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凉膈散对内毒素致急性肺损伤大鼠高迁移率族蛋白1影响
目的 观察凉膈散对内毒素脂多糖(LPS)致急性肺损伤(ALI)大鼠高迁移率族蛋白1(HMGB1)表达的影响,探讨凉膈散治疗ALI的抗炎机制.方法 选取健康雄性SD大鼠72只,随机分为6组,每组12只,分别为正常对照组、ALI模型组、凉膈散大剂量组、凉膈散中剂量组、凉膈散小剂量组和泼尼松治疗组.给予正常对照组大鼠气管内滴注生理盐水,其余各组大鼠均气管内滴注LPS,每天一次,连续2 d,气道内滴注1 h后分别以生理盐水、凉膈散不同剂量、泼尼松灌胃,每天2次.分别于第二次气管滴注后12 h、24 h每组处死6只.取肺组织,采用荧光定量PCR和Western blot检测HMGB1基因和蛋白的表达,各组指标的均数比较均采用SPSS 19.0软件进行单因素方差分析,P<0.05为差异具有统计学意义.结果 12 h肺组织HMGB1 mRNA灰度值模型组(1.3655±0.4492)高于正常对照组(0.3898±0.1696)(P<0.01),泼尼松组(0.6008±0.2128)、凉膈散大剂量组(0.6707±0.2175)、中剂量组(0.7315±0.2001)、小剂量组(0.7993±0.5526)均低于模型组(1.3655±0.4492)(P<0.01),HMGB1相对光密度值模型组(30.03±0.15)高于正常对照组(12.20±0.10)(P<0.01),泼尼松组(13.47±0.25)、凉膈散大剂量组(15.70±0.20)、中剂量组(18.60±0.20)、小剂量组(22.47±0.25)均低于模型组(30.03±0.15)(P<0.01);24 h肺组织HMGB1 mRNA灰度值模型组(1.7109±0.8028)高于正常对照组(0.6918±0.2453)(P<0.01),泼尼松组(0.7270±0.0977)、凉膈散大剂量组(0.7825±0.1780)、中剂量组(0.9433±0.1136)、小剂量组(1.1255±0.2137)均低于模型组(1.7109±0.8028)(P<0.01或P<0.05),HMGB1相对光密度值模型组(30.63±0.25)高于正常对照组(10.27±0.31)(P<0.01),泼尼松组(13.63±0.15)、凉膈散大剂量组(18.63±0.21)、中剂量组(22.57±0.21)、小剂量组(24.53±0.32)均低于模型组(30.03±0.15)(P<0.01或P<0.05).结论 凉膈散可抑制肺组织 HMGB1 蛋白及mRNA表达,从而减轻ALI肺部炎症反应.
关键词： 急性肺损伤 凉膈散 高迁移率族蛋白质1 高迁移率族蛋白1mRNA -
低镁对脂多糖诱导巨噬细胞表达和释放高迁移率族蛋白1的影响
目的 探讨低镁对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7表达和释放高迁移率族蛋白1(HMGB1)的促进作用.方法 传代培养的小鼠RAW 264.7细胞分为4组,接种于6孔板,每组为3孔,4组分别为含1 mmol/L硫酸镁的RPMI1640培养基组(C1组)、含0.1 mmol/L硫酸镁的RPMI1640培养基组(C0.1组)、含1 mmol/L硫酸镁的RPMI1640培养基加500 ng/mL LPS的刺激组(L1组)和含0.1 mmol/L硫酸镁的RPMI1640培养基加500 ng/mL LPS的刺激组(L0.1组).孵育24 h后,收集细胞及细胞培养上清液,用反转录-聚合酶链反应和酶联免疫吸附试验分别检测各组细胞内HMGB1 mRNA表达水平和细胞培养上清液中HMGB1蛋白含量的变化.结果 C0.1组与C1组间HMGB1 mRNA及蛋白表达的差异均无统计学意义(P值均＞0.05),L1组和L0.1组HMGB1 mRNA及蛋白的表达均显著高于C0.1组和C1组(P值均＜0.05),L0.1组又显著高于L1组(P值均＜0.05).结论 低镁促进LPS诱导的RAW264.7细胞表达和释放HMGBI,可能对脓毒症患者的预后有一定损害作用.
