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人胶质瘤细胞系CHG-5和SHG-44差异表达基因的鉴定
目的:采用基因芯片技术分析不同恶性程度胶质瘤细胞CHG-5 (WHO分级为Ⅱ级)和SHG-44(WHO分级为Ⅳ级)的差异表达基因.方法:抽提总RNA,进行RT-PCR,并用荧光染料Cy3和 Cy5标记cDNA产物,然后进行芯片杂交,检测CHG-5和SHG-44基因表达的差异,并用Northern blot杂交来验证芯片结果.结果:与CHG-5相比,SHG-44细胞中检测到有103个基因表达明显上调,89个表达明显下调.芯片结果得到Northern blot杂交结果的支持.结论:初步揭示了胶质瘤进展的差异表达基因,为胶质瘤的进一步研究提供了基础资料.
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腺病毒介导PTEN基因抗脑胶质瘤作用的实验研究
目的:探讨10号染色体上缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)对人脑胶质瘤细胞的抗增殖作用,包括细胞周期改变、抗血管生成的作用.方法:用含PTEN基因的重组腺病毒载体,体外转染人脑胶质瘤细胞U87,用RT-PCR、Western blot检测基因及蛋白的表达.通过细胞生长试验、流式细胞仪分析技术检测转染细胞的增殖、细胞周期的改变,用MTT法检测PTEN对人脐静脉内皮细胞生长的影响,体内实验检测其致瘤能力.结果:RT-PCR、Western blot检测转染AdPTEN病毒后的U87细胞PTEN表达由阴性转阳性,转染后对U87细胞的体外生长有明显抑制作用,使细胞出现G0～G1期阻滞,并抑制其体内肿瘤生长.含PTEN的上清对内皮细胞生长有明显抑制作用.体内实验表明,AdPTEN治疗组可明显抑制肿瘤的生长.结论:重组腺病毒载体介导的PTEN基因在体内外对人脑胶质瘤细胞U87 的生长有抑制作用,并抑制肿瘤血管生成,具有显著的抗胶质瘤作用.
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尼莫地平增强HyTK/ACV自杀基因对脑胶质瘤细胞的杀伤作用
目的:探讨尼莫地平增强阿昔洛韦(ACV)介导的转HyTK基因治疗诱导脑胶质瘤细胞的死亡方式及旁观者效应机制.方法:构建含HyTK基因的逆转录病毒载体LNSHyTK,并转染人脑胶质瘤BT325和SCW细胞.单用ACV和联合尼莫地平应用体外试验观察对BT325/tk和SCW/tk的杀伤效果.同时应用转基因前和转基因后瘤细胞共培养观察其旁观者效应.结果:低浓度尼莫地平联合ACV作用下转tk基因细胞的凋亡率明显高于单独使用ACV,并明显提高旁观者效应.结论:尼莫地平能增强HyTK/ACV自杀基因对脑胶质瘤细胞的杀伤作用,为钙拮抗剂应用于转tk基因治疗提供了实验依据.
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人脑胶质瘤组织P16INK4蛋白的表达及其基因突变SSCP分析
目的:探讨人脑胶质瘤组织P16INK4蛋白低表达水平与胶质瘤恶性程度的关系及其基因突变的情况.方法:采用免疫组化方法测定人脑胶质瘤标本41例,同时采用新鲜胶质瘤组织标本15例进行p16mRNA表达逆转录PCR检测,并进行基因突变单链构象多态性分析(SSCP).结果:P16蛋白阳性表达30例,阴性表达11例,胶质瘤组织p16 mRNA表达水平相对低于对照组,p16基因外显子2未发生基因突变,也未发生外显子2的纯合缺失.结论:胶质瘤组织p16 mRNA和蛋白表达水平降低,并与其分级相关,提示P16蛋白及其mRNA异常是影响胶质瘤发生发展的重要因素,胶质瘤组织p16基因突变率较低.
