传统的PAK1抑制剂筛选方法存在成本高、效率低等缺陷,而计算机虚拟筛选可降低发现活性先导化合物的成本,提高筛选效率.本实验采用计算机辅助药物虚拟筛选结合Z'lyteTM高通量激酶筛选出1种PAK1靶向候选化合物,体外酶活性检测发现化合物18(K788)具有良好的PAK1抑制活性(抑制率为42.7％).进一步通过MTT检测发现K788具有显著的PAK1阳性肿瘤杀伤活性,抑制活性优于阳性药IPA-3(inhibitor of p21-activated kinase compound-3).采用流式细胞分析、Western blot检测发现K788能通过抑制PAK1的表达及其活化以激活caspase凋亡通路,诱导结肠癌细胞DLD-1的凋亡.K788具有临床开发应用的潜力,可作为PAK1靶向先导分子进行深入研究.
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Nck1与子宫颈鳞癌微血管生成的关系及分子机制
目的 探讨Nck1表达与子宫颈鳞癌微血管生成的关系及其分子机制.方法 采用免疫组化MaxVision法检测50例子宫颈鳞癌组织和15例慢性子宫颈炎组织中Nck1蛋白的表达.采用CD34内皮标记癌组织的微血管密度(microvascular density,MVD)并根据Weinner的标准计数.分别通过表达质粒pCMV2-Nck1和Nck1-shRNA转染子宫颈鳞癌细胞获得Nck1基因过表达和基因沉默;应用Western blot法检测细胞蛋白的表达;ELISA法检测细胞上清液中VEGF的蛋白含量.利用Matrigetube formation assay检测内皮细胞的管腔形成能力.结果 Nck1的表达水平在子宫颈炎组织(3 769.84±2 236.0)、子宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)I(13 703.18±1 712.36)、CINⅡ(35 033.84 ±6 516.05)和CINⅢ(55 966.19±9 583.82)以及浸润型子宫颈鳞癌组织(138 329.1 ±97 391.4)各组间比较呈显著升高(P＜0.05),且子宫颈鳞癌组织中NCK表达与MVD正相关(r=0.586,P＜0.05).SiHa细胞Nck1基因转染和RNA干扰分别引起VEGF表达上调和下降(P均＜0.05),相应的癌细胞上清液刺激下的内皮细胞管腔形成能力也分别显著高于和低于对照组(P均＜0.05).PAK1特异性抑制剂能显著抑制Nck1介导的VEGF表达上调.结论 Nck1促进子宫颈鳞癌的微血管诱生能力,其分子机制与Nck1激活子宫颈鳞癌PAK1信号从而上调VEGF的表达有关.
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肝癌细胞转移与PI3K-Akt-PAK1通路的相关性研究
目的 研究肝细胞癌(HCC)组织PI3K/Akt/p21活化蛋白激酶1(PAK1)信号通路的表达对于HCC发生及转移的重要性,以期为HCC的预防和预后提供一个有效的分子标志,并为HCC的治疗提供一定的理论基础.方法 自NCBI中GEO数据库中的GES364数据集提取数据,对PI3K/Akt/PAK1信号通路基因的表达量进行分析.结果 将数据库中HCC组织分为肝内扩散组(PS)、肝外转移组(PM)、无转移组(PN)和正常肝对照组(H).分析发现PS组和PM组PAK1和MMP-9表达量明显高于H组和PN组(P<0.0001);PS组、PM组和PN组AKT(1/2)和Girdin表达量明显高于H组(P<0.05),PS组和PM组AKT2和Girdin表达量也明显高于PN组(P<0.05);在PM组,AKT2与PAK1表达呈正相关(r=0.5679,P=0.0013).结论 PAK1和MMP-9高表达可以促进HCC的扩散和转移,而AKT的表达和活性对于HCC的转移也是至关重要的,提示PI3K/AKT/PAK1信号通路与HCC转移密切相关.
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Rac1和Pak1在胰腺癌中的表达及其意义
Ras相关的C3肉毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxinsubstrate 1,Racl)是Rho家族(Ras homologue family,Rho)重要成员之一,p21蛋白活化激酶(p21-activated kinase 1,Pak1)是Rac1的效应物,是早被鉴定的RHO GTP酶下游效应分子.Rac1和Pak1在多种肿瘤中异常高表达,与肿瘤分化程度及淋巴转移呈正相关[1-3],本文对胰腺癌中Rac1及Pak1的表达情况进行了分析.
