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miR-200c启动子区甲基化与肺癌细胞对EGFR-TKI耐药相关
目的:初步探讨miR-200c启动子区甲基化与非小细胞肺癌细胞株对表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitor,EGFR-TKI)敏感性变化的关系.方法:选用表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR) 19外显子区缺失突变(E746-A750)的细胞株(H1650、HCC827)及EGFR野生型细胞株(H358、H1299),应用MSP法检测各细胞株miR-200c启动子区的甲基化状态,CCK-8法检测各细胞株对EGFR-TKI吉非替尼的药物敏感性,荧光定量PCR法检测各细胞株miR-200c的相对表达量；去甲基化药物5-aza-CdR处理各细胞株后,观察其对吉非替尼敏感性及miR-200c表达量的变化.结果:吉非替尼敏感细胞株HCC827及H358高表达miR-200c,其启动子区为非甲基化状态;吉非替尼耐药细胞株H1650及H1299的miR-200c表达较低,其启动子区为甲基化状态；经5-aza-CdR处理后,吉非替尼耐药细胞株H1650及H1299的miR-200c及对吉非替尼的敏感性较前显著升高,差异具有统计学意义(P＜0.05)；而吉非替尼敏感株HCC827及H358的miR-200c及对吉非替尼的敏感性未见有明显改变(P＞0.05).结论:miR-200c启动子区的甲基化抑制了miR-200c的表达,从而使H1650及H1299细胞对吉非替尼耐药.
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miR-200c通过wnt/β-catenin信号途径抑制SW480结肠癌细胞的侵袭和转移
目的 研究miR-200c通过wnt/B-catenin信号通路对结肠癌SW480细胞侵袭、迁移的影响.方法 将SW480细胞分为类似物转染(A)组、抑制物转染(B)组、类似物阴性对照(C)组、抑制物阴性对照组(D)和空白(E)组.荧光定量PCR检测12h和24h转染效率,划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭,Western blot检测转染后β-catenin和E-cadherin的表达.结果 细胞划痕实验显示,A组12 h和24h后伤痕宽度分别为(589.61±17.28) μm和(523.83±57.13) μm,C组分别为(465.33±16.60) μm和(393.99±7.53)μm,A组高于C组(P＜0.05).B组12h和24h后分别为(430.93±20.76) μm和(221.38±44.37) μm,D组分别为(485.64±16.65) μm和(441.22±22.40) μm,B组低于D组(P＜0.05).Transwe11实验显示,与C组和D组相比,A组24h和48 h通过8μm孔径的细胞数明显减少,B组明显增多(P＜0.05).A组β-catenin和E-cadherin的表达均升高,B组各蛋白表达下降(P＜0.05).结论 miR-200c可能通过wnt/β-catenin信号通路抑制SW480结肠癌细胞的侵袭和迁移.
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miR-200c通过激活Wnt/β-连环蛋白信号通路诱导膀胱癌细胞阿霉素耐药
目的:探讨miR-200c表达与膀胱癌细胞阿霉素(DOX)耐药的关系.方法:过表达或抑制miR-200c表达后,检测DOX对膀胱癌细胞(RT4、RT112、T24和TCCSUP)生长抑制作用的变化.Western blot检测miR-200c对Wnt/β-连环蛋白信号通路的影响,检测Wnt/β-连环蛋白信号激活剂Wnt3a干预对miR-200c诱导膀胱癌DOX耐药作用的影响.结果:抗miR-200c转染后,T24和RT4细胞DOX的耐药性显著下降.DOX干预后,与对照组细胞相比,抗miR-200c转染组膀胱癌细胞凋亡和S期积累明显增加.此外,抗miR-200c转染组膀胱癌细胞中Dkk1,Kremen2和sFRP2等Wnt/β-连环蛋白信号的负调控蛋白表达明显升高,Wnt/β-连环蛋白信号通路活性明显下降.Wnt3a干预能够拮抗抗miR-200c转染的膀胱癌细胞生长抑制作用.结论:miR-200c表达与膀胱癌细胞DOX耐药密切相关,且Wnt/β-连环蛋白信号通路激活介导了miR-200c诱导的膀胱癌细胞DOX耐药性.
