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慢性阻塞性肺疾病患者T 淋巴细胞亚群凋亡与Fas 、FasL 、Bcl-2表达的关系
目的 探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者外周血T 淋巴细胞亚群CD4+、CD8+T 细胞凋亡状态及其细胞表面Fas 、FasL 、Bcl-2 抗原的表达,以探讨T 淋巴细胞亚群凋亡不足/过度与这些抗原表达的关系.方法 选取急性加重期(AE-COPD)及稳定期COPD 患者30 例,另设正常对照组20 例,采用流式细胞仪测定外周血T 淋巴细胞亚群细胞凋亡率及其表面Fas 、FasL 、Bcl-2 抗原表达水平.结果 (1)与正常对照组相比,COPD 急性加重期及稳定期患者CD4+T 凋亡率均增加,CD8+T 凋亡率均降低,P ＜0.05 ;与COPD 稳定期相比,COPD 急性加重期患者CD4+凋亡率增加,CD8+凋亡率降低,P ＜0.05 ;(2)与正常对照组相比,COPD 急性加重期及稳定期患者CD4+Fas 、CD4+FasL 的表达均增加,CD4+Bcl-2 表达降低,P ＜0.01 ;与COPD 稳定期相比,COPD 急性加重期患者CD4+Fas 、CD4+FasL 的表达均增加,CD4+Bcl-2 表达降低,P ＜0.05 ;且COPD 稳定期、急性加重期CD4+凋亡率均与CD4+Fas 、CD4+FasL 正呈相关,与CD4+Bcl-2 负相关;(3)与正常对照组相比,COPD 急性加重期及稳定期患者CD8+Fas 、CD8+FasL 的表达均增加(P ＜0.05 );与COPD 稳定期相比,COPD 急性加重期患者CD8+Fas 、CD8+FasL 的表达增加(P ＜0.05),三组之间CD8+Bcl-2 表达无统计学意义(P ＞0.05 );CD8+凋亡率与CD8+Fas 、CD8+FasL 、CD8+Bcl-2 表达无相关性.结论 (1)COPD 患者CD4+T 凋亡增加,凋亡途径Fas /FasL 及Bcl-2 可能起重要作用;(2) COPD 患者CD8+凋亡与其表达Fas 、FasL 、Bcl-2 无相关性,凋亡途径Fas /FasL 及Bcl-2 可能不起主要作用,其具体机制有待进一步研究.
关键词： 肺疾病 慢性阻塞性 细胞凋亡 CD4阳性T淋巴细胞 CD8阳性T淋巴细胞 抗原 CD95 Fas配体蛋白质 基因 Bcl-2 -
贝那普利改善糖尿病大鼠心功能的机制探讨
目的通过观察糖尿病大鼠心功能的变化，探讨贝那普利对其可能的影响机制。方法30只SD大鼠随机分为空白对照组（n＝10）和糖尿病模型组（n＝20），糖尿病组用链脲佐菌素（STZ）腹腔注射建模，成功后再随机分为糖尿病对照组（n＝10）和贝那普利治疗组（n＝10）。治疗组给予贝那普利10 mg· kg-1· d-1灌胃，糖尿病对照组和空白对照组给予相同体积的生理盐水灌胃。给药9周后，彩色多普勒超声检测心功能，SP免疫组化法检测心肌组织Fas蛋白表达率，放射免疫法检测心肌局部血管紧张素Ⅱ（ AngⅡ）含量，电镜下观察心肌超微结构变化。结果与空白对照组相比，糖尿病模型组AngⅡ的含量明显增多（4340.67±348.37 vs．5367.43±498.28，P＜0.01），Fas蛋白表达率明显升高[（1.87±0.73）％ vs．（35.68±0.79）％，P＜0.01]；与糖尿病模型组对比，贝那普利治疗组可显著降低AngⅡ含量，降低Fas 蛋白表达[5367.43±498.28 vs．4501.50±129.33，P＜0.01；（35.68±0.79）％vs．（28.00±0.63）％，P＜0.05]；应用贝那普利治疗后，可有效改善心功能（ P＜0.01）。结论糖尿病大鼠心功能明显降低，贝那普利则可通过降低AngⅡ、Fas蛋白表达改善心功能。
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口腔扁平苔藓固有层淋巴细胞中Fas及Fas配体的表达变化
