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转基因鼠晶状体特异性表达的制瘤素对眼发育的影响
目的研究晶状体特异性表达的制瘤素(oncostatin M,OSM)对眼发育的影响.方法将去除部分序列的小鼠OSM cDNA[661碱基对(base pair,bp)]连接到αA-晶状体蛋白(αA-crystallin)启动子上,然后用显微注射的方法将其导入单细胞胚胎内,建立转基因鼠.常规组织学及免疫组织化学方法对转基因鼠进行特性鉴定,末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿嘧啶末端标记(terminal deoxynucleotidyltransferase-mediated dUTP nick-end labelling,TUNEL)试验检测细胞凋亡,原位杂交检测caspase-3mRNA的表达,兔抗活化的caspase-3抗体检测活化的caspase-3蛋白质.结果胚胎期14.5、17.5 d,转基因蛋白OSM特异性表达于晶状体纤维细胞内,从胚胎期17.5 d开始,转基因鼠视网膜开始发生变性,出生时,50%以上的视网膜细胞丢失.TUNEL试验显示转基因鼠视网膜细胞凋亡.转基因鼠视网膜细胞中caspase-3被激活.结论晶状体特异性的OSM表达激活caspase-3,导致了眼的异常发育、细胞凋亡及广泛的视网膜变性.
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AG490抑制DOCI-LY8和Raji细胞生长及与STAT3信号的关系
目的:研究AG490对伯基特淋巴瘤(BL) Raji细胞和弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL) OCI-LY8细胞生长的影响及分子机制.方法:用不含AG490(对照组)和不同浓度(25、50、75及100 mg/L) AG490(试验组)分别培养Raji细胞和OCI-LY8细胞24、48及72 h,用MTT法检查2株细胞的代谢生长情况,RT-qPCR检测对照组和各试验组培养48 h时2株细胞STAT3、TIMP-1的mRNA表达;用Western blot检测AG490 50 mg/L培养48 h时Raji细胞的STAT3、p-STAT3及TIMP-1蛋白的表达,流式细胞术检测2株细胞的细胞周期变化.结果:在2株细胞中加入AG490后,细胞生长较对照组明显减弱(P＜0.05);与相应对照组比较,AG490试验组的Raji细胞和OCI-LY8细胞的G1期细胞都明显增多(P＜0.05),处于S期的Raji细胞无明显改变、而OCI-LY8细胞则明显减少(P＜0.05),G2-M期的Raji细胞明显减少(P＜0.05)、G2-M期的OCI-LY8细胞亦有减少的趋势;STAT3和TIMP-1的mRNA表达明显降低,且呈现出药物浓度依赖关系(P＜0.05);2株细胞内TIMP-1与STA T3的mRNA表达呈正相关关系(Raji r=0.744,P=0.034;OCI-LY8 r=0.984,P=0.000);AG490组Raji细胞中p-STAT3、STAT3和TIMP-1蛋白表达较对照组明显降低.结论:AG490对Raji细胞和OCI-ly8细胞生长有明显抑制作用,TIMP-1的表达可能与SATA3的活化有关,STAT3活化及其下游靶基因TIMP-1的上调表达可能是AG490影响2株细胞生长的重要分子机制.
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5-氟尿嘧啶对人绒毛膜癌细胞株JA R作用的观察
目的：观察5‐氟尿嘧啶（5‐Fu）对人绒癌细胞株JAR的体外作用。方法：采用M T T比色分析法，观察20、50、100μg／L 3种剂量的5‐Fu对人绒癌细胞株JA R细胞的生长抑制情况；通过免疫组化法检测3种浓度5‐Fu作用于JA R细胞后增殖细胞核抗原Ki67的表达情况。结果：①5‐Fu能抑制JAR细胞的生长，并在一定时间及浓度范围内，表现出剂量依赖性，72h内5‐Fu浓度在25～100μg／L时抑制作用比较明显；②100μg／L的5‐Fu作用于JA R细胞72h后细胞抑制率达73．19％，作用后增殖细胞核抗原Ki67明显下降。结论：①5‐Fu对人绒癌细胞株JA R细胞的生长具有抑制作用，72h内呈剂量依赖性；②5‐Fu抑制了人绒癌细胞株JAR细胞的增殖，细胞可能被阻滞于G0及G1期。
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三氧化二砷抑制耐药bcr-abl突变细胞株生长的机制
目的 研究三氧化二砷(ATO)在体外对bcr-abl突变细胞株的生长抑制作用,并探讨其作用机制.方法 采用锥虫蓝拒染法观察ATO及ATO与丁硫氨酸亚矾胺(BFO)共同作用对bcr-abl野生型细胞株(K562、KBM5、32Dp210)和伊马替尼(IM)耐药bcr-abl突变细胞株(K562R、KBM5R、32Dp210T315I、32Dp210Q252H、32Dp210Y253H、32Dp210M351T和32Dp210E255K)的生长抑制作用;Annexin V和PI染色检测细胞凋亡,以5,5'-双硫代对硝基苯甲酸直接比色法(DTNB比色法)测定细胞内谷胱甘肽含量(GSH).结果 ATO对bcr-abl野生型和IM耐药细胞株均呈现剂量依赖性的生长抑制作用.且含bcr-abl点突变的耐药细胞株对ATO格外敏感.其ATO的IC50值均比其对应的bcr-abl野生型细胞株低,但无点突变的K562R细胞株的IG50值与野生型K562细胞无差异.对上述细胞株细胞内还原型GSH的含量进行检测,结果显示:含有ber-abl点突变的细胞株内GSH含量显著低于其对应的野生型细胞(均P<0.05).而K562和K562R细胞中GSH含量差异无统计学意义(P=0.315).选用GSH生物合成抑制剂BSO处理各细胞株后.细胞对ATO的敏感性均显著增加.结论 与ber-abi野生型细胞株相比ATO对含有点突变的细胞株生长抑制作用更为显著,这可能与细胞内GSH的含量有关,提示ATO有可能成为治疗包括T315I在内的ber-abl突变慢性粒细胞白血病患者的新选择.
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WT1反义寡核苷酸对K562白血病细胞生长抑制作用研究
目的 探讨WT1反义寡核苷酸(WT1-ASO)对白血病细胞生长抑制作用.方法 合成一段与WT1基因转录本翻译起始序列互补的、含18个碱基的WT1反义寡聚核苷酸序列,以200μg/ml与白血病细胞系K562和U937共培养,同时设立WT1-SO组及单纯培养基对照组,锥虫蓝拒染实验确定活细胞数,测定细胞生长曲线,观察WT1-ASO对白血病细胞生长抑制作用,实时定量RT-PCR技术检测相应细胞系中WT1基因表达水平变化.结果 WT1-ASO能够特异性抑制WT1表达的K562细胞的生长,与WT1-SO组及对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01),而WT1-ASO对WT1低表达的U937细胞生长无明显抑制作用,WT1-ASO能够特异性下调K562细胞中WT1基因表达水平.结论 WT1-ASO能够特异性抑制表达WT1基因的白血病细胞生长,下调其WT1基因表达,可以应用于白血病治疗.