关键词： 膀胱癌 阿霉素 微小核糖核酸 miR-200c Wnt/β-连环蛋白信号通路 -
miR-200c通过AKT2对骨肉瘤细胞增殖的影响
[目的]探讨过表达miR-200c通过对AKT2的相关调控对骨肉瘤细胞增殖能力的影响,为骨肉瘤的靶向治疗提供新的依据.[方法](1)检测miR-200c在正常成骨细胞和4种骨肉瘤细胞株中的表达差异;(2)将miR-200c转染至骨肉瘤细胞株MG-63中,构建稳定过表达miR-200c骨肉瘤细胞株;(3)预测miR-200c与AKT2基因的相关结合位点,构建相应的荧光素酶基因表达载体,连同过表达miR-200c质粒共转染至骨肉瘤细胞株MG-63中;(4)检测两组骨肉瘤细胞株MG-63荧光素酶活性;(5)检测两组骨肉瘤细胞株MG-63中AKT2表达水平;(6)观察两组骨肉瘤细胞株MG-63的增殖能力.[结果](1)与正常成骨细胞(NHOst)相比,miR-200c在4种骨肉瘤细胞株(HOS、U2OS、Saos-2、MG-63)中表达量明显降低(P＜0.05);(2)与miR-NC组相比,过表达miR-200c组骨肉瘤细胞株MG-63中AKT2 3'-UTR序列结构野生型(WT)的荧光素酶活性明显降低(P＜0.05),而突变型(MUT)的荧光素酶活性无明显差异(P＞0.05);(3)与miR-NC组相比,过表达miR-200c的骨肉瘤细胞株MG-63中AKT2表达明显降低(P＜0.05);(4)与miR-NC组相比,过表达miR-200c骨肉瘤细胞株MG-63增殖能力明显下降(P＜0.05).[结论] miR-200c在骨肉瘤细胞中低表达,而过表达miR-200c通过靶向调控AKT2表达抑制骨肉瘤细胞的增殖.因此miR-200c可能对未来骨肉瘤的预防及治疗提供新的策略.
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miR-200c对人胃癌细胞增殖能力的影响及其机制探讨
目的 观察miR-200c对人胃癌细胞增殖能力的影响,并探讨其是否通过靶向调控DNA甲基化转移酶(DNMT3B)表达发挥作用.方法 采用MTT法检测miR-200c对人胃癌MGC-803细胞生长增殖能力的影响;构建DNMT3B 3'UTR-荧光素酶报告载体,通过荧光素酶报告载体系统观察miR-200c对DNMT3B 3'UTR-荧光素酶活性的影响;将miR-200cmimics转染胃癌细胞MGC-803,采用Western blot检测DNMT3B表达水平.结果 MTT结果显示,在转染miR-200c mimics 24、48、72 h后,细胞增殖活性OD值分别为0.31±0.01、0.47±0.01、0.53 ±0.02,与对照组的0.44±0.03、0.62±0.01、0.87 ±0.01比较,P均＜0.05;荧光素报告载体系统证实,DNMT3B是miR-200c直接调控的靶基因.Western blot结果显示,miR-200c可抑制DNMT3B蛋白的表达.结论 miR-200c通过靶向调控DNMT3B的表达而抑制胃癌细胞生长增殖能力.
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miR-200c对三阴性乳腺癌细胞系上皮间质转化的影响
目的:探讨miR-200c对三阴性乳腺癌细胞系上皮间质转化的影响.方法:选取三阴性人乳腺癌细胞系BT549、MDA-MB-231和非三阴性人乳腺癌细胞系MCF-7、SK-BR-3为研究对象,各细胞系按转染情况分为A组(miR-200c模拟物/Lipo2000组)、B组(miR-200c阴性对照物/Lipo2000组)、C组(miR阴性对照物/Lipo2000组)、D组(Lipo2000组)、E组(空白对照组).分别提取各组细胞的总RNA和蛋白,通过RT-PCR检测Slug和E-cadherinmRNA表达水平,通过Western blot检测Slug和E-cadherin蛋白表达水平.采用划痕实验检测BT549和MDA-MB-231的迁移能力.结果:三阴性细胞系与非三阴性细胞系相比,E组Slug、E-cadherin在mRNA与蛋白水平的表达量,差异有统计学意义(P＜0.05).转染miR-200c后,三阴性细胞系BT549、MDA-MB-231 Slug在mRNA和蛋白水平表达量均降低(P＜0.05),E-cadherin在mRNA和蛋白水平表达量均增高(P＜0.05),细胞迁移能力下降(P＜0.05).结论:miR-200c可通过下调三阴性乳腺癌细胞系Slug的表达,进而抑制上皮间质转化,降低细胞迁移能力.