目的 检测Fas及Fas配体(Fas ligand,FasL)在口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)固有层淋巴细胞中的蛋白表达,探讨Fas、FasL和活化诱导的细胞死亡(activation-induced cell death,AICD)与OLP发病的关系.方法 采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记法检测31例OLP和10例正常口腔黏膜(normal oral mucosa,NOM)中淋巴细胞凋亡情况;分别使用免疫组化法检测组织总淋巴细胞及CD8~+、CD4~+T细胞Fas、FasL的表达.结果 OLP与NOM固有层淋巴细胞凋亡率[分别为(1.9±1.8)%、(11.5±9.0)%]差异有统计学意义(P=0.013).OLP淋巴细胞Fas、FasL表达与NOM组相比明显增强[阳性表达率分别为52%(16/31)、71%(22/31),P值分别为0.005、0.000].OLP中CD8~+与Fas~+细胞双阳性表达率为10%,与NOM组相比无明显升高(P=0.313),而CD8~+与FasL~+细胞双阳性表达率[58%(3/31)]显著升高(P=0.002).CD4~+与Fas~+细胞双阳性表达率为35%(11/31),较NOM组显著升高(P=0.031),其中网纹型的表达明显升高(阳性表达为8/19,P=0.019),但糜烂、萎缩型的表达无显著升高(阳性表达为3/12,P=0.097).CD4~+与FasL~+表达率为16%(5/31),与NOM组相比无明显增强(P=0.182).结论 OLP淋巴细胞凋亡低下;OLP中T细胞亚群Fas、FasL表达不均衡,CD8~+细胞和萎缩、糜烂型OLP中CD4~+细胞可能逃逸AICD,与炎症的持续和进展有关;网纹型OLP中部分CD4~+T细胞可能经历AICD.
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贝那普利对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡及左心室重构的影响
目的 探讨贝那普利对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡及左心室重构的作用及其机制.方法 SD大鼠ip给予链脲佐茵素制备糖尿病模型.实验分为正常对照组、糖尿病模型组和贝那普利治疗组.贝那普利治疗组大鼠ig给予贝那普利10 mg·kg-1,每天1次,连续12周.测定心脏质量指数、左心室内压大上升和下降速率(±dp/dtmax)、左心室压(LVP)、左心室舒张末压(LVEDP)、血浆血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)水平;取左心室心肌.用TUNEL方法检测心肌细胞凋亡及凋亡相关基因Fas配体(FasL)mRNA及蛋白表达.结果 与正常对照组相比,糖尿病模型组大鼠血浆Ang Ⅱ水平明显增高,从440±20增高到(863±38)ng·L-1(P<0.05);LVP从19.3±0.5明显降低到(14.7±1.2)kPa(P<0.05);+dp/dtmax从1020±55降低到(778±80)kPa·s-1(P<0.05);-dp/dtmax从705±44降低到(420±62)kPa·s-1(P<0.01);LVEDP从0.13±0.06升高到(0.50±0.09)kPa(P<0.05);心脏质量指数明显升高,从2.93±0.10升高到(4.13 4±0.18)mg·g-1(P<0.01);心肌细胞凋亡数目增多,凋亡率从(0.5±0.3)%明显增加到(23.1±1.6)%(P<0.01),FasL基因和蛋白表达显著增强(P<0.01).与模型组相比,贝那普利组大鼠连续12周ig给予贝那普利后,Ang Ⅱ水平从863±38明显降低到(619±24)ng·L-1(P<0.05);LVP从14.7±1.2明显升高到(17.6±0.8)kPa(P<0.05);+dp/dtmax从778±80明显升高到(913 4±58)kPa·s-1(P<0.05),-dp/dtmax从420±62明显升高到(574±54)kPa·s-1(P<0.05),LVEDP从0.50±0.09明显降低到(0.28±0.47)kPa(P<0.05),心脏质量指数从4.13±0.18明显降低到(3.42±O.13)mg·g-1(P<0.05);心肌细胞凋亡数目减少,从(23.1±1.6)%降低到(17.1±1.0)%(P<0.05);FasL基因和蛋白表达均明显下调(P<0.05).结论 贝那普利的干预可以抑制糖尿病心肌细胞凋亡,改善心室重构,保护心脏功能.其机制可能与下调凋亡相关基因FasL表达有关.