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PAK1-nNOS-NO信号通路在有氧运动减轻压力负荷小鼠心肌肥厚中的作用及其机制
目的:有氧运动减轻压力负荷小鼠心肌肥厚中PAK1-nNOS-NO发挥的作用及机制.方法:将C57BL/6小鼠通过主动脉缩窄术(transverse aortic constriction,TAC)建立小鼠压力负荷模型,通过游泳对其进行有氧运动干预.将小鼠随机分为5组:假手术(SHAM),SHAM+有氧运动(SHAM+E),TAC,TAC+有氧运动(TAC+E)和TAC+有氧运动+IPA-3(TAC+E+I)组.通过小鼠心脏重量指数(heart weight to body weight ratio,HW/BW)变化和心脏结构变化评价心脏肥大程度,心肌组织麦胚凝集素染色评价心肌细胞肥大程度;ELASA试剂盒检测心肌组织NO水平,MDA含量和SOD活性.Western印迹检测p-PAK1,eNOS,p-eNOS Ser114,nNOS和p-nNOS Ser1412蛋白表达水平.结果:随着术后时间的延长,与SHAM组相比,TAC组HW/BW、左室质量(left ventricular mass,LVM)、左室后壁厚度(left ventricular posterior wall thickness,LvPWS)以及室间隔厚度(interventricular septal thickness,IVSS)显著增加,心肌细胞肥大,MDA含量增高,SOD活性降低,但p-PAK1蛋白含量和NO水平却显著降低.有氧运动后,TAC+E组与TAC组相比HW/BW和LVM降低,心肌细胞肥大程度减轻,组织MDA含量减少,SOD活性升高,p-PAK1表达增加,NO水平升高.而给予PAK1抑制剂IPA-3后,与TAC+E组相比,运动训练对心肌肥厚的作用减弱.TAC小鼠eNOS和nNOS表达增高,p-nNOS Ser1412和p-eNOS Ser114表达降低.运动训练可上调nNOS,p-nNOS Ser1412和p-eNOS Ser114表达;而注射IPA-3后,TAC+E+I小鼠与TAC+E小鼠相比,nNOS和p-nNOS Ser1412表达降低,eNOS和p-eNOS Ser114蛋白表达水平无明显改变.结论:PAK1-nNOS-NO信号可能是介导有氧运动减轻压力负荷小鼠心肌肥厚作用的关键信号通路.
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结直肠癌中P21-激活激酶1基因表达与扩增及其临床病理学意义
目的 探讨P21-激活激酶1(PAK1)基因在结直肠癌(CRC)中的表达与扩增及其临床病理学意义.方法 运用免疫组织化学(免疫组化)、荧光原位杂交和末端脱氧核苷酸转移酶介导缺口末端标记方法,检测PAK1基因在80例CRC和30例结直肠良性腺瘤组织芯片中的表达、扩增及其细胞凋亡情况.结果 免疫组化结果显示,26%的结直肠良性腺瘤和62%的CRC出现PAK1蛋白过度表达.CRC中PAK1蛋白表达与肿瘤组织学分级、临床分期均有显著相关性(P<0.05).90%低分化(G3级)CRC中出现PAK1蛋白过度表达,显著高于中-高分化CRC(G1/2级)的51%;78%的临床晚期(Dukes C、D期)CRC组织呈PAK1蛋白过度表达,也显著高于临床早期(Dukes A、B期)的53%.PAK1蛋白在CRC中的表达与肿瘤细胞凋亡指数(AI)呈显著负相关(P<0.05).荧光原位杂交检测发现,只有3%的CRC出现PAK1基因扩增.结论 PAK1蛋白过度表达可能在结直肠肿瘤的发生发展中起重要作用,而且与CRC的组织学和临床浸润表型密切相关,可作为判断CRC恶性程度与进展的新分子标记物之一.
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β-榄香烯对SGC7901胃癌细胞增殖和凋亡的影响
目的：探讨β-榄香烯对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及其可能的分子机制。方法通过四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）、流式细胞术检测细胞凋亡、周期分布和平板克隆形成实验检测β-榄香烯对SGC7901胃癌细胞的影响，同时评价β-榄香烯对正常胃黏膜上皮细胞GES-1的毒性作用；通过Western blots检测β-榄香烯对SGC7901胃癌细胞的蛋白表达影响。结果β-榄香烯显著抑制SGC7901胃癌细胞的活性并诱导细胞凋亡，两种作用在正常胃黏膜上皮细胞GES-1中明显减弱。β-榄香烯降低SGC7901胃癌细胞克隆形成率，诱导SGC7901细胞发生G2/M期阻滞。β-榄香烯降低了SGC7901胃癌细胞Bcl-2蛋白表达水平，增加了Bax和活化的Caspase-3（17Kd）表达水平。β-榄香烯对SGC7901胃癌细胞Pak1（p21-activated protein kinase 1）的总蛋白表达无明显影响，但降低了Pak1（Thr423）和ERK1/2（Extracellular signal-Regulated Kinase 1/2）的磷酸化水平。结论β-榄香烯抑制胃癌细胞增殖，诱导胃癌细胞凋亡，其可能的分子机制为抑制Pak1/ERK信号通路的活化、调控Bcl-2和Bax等凋亡相关蛋白表达。
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PAK1在结直肠癌增长和转移中的作用
PAKs(p-21活化激酶)是分子量21 kD,Rho家族的小GTP酶;在哺乳动物中PAK有6种,可分成第1组PAKs (PAK1~3)和第2组 PAKs(PAK4~6).PAK1(p-21活化激酶1)是第1个被鉴定并且研究多的PAK家族成员,PAK1的效应蛋白为Rac和Cdc42,在细胞形成、运动、生存和增殖调节中起重要作用;同时,在肿瘤的发生、发展过程中,PKA1也发挥着重要的作用.