关键词： 三阴性乳腺癌 miR-200c Slug E-cadherin 上皮间质转化 -
miR-200c在复发性流产患者绒毛组织中的表达及其对滋养细胞的影响
目的 探讨miR-200c在复发性流产(recurrent miscarriage,RM)患者绒毛组织中表达以及其对滋养细胞凋亡、 侵袭及迁移能力的影响.方法 使用qRT-PCR法检测RM患者及对照组(人工流产患者)的绒毛组织中miR-200c的表达情况;并以miR-200c模拟物和抑制物转染滋养细胞系HTR-8和JAR,观察其对滋养细胞凋亡、 迁移及侵袭能力的影响.结果 RM患者绒毛组织中miR-200c的表达水平显著高于对照组.体外予以miR-200c模拟物转染HTR-8/SVneo后,凋亡细胞比例增加,且细胞的侵袭、 迁移能力显著降低;予以miRNA-200c抑制物转染后,凋亡细胞显著降低,且细胞的侵袭及迁移能力显著增加.结论 miR-200c在RM患者绒毛组织中表达显著增加,其可能通过影响滋养细胞的凋亡、 迁移及侵袭,从而影响胎盘发育,参与RM的发病过程.
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miR-200c在腹膜透析流出液细胞中的表达变化及意义
目的 检测腹膜透析(PD)患者PD流出液细胞发生上皮-间充质细胞转换(EMT)的分子标志物蛋白及miR-200c的表达,初步探讨miR-200c与人腹膜间皮细胞(HPMCs) EMT的关系.方法 随机选取PD患者28例,将其分为新开管组(12例)和PD≥6个月组(16例),分离培养并鉴定2组患者PD流出液细胞;通过实时定量荧光(Real-time)PCR检测流出液细胞中miR-200c的表达;利用Realtime PCR及蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测流出液细胞中E-钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、纤维连接蛋白(FN)、胶原蛋白(Collagen)的mRNA及蛋白表达.结果 PD流出液细胞经鉴定为HPMCs,不同透析龄患者流出液细胞存在形态学改变.新开管组流出液HPMCs中miR-200c相对表达量为(7.55±0.34),PD≥6个月组流出液HPMCs中miR-200c的相对表达量为(1.7±1.1),较新开管组明显下降(P＜0.01);PD≥6个月组患者流出液HPMCs中E-cadherin mRNA及蛋白表达均显著低于新开管组(P＜0.05),而在PD≥6个月组流出液HPMCs中Vimentin、Col-1及FN mRNA及蛋白表达明显高于新开管组(P＜0.05).结论 PD患者腹透流出液细胞经证实为HPMCs,并表达miR-200c;随PD时间延长,miR-200c表达显著降低并同时伴有EMT发生,提示miR-200c与HPMCs的EMT相关,并可能参与了HPMCs的EMT的调控.
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miRNA-200c对非小细胞肺癌A549细胞甲氨蝶呤耐药性的影响
目的 探讨miRNA-200c(miR-200c)在非小细胞肺癌A549细胞耐甲氨蝶呤(MTX)(A549/MTX)中的影响及可能的作用机制.方法 通过实时荧光定量(qRT-PCR)法检测人肺癌亲本细胞NA549细胞、转染miR-200c模拟物(mimic)的A549/MTX细胞(A549/MTX-M)及转染miR-阴性对照(NC) A549/MTX细胞(A549/MTX-N)中miR-200c的表达水平.分别采用MTT法、锥虫兰染色及流式细胞术检测三组细胞对MTX的药物敏感度、细胞增殖能力及细胞凋亡变化,并采用qRT-PCR检测其P53和P21基因表达的变化.结果 miR-200c在A549细胞中的表达水平显著高于A549/MTX-N细胞;A549/MTX-M细胞miR-200c水平高于A549/MTX-N细胞;用不同浓度MTX刺激细胞,与A549/MTX-N细胞比较,A549/MTX-M细胞的增殖能力减弱、凋亡细胞增多,并呈剂量依赖性,差异均有统计学意义.转染miR-200c mimic后,P53和P21基因表达水平上升,与转染miR-NC细胞比较,差异有统计学意义.结论 miR-200c能够逆转A549/MTX细胞对MTX的耐药性,其作用机制可能是通过P53/P21信号转导通路诱导细胞凋亡来实现的.
