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结直肠癌干细胞的研究进展
结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是常见的消化系恶性肿瘤之一,其发生、发展及预后与肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)有着密切联系.CSCs是肿瘤中极小一部分具有无限自我更新、多向分化潜能和高度恶性的肿瘤细胞亚群,其已被证实存在于包括结肠癌在内的多种类型肿瘤中.CSCs赋予肿瘤转移、化学耐药和对微环境的持续适应能力.本文基于近年来国内外发表的CRC干细胞相关论文,就其表面标志物、生物学特性、信号通路及临床意义等方面进行综述.
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AC133抗原联合 EpCAM 识别转移性结直肠癌干细胞的研究
目的：利用AC133抗原联合EpCAM检测人结直肠癌组织中结直肠癌干细胞，并初步观察其生物学特性，为后续结直肠癌干细胞研究提供实验基础。方法利用新鲜结直肠癌组织，无血清悬浮成球培养，流式细胞检测AC133、EpCAM 的表达情况，Balb/C小鼠移植观察其成瘤情况。组间比较采用t检验，以P＜0．05为差异有统计学意义。结果从人原代结肠腺癌中分离、纯化AC133＋EpCAM ＋结直肠癌干细胞，结直肠癌原代细胞中AC133＋EpCAM ＋细胞比例为1．5％～35％（平均4．8％）。单克隆形成实验证实结直肠癌组织中存在肿瘤干细胞。其比例为2．18±0．15％，分离获得的AC133＋EpCAM ＋细胞能在无血清培养基中“成球”，在血清诱导下能贴壁分化；将AC133＋EpCAM＋细胞移植在Balb/C裸鼠体内，表现出很强的致瘤性，移植瘤中AC133＋EpCAM ＋细胞比例为4．9％～40．2％（平均17．2％）。结论人结肠腺癌组织中存在AC133＋EpCAM ＋细胞群，具有和普通干细胞相类似的无限增殖、自我更新和分化能力，可为人结直肠癌干细胞的后续研究提供实验基础。
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靶向下调上皮细胞黏附分子对结直肠癌干细胞功能及药物敏感性的影响
目的 研究靶向下调上皮细胞黏附分子(ECAM)对结直肠癌干细胞增殖、侵袭及药物敏感性的影响.方法 用肿瘤微球法从人结直肠癌细胞系LoVo中获取结直肠癌干细胞,用结直肠癌干细胞表面特殊标志物[ECAM和人类细胞分化抗原44(CD44)]对其进行鉴定并进行后续研究.用lipofectamine 2000脂质体介导完成转染,根据处理方法不同将细胞分为3组:实验组(ECAM抑制组),对照组(转染公共抑制剂lipofectamine 2000-抑制剂),空白组(不作任何处理),并进行培养,取3组对数期的细胞分别给予几个浓度(1,5,10,15,20,25,30,35,40,45,50 mg·L-1)伊立替康和几个浓度(50,100,150,200,250,300,350,400,450,500,550,600mg·L-1)卡培他滨,继续培养.用实时荧光定量检测用药前后3组细胞中ECAM mRNA的表达水平,用噻唑蓝(MTT)法检测用药前后3组细胞的增殖能力和药物敏感性,用Transwell小室检测3组细胞的侵袭能力.结果 在富集前后的LoVo细胞系中,EpCAM+ CD44+双阳结直肠癌干细胞的百分率分别是0.95％,85.78％,与富集前比较差异均有统计学意义(均P＜0.05).空白组、对照组和实验组中EpCAM mRNA的表达水平分别为8.17±0.64,7.94±0.83,2.16±0.12,对照组和实验组与空白组比较,差异均有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01);实验组与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),说明3组细胞构建成功.空白组、对照组和实验组中侵袭细胞分别为79.22--5.25,80.12 ±4.89,31.23±2.36.对照组和实验组与空白组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);实验组与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).空白组、对照组与实验组的伊立替康对结直肠癌干细胞的IC50分别为(20.25±4.35),(19.22±3.99),(10.24±2.04) mg·L-1;这3组的卡培他滨对结直肠癌干细胞的IC50分别为(320.13±23.65),(315.79 ±21.03),(250.22±15.45)mg·L-1,实验组与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 靶向下调ECAM可以有效地抑制结肠癌干细胞增殖及侵袭能力,同时增强其对药物的敏感性.
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MiR-19反义核酸与CD133+ HT29细胞亚群对多柔比星敏感性关系的研究
目的 探讨miR-19反义核酸与CD 133+ HT29细胞亚群对多柔比星敏感性的关系并研究其机制.方法 用RT-qPCR方法检测miR-19在结直肠癌细胞中的表达水平.流式细胞术检测miR-19反义核酸和多柔比星对HT29细胞系的CD133+细胞亚群种群比例的影响.MTT法检测miR-19反义核酸对多柔比星杀伤CD133+ HT29细胞亚群能力的影响.利用生物信息学及Western blot法验证miR-19是否调节CD133+ HT29细胞亚群中PTEN的表达.运用Western blot、免疫共沉淀、流式细胞术研究miR-19反义核酸影响多柔比星疗效的信号通路.结果 结直肠癌细胞系的miR-19表达水平显著高于正常结直肠上皮细胞系,并且CD133+细胞中的miR-19表达水平显著高于常规结直肠癌细胞.多柔比星体外单独治疗能提高HT29细胞系中CD133+细胞亚群的比例,然而联用miR-19反义核酸后CD133+ HT29细胞亚群的种群比例显著下降.MTT结果表明miR-19反义核酸可显著增强多柔比星对CD133+ HT29细胞亚群的杀伤活性.Western blot实验表明miR-19的靶基因可能为PTEN.MiR-19反义核酸可显著抑制CD133+ HT29细胞亚群PI3K、AKT和Bad的磷酸化,增强Bad与Bcl-2和Bcl-xl的结合,从而提高CD133+ HT29细胞亚群对多柔比星依赖的凋亡信号的敏感性,促进caspase-9和caspase-3的活化.结论 MiR-19反义核酸通过PTEN/PI3K/AKT/Bad途径提高CD133+ HT29细胞亚群对多柔比星的敏感性.