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自身免疫性淋巴细胞增生综合征1例并文献复习
报道2013年10月北京大学第一医院诊治的1例自身免疫性淋巴细胞增生综合征( autoimmune lympho-proliferative syndrome,ALPS)的临床诊疗过程,并复习国内外新文献. 该男性患儿就诊时为11个月,生后早期起病,病程中主要表现为淋巴结、肝脾肿大,伴溶血性贫血、慢性感染(巨细胞病毒、细小病毒B19 感染以及慢性腹泻),外周血双阴性T细胞(double negative T cells,DNTs)明显升高(占淋巴细胞的27. 18%,CD3+T淋巴细胞的35. 16%),多种自身抗体阳性(包括抗核抗体、双链DNA、类风湿因子)以及高丙种球蛋白血症. 父母双方均体健,否认自身免疫性疾病病史. 经基因诊断提示存在FAS基因c. 309A>C杂合突变,位于FAS基因3号外显子,导致FAS蛋白第103位氨基酸由精氨酸( R)突变为丝氨酸( S). 但基因结果仍需进一步验证父母双方基因及正常对照,明确是否为致病基因. 该患儿临床经过糖皮质激素治疗,并在外院接受霉酚酸酯治疗,贫血改善,仍有反复感染,肝脾回缩但未至正常. ALPS的特征是编码细胞Fas/FasL凋亡途径的基因发生突变引起的一组临床症候群,特点突出,早期容易误诊为其他疾病,需对外周血淋巴细胞进行分析,治疗手段主要依赖于免疫抑制剂治疗.
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幽门螺旋杆菌感染和FasL蛋白表达在胃癌发生中的变化
目的 探讨幽门螺旋杆菌(H.pylori)感染和Fas配体(FasL)蛋白表达在胃癌(GC)发生发展中的变化.方法 选取2010年1月至2011年9月在上海浦东新区南汇中心医院诊断的胃部病变169例患者,其中慢性浅表性胃炎(CSG)25例、慢性萎缩性胃炎(CAG)28例、肠化生(IM)37例、异型增生(Dy)38例和胃癌(GC)41例.分别检测胃黏膜组织中H.pylori感染和FasL的蛋白表达,分析H.pylori感染和FasL的蛋白在GC发生发展中的相关性.结果 H.pylori感染率和FasL蛋白阳性表达率随着病情的加重而逐渐增高,Dy组及GC组H.pylori感染率比CSG组明显升高(65.8％和75.6％ vs 16.0％)(P＜0.05);IM组、Dy组及GC组FasL蛋白阳性表达率比CSG组明显升高(64.9％、78.9％和92.7％ vs 28.0％)(P＜0.05) ;GC组FasL蛋白阳性表达率比CAG组及IM组明显升高(92.7％vs 60.7％；92.7％ vs 64.9％)(P＜0.05).除CSG外,H.pylori感染与CAG、IM、Dy和GC胃黏膜组织中的FasL蛋白表达具有一致性,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 FasL蛋白表达和H.pylori感染对评估胃黏膜癌前病变发展趋势有重要的临床价值,有助于早期发现和诊断GC.
