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O1群E1Tor型霍乱弧菌溶原性测定的机理研究
目的 确定我国O1群El Tor生物型霍乱弧菌“噬菌体-生物分型”方案中“溶原性测定”中检测噬菌体的种类,研究溶原性测定的原理.方法 选择O1群El Tor型霍乱弧菌76株、O1群古典株8株、O139群菌株34株,利用溶原性测定方法检测菌株溶原性,检测菌株自发产生的溶原性噬菌体种类,检测阳性和阴性菌株染色体中该前噬菌体基因组,并检测这些菌株对溶原性噬菌体919TP(弧菌噬菌体K139家族)的敏感性.结果 O1群El Tor型菌株溶原性测定为阳性的19株菌,其释放的噬菌体主要为K139家族,具有溶原化的K139噬菌体,并对溶原性噬菌体919TP的敏感性为阴性;O1群El Tor型菌株22株对溶原性噬菌体919TP的敏感性为阳性,溶原性测定全部为阴性,基因组中不含有K139噬菌体;6株O1群古典型菌株溶原性检测为阳性株,但产生的噬菌体不是K139类;0139群菌株中5株溶原性测定为阳性,能检测到溶原性K139噬菌体基因组,并且34株菌全部不能被919TP感染.结论 O1群El Tor型霍乱弧菌“噬菌体-生物分型”方案中溶原性测定指标主要检测的是菌株释放K139类噬菌体的能力,即是否有K139噬菌体的溶原化并释放子代,“对溶原性噬菌体的敏感性”检测的是菌株能否被K139家族噬菌体(919TP)感染,因此生物分型中“溶原性测定”与“对溶原性噬菌体的敏感性”两个指标是相关联的.
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噬菌体Φ297切除酶(xis)基因的克隆和序列分析
肠道出血性埃希大肠杆菌可产生一种或多种志贺样毒素.这些毒素是由λ家族的溶原性噬菌体编码的,这些噬菌体DNA可重组整合到埃希菌大肠杆菌染色体DNA上,又可以通过切除酶从大肠杆菌染色体DNA上切离,而形成完整的噬菌体.λ家族噬菌体含有相同的基因图谱,功能相同的基因位于噬菌体染色体的相似位置.我们假设噬菌体Φ297也是一种λ噬菌体,并与其它的λ噬菌体含有相似的基因结构.
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霍乱弧菌不携带毒素基因的溶原性噬菌体nct-CTXΦ基因组RS区具有复制与整合功能
目的研究霍乱弧菌中不携带霍乱毒素基因的溶原性噬菌CTXΦ基因组(nct-CTXclassΦ)的RS区的复制与整合功能. 方法将这种噬菌体基因组的RS区克隆到不能在霍乱弧菌中复制的自杀质粒载体中,经接合转入含CTXΦ的整合位点attRS、但不含CTXΦ基因组的O1群El Tor型和O139群菌株中,分析含RS的重组自杀质粒在这些被接合菌株中的存在形式. 结果克隆了RS区的重组自杀质粒高频接合入受体菌中,在这些被接合菌株中既发生了染色体整合,同时又以质粒的形式存在于菌细胞内. 结论霍乱弧菌不携带霍乱毒素基因的CTXΦ基因组的RS区仍具有整合与质粒复制功能,可介导该基因组的复制与染色体整合.
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编码霍乱毒素的霍乱弧菌溶原性噬菌体CTXΦ研究概况
人类历史上已有七次世界性的霍乱大流行,均由O1群霍乱弧菌的两个生物型(古典型和El Tor型)所引起.1992年10月在印度和孟加拉国首次发生了由非O1群霍乱弧菌--O139群霍乱弧菌引起的霍乱暴发和流行.在南亚、非洲和拉丁美洲的部分地区,霍乱已呈现地方性流行,季节性暴发很普遍,与贫困和较差的卫生状况密切相关[1].
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肺炎克雷伯杆菌噬菌体的分离鉴定和生物学特性的研究
肺炎克雷伯杆菌(Klebsiella pneumoniae)为革兰氏阴性杆菌,属于肠杆菌科(Enterobacteriaceae)克雷伯菌属(klebsiella),为兼性厌氧菌,广泛分布于自然界,近年来成为仅次于大肠杆菌的重要的条件致病菌.噬菌体(Bacteriophage)是杀细菌的病毒,依其裂菌特性分为裂解性噬菌体(lytic bacteriophage)和溶原性噬菌体(lysogenic bacteriophage).裂解性噬菌体又叫毒性噬菌体,感染细菌后即可在菌体内快速增殖终导致细菌的裂解.本研究从居民区污水中提取肺炎克雷伯杆菌噬菌体并对其生物学特性进行了初步的研究,为进一步研制和开发抗肺炎克雷伯杆菌感染的噬菌体生物制剂提供了一定的依据.
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溶原性噬菌体对铜绿假单胞茵生物被膜形成的影响
目的 研究铜绿假单胞菌(PA3094)溶原性噬菌体Ppa3094对该菌生物被膜形成的影响.方法 采用平板培养法建立PA3094及PA3094-L(带前噬菌体Ppa3094的溶原性菌株)两株菌的体外生物被膜模型;MTT法测定生物被膜形成过程中两株菌的生物被膜活菌量;实时荧光定量PCR测定两株菌在培养不同时间点藻酸盐合成基因algC、algD的表达量.结果 两株菌均在培养5~7 d时形成成熟的生物被膜,呈薄膜状.在生物被膜形成过程中,两株菌的生物被膜菌量存在明显差异,在整个生物被膜形成过程中,PA3094生物被膜菌量均比PA3094-L高,PA3094-L在培养第5 d时生物被膜菌量达高,第7 d有所下降.随着培养时间的延长,藻酸盐合成基因algD、algC表达量均上调,但PA3094-L表达量均比PA3094低,且algC表达量差异更大.结论 铜绿假单胞菌溶原性噬菌体Ppa3094可降低藻酸盐合成基因algD、algC的表达,从而影响生物被膜的形成.