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miR-200c增强肺癌A549细胞对紫杉醇及吉非替尼的敏感度及相关机制
目的 观察上调肺癌A549细胞中miR-200c的表达对紫杉醇、吉非替尼敏感度及两药联合作用的影响及其作用机制.方法 用miR-200c转染肺癌A549细胞,Real-time PCR检测miR-200c表达,MTT法和流式细胞仪检测转染miR-200c后A549细胞对紫杉醇、吉非替尼单药及两药联合的敏感度和细胞凋亡的影响,Western blot检测TUBB3蛋白、EGFR、Akt、MAPK磷酸化蛋白及总蛋白的表达.结果 上调miR-200c表达可增强A549细胞对紫杉醇及吉非替尼敏感度并促进细胞凋亡,对两药联合无明显作用.Western blot显示转染miR-200c联合紫杉醇可下调A549细胞中TUBB3蛋白表达,联合吉非替尼下调EGFR和Akt磷酸化蛋白表达,与两药联合对EGFR和Akt磷酸化蛋白表达无明显影响.结论 miR-200c可增强肺癌A549细胞对紫杉醇、吉非替尼的敏感度,可能分别与抑制TUBB3表达、抑制EGFR和Akt磷酸化蛋白表达有关,而对两药联合无协同抗肿瘤作用.
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MiR-200c调控ZEB1抑制子宫内膜癌细胞增殖和侵袭
目的:探讨miR-200c调控子宫内膜癌(EC)细胞增殖和侵袭的机制.方法:蛋白印迹和RT-PCR法检测miR-200c、ZEB1和E-cadherin在EC细胞株中的表达.CCK-8检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞侵袭力.结果:miR-200c在Ⅱ型EC细胞(HEC 1A和AN3CA)中显著低表达(2.63±0.41和2.83±0.47).ZEB1在Ⅰ型EC细胞中不表达,而在Ⅱ型EC细胞中高度表达(0.52±0.34和0.81±0.45).E-cadherin在Ⅰ型EC细胞中高度表达(1.58±0.44和1.01±0.36),而在Ⅱ型EC细胞中极低表达.转染pr-miR-200c后抑制Ⅱ型EC细胞增殖和侵袭能力,A450值分别为1.38±0.27和1.91±0.31,增加AN3CA细胞中E-cadherin的表达.结论:在Ⅱ型EC细胞中miR-200c表达与ZEB1表达呈显著负相关,与E-cadherin表达呈正相关.miR-200c过表达明显抑制Ⅱ型EC细胞增殖和侵袭,miR-200c负性调控ZEB1,参与E-cadherin介导的肿瘤上皮-间质转化.
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miR-200c在胃癌组织中的表达及其临床意义
目的:探讨miR-200c(Homo sapiens miR-200c)在人胃癌组织的表达改变情况及其临床意义.方法:采用原位杂交检测40例正常人群胃黏膜组织以及121例胃癌患者组织中miR-200c的表达情况.结果:原位杂交实验证实miR-200c在胃癌组织中表达显著下调.在121例胃癌组织中,miR-200c的表达水平与胃癌临床分期(P＜0.05)以及淋巴结转移(P＜0.01)情况显著相关.结论:miR-200c在胃癌组织中表达下调,其下调程度与胃癌临床分期以及淋巴结转移情况相关.