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来氟米特对佐剂关节炎大鼠血清及滑膜Fas系统的影响
目的 通过观察来氟米特(leflunomide,LEF)治疗前后佐剂关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠外周血T淋巴细胞及滑膜中Fas/Fas L水平的变化情况,了解LEF对AA大鼠外周血T淋巴细胞及滑膜细胞凋亡的影响.方法 选用Wistar太鼠60只,随机分为5组:空白组,模型组,甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)治疗组(MTX组),LEF治疗组(LEF组),MTX+LEF治疗组(MTX+LEF组).分别观察各组大鼠关节炎指数、血清Fas/Fas L水平,免疫组织化学方法检测滑膜组织Fas/Fas L表达.结果 第60天各实验组大鼠关节炎指数下降,MTX组6.83±1.93 vs3.38±1.61(P<0.01);LEF组7.35±2.16 vs 3.25±1.17(P<0.01);MTX+LEF组7.21±1.82 vs 2.13±1.18(P<0.01),模型组无明显变化(7.12±1.67 vs 6.25±1.46,P>0.05).备实验组治疗后血清Fas、Fas L水平下降,Fas,MTX组(55.3±7.5)%vs(27.34±6.8)%(P<0.01);LEF组(58.3±8.1)%vs(25.9±7.2)%(P<0.01);MTX+LEF组(54.6±7.4)%vs(18.2±4.9)%(P<0.01).Fas L,MTX组(4.1±0.5)%vs(2.4±0.5)%(P<0.01);LEF组(3.7±0.6)%vs(2.5±0.4)%(P<0.01);MTX+LEF组(3.84±0.6)%vs(1.7±0.4)%(P<0.01),模型组无变化,Fas(57.1±7.9)%vs(64.2±8.4)%(P>0.05);Fas L(4.0±0.7)%vs(4.1±0.6)%(P>0.05),各实验组及模型组滑膜组织Fas蛋白表达的IRS积分较空白组均上调,MTX组(7.5±2.2)分vs(4.2±1.0)分(P<0.01),LEF组(7.7±2.1)分vs(4.2±1.0)分(P<0.01);MTX+LEF组(9.4±2.1)分vs(4.2±1.0)分(P<0.01);模型组(5.6±1.9)分vs(4.2±1.0)分(P<0.01).各实验组滑膜组织Fas L蛋白表达较空白组均上调,MTX组(7.8±2.1)分vs(5.2±1.0)分(P<0.01);LEF组(7.9±1.8)分vs(5.2±1.0)分(P<0.01);MTX+LEF组(9.44±1.8)分vs(5.2±1.0)分(P<0.01),模型组下调(2.0±0.9)分vs(5.24±1.0)分(P<0.01).结论 LEF可以通过下调AA大鼠外周血淋巴细胞和关节滑腱Fas系统的表达来达到抗风湿作用.
关键词： 关节炎 实验性 Fas相关死亡结构域蛋白质 Fas配体蛋白质 来氟米特 -
Fas/FasL信号通路在乌司他丁后处理减轻CPB下心脏瓣膜置换术患者心肌细胞凋亡中的作用
目的 评价Fas/FasL信号通路在乌司他丁后处理减轻CPB下心脏瓣膜置换术患者心肌细胞凋亡中的作用.方法 择期CPB下心脏瓣膜置换术患者40例,性别不限,年龄21～ 59岁,心功能和ASA分级Ⅱ或Ⅲ级.采用随机数字表法,将患者分为2组(n=20):对照组(C组)和乌司他丁后处理组(U组).U组于主动脉开放前5 min经主动脉根部灌注乌司他丁4 000～5 000 U·kg-1 ·min-1(剂量1万U/kg);C组给予等容量生理盐水.于升动脉开放后45 min时取右心耳心肌组织,检测Fas、Fas配体(FasL)、caspase-8、Bcl-2、Bax表达和细胞凋亡情况,并计算Bcl-2与Bax表达的比值(Bcl-2/Bax).结果 与C组比较,U组心肌组织Fas、FasL、caspase-8及Bax表达下调,心肌组织Bcl-2表达上调,Bcl-2/Bax升高,凋亡指数降低(P＜0.05).结论 乌司他丁后处理通过抑制Fas/FasL信号通路减轻CPB下心脏瓣膜置换术患者心肌细胞凋亡.
