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p53/Rb细胞转导通路相关基因和蛋白在衰老大鼠睾丸组织的表达
目的 通过检测p53、Rb、p16、p19、p21在衰老大鼠睾丸组织的表达,探讨p53/Rb细胞转导通路相关基因和蛋白在睾丸组织衰老中的意义. 方法 选用8周龄雄性SD大鼠30只,体重180～220g,随机分为正常对照组和模型组,每组15只.模型组大鼠采用D-半乳糖连续腹腔注射建立亚急性衰老大鼠模型.采用RT-PCR方法 检测p53、Rb基因在大鼠睾丸组织的表达;Western blotting法检测大鼠睾丸磷酸化Rb、p16、p19、p21蛋白的表达.结果 模型组睾丸组织p53、Rb基因表达明显高于正常对照组(P<0.01);模型组睾丸组织与正常组比较:p16、p19、p21蛋白的表达明显升高,而磷酸Rb蛋白表达显著下降(P<0.01). 结论 Rb/p53细胞转导通路相关基因及蛋白在衰老大鼠睾丸组织发生明显改变,Rb/p53细胞转导通路阻滞可能在睾丸组织的衰老过程中起着一定作用.
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miRNA -19b 过表达对 P19细胞分化的影响
目的：通过过表达 miRNA -19b，研究 miRNA -19b 对 P19细胞分化的影响。方法脂质体2000转染miRNA -19b 过表达质粒与空载质粒进入 P19细胞，通过杀稻瘟菌素筛选出稳定株；实时定量聚合酶链反应检测 miRNA-19b 表达水平以及分化基因（cTnT、ANP、GATA4）的表达水平。结果 miRNA -19b 过表达载体与细胞系成功建立（ P ﹤0.05）；在 P19细胞分化过程中，miRNA -19b 过表达组心肌标志物均显著高于对照组（ P 均﹤0.05）。miRNA -19b显著促进 P19细胞向心肌细胞分化。结论 miRNA -19b 可以显著促进 P19细胞向心肌细胞的分化，为以后其用于心脏发育的进一步研究奠定基础。
关键词： miRNA - 19b p19 细胞 分化 -
食管上皮癌变过程中CDK4、p18、p19的表达及意义
目的 探讨细胞周期调控蛋白CDK4、p18、p19在食管鳞状细胞癌(SCC)发生、发展中的作用.方法 制作组织芯片,用免疫组织化学EnVision二步法对120例食管癌患者手术标本中CDK4、p18、p19的表达进行检测,并对其结果进行统计分析.结果 CDK4蛋白在正常食管上皮的表达低[28.3%(34/120)],瘤变上皮中有所增高[32.5%(39/120)],食管SCC中表达高[84.2%(101/120)],且随SCC分化程度的降低而逐渐增高,SCC与正常上皮及瘤变上皮中CDK4表达阳性率差异有统计学意义(x2=76.004,P＜0.05;x2=65.897,P＜0.05).淋巴结转移组CDK4表达率[93.88%(46/49)]高于无淋巴结转移组[71.43%(55/71)](x 2=5.860,P＜0.05).p18、p19蛋白在正常食管上皮组织阳性表达率分别为34.2%(41/120)、29.2%(35/120),在食管瘤变上皮中表达率分别为19.2%(23/120)、15.0%(18/120),在SCC中表达率分别为63.3%(76/120)、61.7%(74/120),两指标在正常上皮及瘤变上皮间、瘤变上皮与SCC间、正常上皮与SCC间差异均有统计学意义(p18:x2=6.903、48.296、20.429,均P＜0.05;p19:x2=6.998、55.276、25.565,均P＜0.05);在食管SCC中随分化程度的降低而逐渐增高.p18、p19分别与CDK4基因表达呈正相关(r=0.696、0.630,均P＜0.05).p18与p19二者呈正相关(r=0.833,P＜0.05).结论 细胞周期调控基因CDK4、p18、p19参与食管SCC的发生、发展,其蛋白表达与食管上皮癌变密切相关.
