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KLF8基因对胃癌细胞增殖凋亡的影响及机制研究
目的 探讨Krüppel样转录因子8(KLF8)基因对胃癌细胞增殖凋亡的影响及机制.方法 Western blot检测胃癌组织及相应的癌旁组织中KLF8基因的蛋白表达;将NC-siRNA(阴性对照组)和KLF8-siRNA(RNA干扰组)转染至人胃癌SGC-7901细胞,未经任何处理的细胞作为空白对照组,转染48 h后,Western blot检测KLF8的蛋白表达;CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测Ki67、PCNA、Cleaved caspase3、Notch1、Hes1蛋白表达.结果 与癌旁组织比较,胃癌组织中KLF8的蛋白表达显著升高(P<0.01);与对照组比较,NC-siRNA组KLF8的蛋白表达无明显变化(P>0.05),KLF8-siRNA组KLF8蛋白表达显著降低(P<0.01);与对照组及NC-siRNA组比较,KLF8-siRNA组细胞存活率及Ki67、PCNA、Notch1、Hes1蛋白表达显著降低,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著升高(P<0.01).结论 RNA干扰抑制KLF8的表达可显著降低SGC-7901细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制与Notch1信号通路的调控有关.
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抑制KLF8基因对CD133+肝癌干细胞亚群比例、裸鼠体内成瘤和肺转移能力的影响
目的 观察抑制KLF8基因对肝癌干细胞CD133+表型细胞亚群比例、裸鼠体内成瘤和肺转移能力的影响.方法 收集肝癌患者的肺转移灶,分离培养原代肝癌细胞,无血清悬浮培养形成肝癌细胞球,经流式分选筛选出CD133+表型的肝癌干细胞细胞亚群(LCSCs).将KLF8基因的RNA干扰重组慢病毒质粒(sh-KLF8)及其阴性对照空载体质粒(sh-control)分别感染LCSCs,经2.0 μg/mL嘌呤霉素筛选,成功构建稳定敲除KLF8基因的CD133+表型肝癌干细胞株LCSCssh-KLF8及对照细胞株LCSCsh-control,qRT-PCR法检测KLF8 mRNA,流式细胞术检测CD133+表型细胞亚群比例.分别注射LCSCssh-KLF8和LCSCssh-control构建肝癌干细胞裸鼠移植瘤模型,观察敲除KLF8基因对肝癌干细胞裸鼠体内成瘤能力的影响(成瘤重量).另将LCSCssh-κLSFS和LCSCssh-control分别经尾静脉注射到裸鼠体内,构建肝癌干细胞的裸鼠肺转移模型,观察敲除KLF8基因对肝癌干细胞裸鼠体内肺转移能力的影响(肺转移灶个数、KLF8蛋白).结果 与LCSCssh-control比较,LCSCssh-KLF8中KLF8 mRNA相对表达水平降低,分选时CD133+表型干细胞亚群的比例显著降低,裸鼠体内的成瘤重量和肺转移的数量降低,KLF8蛋白阳性着色较少(P均＜0.05).结论 抑制KLF8基因可降低肝癌干细胞CD133+表型细胞亚群比例及体内成瘤、肺转移能力,KLF8基因可能是抑制肝癌发生和进展的关键分子.
关键词： KLF8基因 肝癌干细胞 CD133+表型细胞亚群 体内成瘤能力 肺转移能力
