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脑组织过表达犬尿氨酸酶的转基因小鼠对血压的影响
目的 本研究旨在构建脑组织选择性过表达犬尿氨酸酶(Kynu)的转基因小鼠,在整体水平研究KYNU活性增强对血压的影响.方法 构建在神经元特异性烯醇酶(NSE)启动子控制下的大鼠Kynu表达载体,采用受精卵原核注射的方法 获得脑组织过表达Kynu的转基因小鼠.采用PCR鉴定转基因阳性小鼠;荧光实时定量逆转录PCR(Real Time RT-PCR)、蛋白免疫印迹技术(West-ern blot)免疫组织化学方法 检测转基因的表达;高效液相色谱(HPLC)检测KYNU的活性;鼠尾法测量小鼠血压.结果转基因小鼠与同窝阴性对照小鼠相比,脑干组织中KYNU的表达有显著的差异(P<0.01),不同发育阶段转基因小鼠脑干组织Kynu活性与同窝阴性对照小鼠相比,存在显著差异(12周,0.1613±0.0153 vs.0.0019±0.0002 nmoL/min/mg,P<0.01;35周,0.5817 4-0.1476 vs.0.0038±0.0004 nmol/min/mg,P<0.05;>1年,0.1909 ± 0.0115 vs.0.0036±0.0011 nmol/min/mg,P<0.01).但两组小鼠的收缩压没有显著差异(12周,113.6±3.9 vs.109.3±2.3 mmHg,P>0.05;35周,114.6 ± 2.5 vs.113.1±4.2 mmHg,P>0.05;>1年,121.3 ± 2.6 vs.123.9 ±3.5mmHg,P>0.05).给予游泳应激刺激后,两组小鼠间的血压也无显著差别.结论 脑干组织Kynu的过表达并没有引起日间的和应激的血压值改变,KYNU在血压调节中的作用有待于进一步的研究.
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人淋巴细胞犬尿氨酸酶活性的测定
目的 建立人淋巴细胞犬尿氨酸酶活性的高效液相色谱检测法.方法 以人淋巴细胞总蛋白作为酶的来源,以3-羟基犬尿氨酸为底物,5'磷酸吡哆醛为辅酶,进行酶促反应,产物经ODS色谱柱分离后用荧光检测器定量检测,从单位时间内产物的增加量来计算犬尿氨酸酶的催化活性.结果 该方法检测产物的线性范围是2～400 nmol/L.方法 的重复性好,日内变异系数(CV)≤3.0%,日间CV≤3.2%.结论 该方法适用于测定各种生物组织样本中犬尿氨酸酶的活性.