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P19在肾细胞癌中表达及意义
目的：分析肾细胞癌组织中P19的表达，探讨P19与肾细胞癌的发生发展以及临床病理特征之间的关系，综合分析其临床意义。方法：收集肾细胞癌病例30例，应用RT-PCR以及western bolt综合分析P19基因及蛋白肾细胞癌组织中的表达。结果：P19在两种组织中表达有明显差异， P19在肾细胞癌组织中基因及蛋白表达量明显低于其配对的正常非肿瘤肾组织（P＜0.05）。结论：P19表达差异对判断其发生和转移有重要价值，可作为肾细胞癌临床进程潜在的指标，为治疗和预后评价提供依据。
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5-氮胞苷诱导培养P19胚胎癌细胞表达心肌结构蛋白
背景:少数研究者发现5-氮胞苷在结合P19 胚胎癌细胞聚集培养时导致有效的心肌分化,而且在P19 胚胎癌细胞单层融合培养时,5-氮胞苷诱导也可致心肌分化.目的:观察5-氮胞苷诱导下P19 胚胎癌细胞是否可以分化成肌细胞及心肌结构蛋白的表达.方法:培养P19 胚胎癌细胞,实验分为2 组,诱导组以1 μmol/L 5-氮胞苷诱导4 d,对照组加入同体积的PBS.免疫荧光双标检测各组结蛋白和心肌肌钙蛋白T 的共表达;Western blot 检测各组细胞的心肌肌钙蛋白T 表达.结果与结论:诱导组检测到结蛋白和心肌肌钙蛋白T 在同一细胞相同部位共表达,对照组未见两种蛋白表达和共表达;Western blot 检测显示诱导组细胞有心肌肌钙蛋白T 表达,对照组无心肌肌钙蛋白T.提示5-氮胞苷可以诱导单层培养P19胚胎癌细胞分化成肌细胞并表达心肌结构蛋白.
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人白细胞介素23 p19亚基基因的克隆和序列分析
目的:克隆人白细胞介素-23(IL-23) p19亚基基因.方法:分离健康成年人外周血单个核细胞,常规培养后用脂多糖至终浓度为100 ng/ml刺激增殖12 h,收集细胞并提取细胞总RNA,用RT-PCR方法扩增人IL-23 p19 cDNA编码基因,克隆至pMD18-T载体,PCR鉴定后进行序列测定.结果:RT-PCR产物电泳结果显示所扩增的基因为734 bp,基因测序显示其序列与GenBank报道的人IL-23 p19基因序列完全一致.结论:成功地克隆了人IL-23 p19cDNA编码基因.
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p19在颌面部皮肤血管瘤不同时期的表达
目的:探讨p19在血管瘤发生、发展及退化过程中的表达状况及其意义.方法:采用免疫组织化学方法(SABC法)检测人皮肤血管瘤增生期、退化期及正常皮肤组织中p19的表达水平.利用计算机图像分析技术测量不同时期血管瘤组织和正常皮肤组织p19表达的积分光密度和面积.结果:增生期血管瘤内皮细胞p19表达水平低于退化期,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:p19的表达水平与血管瘤的发生、发展与消退有关.
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长链非编码RNA uc.299在心脏发育中的作用
目的:研究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)uc.299在P19细胞分化及斑马鱼心脏发育中的作用,探讨其与心脏发育之间的关系.方法:体外实验中,通过shRNA沉默uc.299后,检测对P19分化的影响;在体实验中,对斑马鱼受精卵显微注射uc.299反义寡核苷酸,观察对斑马鱼心脏发育的影响.结果:与对照组相比,沉默uc.299对P19细胞分化有明显的抑制作用,心肌细胞跳动频率降低,各心肌标志物表达水平有明显下调.斑马鱼实验表明,沉默uc.299可造成斑马鱼心脏明显水肿.结论:沉默uc.299可影响P19分化和斑马鱼心脏发育,表明uc.299对维持心脏正常发育具有一定作用.