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锌对砷中毒小鼠肝脏Fas和FasL表达影响的实验研究
目的 探讨砷对小鼠肝脏Fas、FasL表达的影响及锌的拈抗作用.方法 选用健康昆明种小鼠60只,按体质量分成5组:阴性对照组(不给砷也不给锌),单纯给砷组(55 mg/L NaAsO2溶液),砷+低锌组、砷+中锌组、砷+高锌组均给55 mg/L NaAsO2溶液,并分别给20、40、80 mg/L ZnSO4溶液.经口连续灌胃(按体质量灌胃量为0.02 ml/g.1次/d)6周,待实验结束后处死小鼠,采用免疫组化法测定小鼠肝脏巾凋亡因子Fas、FasL表达.结果 干预组随着给锌量的增加,肝脏Fas、FasL的表达率逐渐降低.低、中锌+砷组的Fas的表达率[83.33%(10/12)、50%(6/12)]、FasL表达率[66.67%(8/12)、41.67%(5/12)]与阴性对照组Fas[8.33%(1/12)]、FasL[0.00%(0/12)]表达率比较,差异有统计学意义(P均<0.05);中、高锌+砷组的Fas的表达率[50%(6/12)、25%(3/12)]与阳性对照组[8.33%(1/12)]比较,差异有统计学意义(P均<0.01),中、高锌+砷组的FasL的表达率[41.67%(5/12)、16.67%(2/12)]与阳性对照组[91.67%(11/12)]比较,差异有统计学意义(P均<0.05).结论 砷可使小鼠肝脏Fas、FasL的表达率增高,促进肝脏的凋亡,锌可拮抗砷对细胞凋亡的作用.
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强精片对不育大鼠睾丸内FasL、ABP及Occludin蛋白表达影响的实验研究
目的 观察强精片对不育大鼠睾丸生精微环境血-睾屏障(BTB)的影响及可能的机制.方法 70只雄性SD大鼠随机分为空白组(BG组)20只和雷公藤多甙片(GTW)灌胃的造模组50只,灌胃3周后两组各取10只进行模型验证.其余40只造模大鼠随机分为模型组(MG组)和强精片低剂量组(QJPL组)、中剂量组(QJPM组)、高剂量组(QJPH组),灌胃4周后处死分离睾丸,检测相关指标.结果 与BG组相比,MG组睾丸组织中FasL、ABP表达量明显上调(P＜0.01),而紧密连接蛋白Occludm表达降低(P＜0.01).应用药物强精片干预后,FasL、ABP蛋白在睾丸内表达降低,其中高剂量组更为显著(P＜0.01);Occludin蛋白较MG组表达上调,差异具统计学意义(P＜0.05).结论 通过上调睾丸组织内FasL、ABP蛋白的表达,改变支持细胞功能,同时抑制Occludm蛋白的表达,破坏BTB完整性,增加其通透性,终影响生精微环境,这可能是GTW致不育的原因之一.而强精片能够降低睾丸内FasL、ABP表达量,提高Occludin蛋白表达,修复BTB功能,可能是中药制剂改善精子功能的机制之一,但在这一过程中中药介导的具体机制尚需进一步研究.
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莪术油对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响
目的 探讨莪术油对体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞增殖及诱导凋亡的作用.方法 莪术油不同浓度(150、200、250、300和400 mg·L-1)处理MCF-7细胞至对数生长期.MTT法筛选佳药物处理浓度和时间的组合,计算抑制率.流式细胞技术检测MCF-7细胞的凋亡,并计算凋亡指数.Western blot印迹法及免疫组化法分别检测各处理组MCF-7细胞中Fas/FasL蛋白的表达.结果 莪术油对MCF-7细胞增殖的抑制率随浓度的增加而增高(P<0.05),莪术油诱导MCF-7细胞凋亡率较对照组显著增加(P<0.01),且Fas蛋白表达增加(P<0.05),FasL蛋白表达减弱(P<0.05).结论 莪术油可抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与上调Fas蛋白、下调FasL蛋白表达有关.
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Fas/FasL在中枢神经系统免疫炎症反应中的作用
Fas/FasL系统是重要的细胞凋亡信号转导系统.FasL诱导Fas阳性细胞凋亡及其机制已得到众多研究的肯定.近年来的研究发现,中枢神经系统缺血、变性、感染等多种疾病的免疫炎症病理过程中均伴有FasL和Fas水平的增高,同时诱导一些细胞因子的释放,提示Fas/FasL在中枢神经系统免疫炎症的调节中起着莆要作用,日此作用不依赖于细胞凋亡途径.文章对其在中枢神经系统免疫炎症方面的研究进展做了综述.