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起源细胞分化障碍与胶质瘤发生的分子关系
根据Beiley推测及继后的研究,数十年来一直认为胶质瘤起源于分化成熟的胶质细胞.近年来,在成人脑内分离神经干细胞获得成功,认为胶质瘤有可能起源于胶质前体细胞(神经祖细胞或干细胞).然而,在体内直接证明何类细胞产生何种胶质瘤尚不可能.在体外,将调控神经胶质细胞分化的基因转染分化成熟的胶质细胞和胶质祖细胞制作的转基因鼠模型,均发生了胶质瘤.虽然其类型不同,但细胞分化障碍是其共同特征,目前对其发生的分子原因仍不清楚.本文对经典的神经上皮细胞、神经干细胞分化障碍时发生的分子变化进行讨论,旨在寻求其肿瘤发生的分子原因.
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一氧化氮抑制洛莫司汀对BT-325胶质瘤细胞的细胞毒作用
目的:研究一氧化氮(nitric oxide,NO)在体外实验中对洛莫司汀(Lomustine,CCNU)细胞毒作用的影响.方法:使用不同浓度的细胞因子或NO供体分别与CCNU作用于BT-325细胞,用Griess法测定NO浓度,MTT法测定实验处理后肿瘤细胞的生存率,以此观察NO对CCNU细胞毒作用的影响.结果:①IL-1β和LPS能刺激BT-325细胞生成NO增加,并使BT-325细胞对CCNU耐受性增强(P<0.05),这个作用能被L-NAME所抑制.②DETA NONOate能抑制CCNU对BT-325细胞的细胞毒作用(P<0.05),在一定程度内呈剂量效应关系.③CCNU与SNAP共培养24 h后,其对BT-325细胞的细胞毒作用比单用CCNU组明显增强(P<0.05).结论:NO使BT-325细胞对CCNU的耐受性增强,从而部分抑制CCNU的细胞毒作用,这可能是CCNU耐药的一个新机制;同时NO能够缓解CCNU在水溶液里的降解.
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突变型Axin基因在神经胶质瘤细胞系C6中的功能研究
目的 研究突变型Axin基因对C6细胞增殖及细胞周期的影响,以期揭示突变型Axin基因是否影响胶质瘤的发生.方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法绘制细胞生长曲线,应用流式细胞仪(FCM)测定细胞周期的变化,并用平板克隆形成实验对细胞克隆形成能力进行了检测.采用SP法免疫细胞化学染色法检测Ki-67、cyclin D1表达.结果 转染突变型Axin基因与转染野生型Axin基因的C6细胞在生长速度,克隆形成能力方面均显著降低,且组间无差别;C6、C6-Vector 、C6-Vector-Axin 、和C6-Vector-Axin806各组细胞经流式细胞仪检测S期的细胞比例分别为:27.2%、24.8%、18.9%和18.5%;Ki-67及cyclin D1在转染突变型Axin基因与转染野生型Axin基因的C6细胞中表达均降低,且组间无差别.结论 突变型Axin基因明显抑制C6细胞的增殖能力,该位点突变可能并不是胶质瘤发生的关键因素.
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Cofilin-1基因在人胶质瘤细胞侵袭、迁移、粘附中的分子机制
[目的]探讨Cofilin-1基因在人胶质瘤细胞侵袭、迁移及细胞粘附中的分子机制.[方法]采用 RNAi技术干扰人胶质瘤细胞系 SHG-44细胞中 Cofilin-1基因的表达.Real-time PCR及 Western blot检测验证 Cofi-lin-1干扰效果;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;粘附作用实验检测细胞粘附能力;Western blot检测细胞中 ICAM-1及胞质和胞核中 NF-κB p65蛋白水平的表达.[结果]RNAi干扰可降低SHG-44细胞中 Cofilin-1的表达水平;Cofilin-1表达干扰抑制 SHG-44细胞迁移、侵袭及粘附能力,降低细胞中ICAM-1的表达,下调胞核中 NF-κB p65的表达水平.[结论]干扰Cofilin-1表达能够抑制胶质瘤细胞的迁移、侵袭及粘附,可能通过调节 NF-κB通路活化发挥作用,Cofilin-1可能成为胶质瘤的潜在治疗靶点.