关键词： 长链非编码RNA 室间隔缺损性先天性心脏病 p19 斑马鱼 作用 -
INK4a/ARF抑癌基因
细胞增殖失控和细胞凋亡障碍是癌变的根本原因，而大多数肿瘤细胞都是通过干扰 Rb（ retinoblastoma,Rb）蛋白和 p53的功能，导致细胞周期调节紊乱和凋亡反应阻抑的。 INK4a/ARF（ inhibitor of CDK4/ alternative reading frame）基因可同时调控这两条控制细胞增殖和凋亡的通路，它编码两种蛋白： p16INK4a，一种细胞周期素依赖蛋白激酶抑制蛋白 (CKI)，可以上调 Rb蛋白的活性； p19ARF，可以阻抑 mdm2抑制 p53的活性（ mdm2：小鼠双微 -2， murine double minute-2）。这种同一基因—两个产物—两条途径的方式，在哺乳动物中相当罕见，为探索肿瘤的发生提供了一种新的思路。 1 p16INK4a的发现与结构 细胞周期是由细胞周期素（ cyclin）、细胞周期素依赖蛋白激酶 (CDK) 和细胞周期素依赖蛋白激酶抑制蛋白 (CKI)来进行调控的。 CKI分为两类： INK4（ inhibitor of CDK4）和 KIP家族，其中 INK4a和 INK4b位于染色体 9p21。 1992年， Cannon-Albright[1]在研究黑色素瘤的易感基因时，发现 9p21有一个抑癌基因所在位点； 1993年， Xiong Y[2]在用 DNA肿瘤病毒 SV40转化的二倍体成纤维细胞中 ,发现了一个与 CDK4紧密结合的 16 kDa的多肽 (p16)；同年， Serrano[3]用酵母双杂合蛋白相关性筛选法，把两个融合蛋白 CAL4ad和 GALR4db与 p16基因表达蛋白进行筛选，发现 p16的 cDNA编码的蛋白与 CAL4ad 相同，命名为 p16INK4a蛋白； 1994年， Kamb[4]利用染色体步移法（ chromosal walk）的物理图和序列标记位点图 (sequence tagged sites,STSs)，研究肺癌、乳腺癌、膀胱癌等多种细胞系，发现 9p21存在一个与 p16 cDNA序列相同的多肿瘤抑制基因，命名为 MTS1(multiple tumor suppressor 1)，以后由 HUGO正式命名为 CDKN2(cyclin dependent kinase inhibitor 2)。
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膀胱癌中P19表达及意义
目的:分析P19在膀胱癌组织中的表达,探讨其与膀胱癌的发生发展以及临床病理特征之间的关系,综合分析其临床意义;方法:收集2015年01月至2015年07月我院膀胱癌病例28例,PT-PCR以及Western blot分析P19基因及蛋白膀胱癌组织中的表达;结果:P19在两种组织中表达有明显差异,P19在膀胱癌组织中基因及蛋白表达量明显低于其配对的正常非肿瘤肾组织(P＜0.05);结论:P19及蛋白在膀胱癌中的表达水平,对判断其发生和转移有重要价值,可作为膀胱癌临床进程潜在的指标,为治疗和预后评价提供依据.
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INK4系列抑癌基因在白血病中纯合子缺失的实验研究
目的:探讨p16基因家族失活与白血病发生、发展及预后的关系.方法:PCR检测p16、p15、p18、p19基因在白血病中纯合子缺失.结果:p16、p15基因外显子1在AL组纯合子缺失率分别为22.37%、17.05%,在ALL组为45.95%、32.43%,在ANLL组均为5.88%;在CML的慢性期均为0.p16、p15基因外显子2在AL组纯合子缺失率分别为12.5%、5.68%;在ALL组为24.32%、10.81%;在ANLL组为3.92%、1.96%;在CML和对照组二者均无缺失.p18、p19基因外显子1在AL组纯合子缺失率分别为1.14%、0;在ALL组分别为2.70%、0;在ANLL和对照组均无缺失.结论:p16、p15基因纯合子缺失在AL的发生频率较高,ALL缺失率明显高于ANLL,复发ALL组基因失活率高.p16、p15基因纯合子缺失是AL,尤其是ALL的发病重要因素之一.p18、p19基因在AL组中几乎未见纯合子缺失.在ALL中,p16纯合子缺失率高于p15纯合子缺失率.两个基因的纯合子缺失常伴随存在.在ANLL中,p16、p15基因的纯合子缺失均少见.