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青少年系统性红斑狼疮伴肾功能衰竭患者外周血T、B淋巴细胞Fas表达及凋亡的变化
目的 探讨青少年系统性红斑狼疮伴肾功能衰竭患者外周血T、B淋巴细胞Fas表达及凋亡.方法 选取50例青少年系统性红斑狼疮伴肾功能衰竭患者为研究对象,根据疾病活动程度将其分为活动期组(n=27)、稳定期组(n=23),选取同期入院体检的20例健康青少年为对照组(n=20),比较外周血T、B淋巴细胞Fas表达及细胞凋亡情况.结果 对照组外周血T、B淋巴细胞Fas表达低于另外两组,活动期组高于稳定期组(P＜0.05);T、B淋巴细胞凋亡率从高到低为活动期组、稳定期组、对照组(P＜0.05).对照组CD4+、CD8+、CD19+、CD23+ Fas表达量低于活动期组及稳定期组,活动期组高于稳定期组(P＜0.05).对照组CD4+中bc1-2表达高于另外两组,稳定期组高于活动期组(P＜0.05);对照组CD8+、CD19+、CD23+中bc1-2表达低于另外两组,稳定期组低于活动期组(P＜0.05).结论 青少年系统性红斑狼疮伴肾功能衰竭患者外周血T、B淋巴细胞异常凋亡与Fas表达上调有关.
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FasL及FasLASODN在舌鳞癌细胞免疫逃逸中的作用
目的：研究Fas配体（FasL）及FasL反义寡脱氧核苷酸（ASODN）在舌鳞癌细胞免疫逃逸中的作用。方法对人舌鳞癌细胞中FasL表达及功能进行检测，设计合成特异FasLASODN，转染舌鳞癌细胞，封闭舌鳞癌细胞的FasL表达。通过流式细胞术、逆转录聚合酶链反应（RT‐PCR）和四唑盐（MTT）等方法，观察基因‐蛋白‐细胞效应。结果通过RT‐PCR检测提示在脂质体的量一定的情况下，在一定范围内，ASO的浓度越高，转染效率越高。MTT／FCM结果显示ASO对SCC‐9细胞的增殖有明显的抑制作用（P＜0．05）。FCM对细胞凋亡的检测结果显示反义链组与正义链组、空白对照组及脂质体组相比，总凋亡率有明显差异（P＜0．05）。结论Fas／FasL途径是口腔鳞癌细胞免疫逃逸的重要机制之一，可作为免疫治疗的新靶点。
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FasL和FAP-1基因在急性髓系白血病中表达的临床意义
目的 探讨Fas配体(FasL)基因及Fas相关酪氨酸磷酸酶-1(FAP-1)基因在急性髓系白血病(AML)细胞中的表达及其临床意义.方法 应用半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR),并以β-肌动蛋白(β-actin)作为内对照,检测54例AML患者和10名健康对照者FasL及FAP-1基因的表达,并观察16例患者治疗前后FasL的变化.采用直接免疫荧光法检测54例AML患者Fas抗原的表达情况.结果 54例AML患者FasL基因表达水平及阳性率显著高于健康对照组(P<0.05).FasL阳性患者完全缓解(CR)率为77.78%,而FasL阴性患者CR率仅为16.67%,二者差异有统计学意义(P<0.01),16例患者治疗前后FasL的变化,有效组10例治疗后,FasL水平显著下降(P<0.01),无效组6例仍保持较高水平(P>0.05).FAP-1基因表达水平高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05),54例AML患者中,29例Fas阳性组患者中仅有8例FAP-1表达,25例Fas阴性组患者中19例FAP-1不表达.结论 FasL在AML中高表达,FasL阳性者CR率较高,治疗有效组FasL含量显著降低,FAP-1在AML中仅少部分表达,Fas+者仅部分表达FAP-1.