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MiR-200c与脏器纤维化的研究进展
MiR-200c在肺、肝、肾、腹膜、皮肤纤维化及翼状胬肉中异常表达.多项研究表明miR-200c与脏器纤维化密切相关,miR-200c主要通过调控TGF-β介导的上皮间质转化参与调控纤维化的发生发展;血清中miR-200c的表达异常可能为肺纤维化的早期诊断提供依据,实验表明miRNA mimics,miRNA agomir,miRN抑制剂是纤维化潜在的靶标治疗工具.作者对miR-200c的表达、调控及其在脏器纤维化的诊断、治疗和预后判断中的作用进行了综述.
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血浆miR-200c作为肺癌早期诊断的临床价值研究
目的 分析血浆miR-200c的表达与肺癌患者临床病理特征的相关性,并探讨miR-200c能否作为肺癌早期诊断的潜在肿瘤标志物的可能性.方法 收集55例肺癌患者和53例健康体检者,采用实时荧光定量PCR检测受检者血浆miR-200c的表达情况,对检测结果进行统计学分析.结果 miR-200c在肺癌患者组血浆中表达水平均高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01).受试者工作特征曲线显示miR-200c能够将肺癌与正常对照组区分出来(AUC=0.676).结论 血浆miR-200c的表达可能与肺癌的发生有关,提示miR-200c可作为特异性生物标志物对肺癌患者进行早期诊断的可能性.
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食管鳞癌中微小RNA miR-200c的表达及其意义
目的 检测食管鳞癌中微小RNA miR-200c的表达,探讨其与肿瘤发展和分期的关系.方法 应用实时荧光定量PCR方法检测76例各类分期分型食管鳞癌和配对癌旁组织中miR-200c的表达,分析其表达与肿瘤临床分期和病理分型的关系.结果 食管鳞癌组织与癌旁组织比较,miR-200c的表达显著减少(P＜0.01);miR-200c的表达在中晚期(Ⅲ、Ⅳ期)食管鳞癌组织较早中期(Ⅰ、Ⅱ)食管鳞癌组织降低更为显著(P＜0.01).结论 miR-200c在食管鳞癌发生发展过程中表达有明显降低,其表达水平可作为潜在的食管鳞癌临床分期分级和预后的指标.
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被转化生长因子β活化的长链非编码RNA对人淋巴瘤Raji细胞增殖、周期及凋亡的影响
目的 研究被转化生长因子β活化的长链非编码RNA(LncRNA-ATB)对人淋巴瘤Raji细胞增殖、凋亡和周期的影响及其潜在机制.方法 通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LncRNA-ATB短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)和miR-200c模拟物(miR-200c mimics)效果,以及LncRNA-ATB、miR-200c和鼠类肉瘤病毒癌基因(KRAS)的表达;噻唑蓝(MTT)法检测沉默LncRNA-ATB对Raji细胞增殖的影响;流式细胞术检测LncRNA-ATB对Raji细胞凋亡和周期的影响;荧光素酶报告基因(Luciferase)实验检测KRAS是否为miR-200c的直接靶基因.结果 LncRNA-ATB-shRNA可有效沉默Raji细胞中LncRNA-ATB的表达,沉默LncRNA-ATB的表达可抑制Raji细胞的增殖能力,促进Raji细胞的凋亡能力,并使Raji细胞的周期阻滞于G1期.进一步研究显示LncRNA-ATB可作为ceRNA与miR-200c竞争性地调控miR-200c直接靶分子KRAS的表达而促进肿瘤细胞增殖.结论 LncRNA-ATB可通过上调KRAS的表达而在淋巴瘤细胞的增殖、凋亡和周期过程中发挥着重要的作用.