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miR-200c靶向DNMT1基因对人胶质瘤细胞增殖的影响
【目的】探讨miR‐200c靶向调控DNA甲基转移酶1（DNMT1）对人胶质瘤 U251细胞增殖的影响。【方法】采用实时荧光定量PCR（quantitative real‐time PCR ，qRT‐PCR）检测24例胶质瘤组织和大脑正常组织中miR‐200c与DNM T1的表达改变；将miR‐200c mimics转染于胶质瘤U251细胞，以DNM T1 siRNA为阳性对照，采用qRT‐PCR检测外源过表达miR‐200c对DNMT1 mRNA表达水平的影响；采用MTT和法检测外源高表达miR‐200c对胶质瘤U251细胞增殖能力的影响。【结果】qRT‐PCR检测结果显示，miR‐200c在24例胶质瘤组织中的表达水平较大脑正常组织明显下调，DNM T1在胶质瘤组织中的表达水平较大脑正常组织明显上调；外源过表达miR‐200c下调胶质瘤U251细胞DNM T1 mRNA的表达水平（ P＜0．05），抑制胶质瘤U251细胞的生长（ P＜0．05）。【结论】miR‐200c通过靶向调控DNM T1抑制人胶质瘤细胞的增殖。
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人端粒酶启动子联合 miR-34a 整合靶向系统在胶质瘤细胞中的表达及对增殖的影响
【目的】探讨人端粒酶启动子（hT ERT ）联合正常组织特异性miR‐34a （M IR）的整合靶向系统（hT ERT‐M IR）对胶质瘤细胞靶向性的影响。【方法】首先检测hT ERT、miR‐34a在人胶质瘤细胞株 U87、H4和人胶质细胞株HEB（正常细胞株）中的表达；通过质粒构建分别获得 hTERT‐Luc、hTERT‐MIR‐Luc、hTERT‐Bax 以及hTERT‐MIR‐Bax表达质粒，将hTERT‐Luc、hTERT‐MIR‐Luc质粒分别转染U87、H4和 HEB细胞中，检测三组细胞中hT ERT 与hT ERT‐M IR载体的表达活性；将hT ERT‐Bax以及hT ERT‐M IR‐Bax质粒分别转染U87、H4和HEB细胞中，比较三组细胞中hTERT‐Bax和hTERT‐MIR‐Bax对胶质瘤细胞增殖抑制能力的影响。【结果】hTERT在人胶质瘤细胞株U87和H4中特异性高表达，miR‐34a在人胶质细胞株HEB中特异性高表达；在正常胶质细胞株 HEB中，hTERT‐MIR的活性较 hTERT 明显减低（ P ＜0．01）；在胶质瘤细胞株 U87和 H4h中TERT‐Bax和hTERT‐MIR‐Bax 对细胞增殖抑制比较差异无显著性，但在正常胶质细胞株 HEB中，hTERT‐M IR‐Bax对细胞的增殖抑制明显小于hT ERT‐Bax。【结论】hT ERT‐M IR是胶质瘤基因靶向治疗的有效载体系统。
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MGMT、XRCC1基因表达情况与脑胶质瘤发病的相关性分析
目的 探讨06-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(MGMT)、X线修复交叉互补基因1(XRCC1)表达与脑胶质瘤发病的关系.方法 选取2015年2月至2017年9月在本院治疗的脑胶质瘤患者53例(脑胶质瘤组),同时选取50例因高血压脑出血患者作为对照A组,106例健康志愿者作为对照B组,采用免疫组化染色检测脑胶质瘤组和对照A组脑组织MGMT和XRCC1表达,采用限制性片段长度多态性聚合酶链式反应(PCR-RFLP)方法检测脑胶质瘤组和对照B组MGMT和XRCC1基因多态性.结果 脑胶质瘤组脑组织中MGMT和XRCC1阳性表达率分别为47.17％和39.62％,明显高于对照A组(P＜0.05);肿瘤分级Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ级患者MGMT和XRCC1阳性表达率差异比较无统计学意义(P＞0.05);脑胶质瘤组织MGMT和XRCC1表达无相关性(rs=0.162,P＞0.05);脑胶质瘤组XRCC1基因型AG+ GG比例为58.49％,明显高于对照B组(P＜0.05);脑胶质瘤组MGMT基因型LP+ PP比例为28.30％,明显高于对照B组(P＜0.05).结论 MGMT、XRCC1表达在脑胶质瘤脑组织中明显升高,但与病理分级无明显关系;MGMT和XRCC1基因多态性可能与脑胶质瘤易感性有关.