关键词： 低镁 硫酸镁 高迁移率族蛋白质1 脂多糖 RAW264.7细胞 -
硫酸镁对脂多糖诱导巨噬细胞表达和释放高迁移率族蛋白1的影响
目的 探讨硫酸镁对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7表达和释放高迁移率族蛋白1( HMGB1)的抑制作用.方法 传代培养的小鼠RAW264.7细胞分5组接种于6孔板,每组为3孔.C组为仅加RPMI 1640培养液的对照组,LPS组为在RPMI 1640培养液的基础上加500 ng/mL LPS的诱导组,M1组为在LPS组基础上加1 mmol/L硫酸镁的干预组,M5组为在LPS组的基础上加5 mmol/L硫酸镁的干预组,M10组为在LPS组基础上加10 mmol/L硫酸镁的干预组.孵育24 h后,收集细胞及细胞培养上清液,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测各组细胞内HMGB1 mRNA表达水平和细胞培养上清液中HMGB1蛋白含量的变化.结果 M1、M5、M10组的RAW264.7细胞活性分别为1.35±0.10、1.34±0.11、1.31±0.08,差异均无统计学意义(P值均＞0.05).LPS、M1、M5、M10组细胞上清液中HMGB1蛋白的含量分别为(82.80±9.15)、(81.26±8.47)、(56.69±6.21)、(50.71±6.62)ng/mL,均显著高于C组(C组为0,P值均＜0.05)；M5、M10组细胞上清液中HMGB1蛋白的含量均显著低于LPS及M1组(P值分别＜0.05或0.01).LPS、M1、M5、M10组细胞中HMGB1 mRNA的相对表达量分别为1.435±0.161、1.416±0.124、0.873±0.093、0.774±0.067,均显著高于C组的0.195±0.020(P值均＜0.05)；M5、M10组细胞中HMGB1 mRNA的相对表达量均显著低于LPS及M1组(P值分别＜0.05或0.01).结论 硫酸镁抑制LPS诱导的RAW264.7细胞表达和释放HMGB1,通过抑制与脓毒症致死性密切相关的关键炎性因子,可能对脓毒症患者具有一定保护作用.
关键词： 硫酸镁 高迁移率族蛋白质1 脂多糖 RAW264.7细胞 -
异丙酚对脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞表达释放高迁移率族蛋白1的抑制作用
目的 探讨异丙酚对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAw 264.7表达和释放高迁移率族蛋白1(high mobility group box 1 protein,HMGB1)的抑制作用.方法 检测LPS刺激后,传代培养的小鼠RAW 264.7细胞表达分泌HMGB1的时间梯度,确定RAW 264.7细胞表达分泌HMGBl浓度高的时间点.随后将RAW 264.7细胞分3组接种于6孔板,每组为两孔:即仅加培养液的对照组(control组);加250μg/L LPs的诱导组(LPS组);加250μg/L LPS基础上加50 μmol/L异丙酚的干预组(LPS+异丙酚组).培养至HMGB1表达分泌浓度高的时间点后,收集细胞及细胞培养上清,用RT-PCR和Westem blot法分别检测各组细胞内HMGB 1 mRNA表达水平和HMGB1蛋白表达水平,用Westem blot法检测细胞培养上清中HMGB1含量的变化.结果 LPS刺激RAW 264.7细胞后16 h,HMGB1表达达到高峰,随后有所下降;加入异丙酚干预后,细胞HMGB1表达及释放显著低于LPS刺激组(P<0.05);LPS刺激RAW 264.7细胞后16 h,HMCB1 mRNA表达水平明显增强,而加入异丙酚干预后,则明显抑制HMGB1 mRNA表达水平.各组细胞中HMCB1蛋白含量变化和mRNA水平变化一致.结论 异丙酚抑制LPS诱导的RAW264.7细胞表达和释放HMGBl,可能对LPS血症具有一定保护作用.
关键词： 异丙酚 高迁移率族蛋白质1 脂多糖 RAW264.7细胞 -
高迁移率族蛋白质1在心力衰竭患者血清中表达及意义
目的 探讨高迁移率族蛋白质1(high mobility group box 1 protein,HMGB1)在心力衰竭中的致病作用.方法 心力衰竭患者42例,按照NYHA心功能分级分组,心功能Ⅱ级组16例,心功能Ⅲ级组14例,心功能Ⅳ级组1 2例,心功能正常者20例为对照组.采用酶联免疫法测定HMGB1、脑钠肽前体(pro-brain natriuretic peptide,pro-BNP)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和高敏C反应蛋白(high sensitivity C-reactive protein,hs-CRP).超声检查测定心功能.结果 心力衰竭患者各组HMGB1、pro-BNP和TNF-α均较对照组明显升高(P＜0.05),随心力衰竭分级加重,上述指标水平升高更明显,两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05);血清HMGB1与pro-BNP、TNF-α、hs-CRP、左室射血分数水平呈正相关(r=0.630,P=0.043;r=0.560,P=0.046;r=0.540,P=0.048;r=0.670,P=0.041).结论 HMGB1水平升高对心力衰竭的诊断及病情评估有重要价值.