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莱菔硫烷对胃癌干细胞的影响及其机制研究
目的 研究莱菔硫烷(SFN)对胃癌干细胞增殖的影响及其机制.方法 MTT实验检测SFN对胃癌细胞株SGC-7901对SFN的敏感性;流式细胞仪技术检测侧群比例、肿瘤球形成实验和蛋白印迹法等检测并比较SFN处理前后SGC-7901和BGC-823细胞侧群比率、肿瘤球形成能力及干性相关基因Oct4和Sox-2表达水平等改变,比较SFN和miR-200c抑制物处理对干性相关基因表达水平的影响.实时荧光定量PCR检测SFN对miRNA-200c转录水平的影响.结果 SFN对胃癌细胞株SG-7901和BGC-823的半数抑制浓度(IC50)分别为14.26和21.17μmol/L.SFN能够降低侧群比率和肿瘤球形成能力并下调Oct4和Sox-2等干性相关基因的表达;同时,SFN还升高miR-200c的表达(均P<0.05).SFN组Oct4和Sox-2等基因表达较空白对照组显著降低(P<0.01),而miR-200c抑制物与SFN联合组上述基因表达水平高于SFN组,而低于空白组(P<0.01).结论 SFN可有效抑制胃癌干细胞表型,其机制可能与miR-200c/Sox-2/Oct4通路有关.
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miR-200c促进肝星状细胞活化诱导肝纤维化的机制
[目的]探讨miR-200c在肝星状细胞(HSC)活化、增殖、迁移及促肝纤维化中的作用.[方法]慢病毒转染的方法构建过表达miR-200c的稳定细胞株(LX2-200c)和空质粒对照组(LX2-nc),RT-PCR检测LX2-200c和LX2-nc细胞上miR-200c和Ⅰ型胶原蛋白的表达,Western Blot检测LX2-200c和LX2-nc细胞的活化标志分子α-SMA和Vimentin的变化,CCK-8实验检测增殖情况,划痕实验检测迁移情况.[结果]野生型LX2细胞中miR-200c呈低表达,miR-200c的过表达促进了HSC上α-SMA和Vimentin表达的增加,并使HSC的增殖和迁移能力增强,另外,ECM重要组成成分Ⅰ型胶原蛋白的表达也显著增加(P=0.0031).[结论]miR-200c可以促进HSC的活化、增殖、迁移以及ECM的分泌,进而参与了肝纤维化的过程.
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miR －200c 对三阴乳腺癌细胞株 MDA －MB －231放疗敏感性的影响
目的：探讨miR－200c对三阴乳腺癌细胞株MDA－MB－231放疗敏感性的影响及潜在的机制。方法将细胞株分成3组，未处理组是指未感染任何慢病毒的原始细胞，miR－NC组是指感染阴性对照慢病毒的细胞，miR－200c组是指利用包装有has－miR－200c的慢病毒感染MDA－MB－231细胞，并建立稳定过表达miR－200c的细胞株模型。 qRT－PCR和Western blot检测间充质－上皮转化（ MET）的标记分子及共济失调毛细血管扩张突变基因蛋白（ ATM）分子的表达；克隆形成实验检测转化后细胞的放射敏感性。结果过表达miR－200c的MDA－MB－231细胞发生间充质样形态向上皮样形态的转变，伴随着MET相关基因的显著改变（ P＜0.05）；转化后细胞的放射敏感性增加；转化后细胞的ATM总蛋白及磷酸化蛋白水平显著减少。结论 miR－200c过表达诱导乳腺癌细胞发生间充质－上皮转化，增加细胞的放疗敏感性，这种作用可能与细胞内ATM表达的下调有关。
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miR-200c在子宫内膜癌组织中的表达及与ZEB2蛋白的相关性
目的：探讨miR-200c在子宫内膜癌组织中的表达及与ZEB2的相关性。方法：选取113例子宫内膜癌组织和癌旁组织标本，40例正常子宫内膜癌组织作为对照组，检测组织中 miR-200c 表达量，以及ZEB2基因和蛋白表达量，利用反义寡核苷酸技术抑制子宫内膜癌RL95-2细胞株中miR-200c表达，检测其对细胞侵袭力的影响，以及细胞中ZEB2基因和蛋白表达。结果：子宫内膜癌组织中miR-200c表达量、ZEB2基因和蛋白表达量均高于癌旁组织和对照组（P＜0．05）；反义miR-200c转染组穿膜细胞数少于阴性对照组和脂质体组（P＜0．05）；反义miR-200c转染组细胞中ZEB2基因和蛋白表达量均低于阴性对照组和脂质体组（P＜0．05）。结论：miR-200c在子宫内膜癌组织中呈高表达，可能是通过调控ZEB2而促进肿瘤细胞的浸润和转移。
