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细胞因子对淋巴管内皮祖细胞的趋化和动员作用
目的 研究血管内皮生长因子C(VEGF-C)、基质细胞衍生因子-1(SDF-1)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对CD34+/CD133+/VEGFR-3+淋巴管内皮祖细胞(LEPCs)的趋化和动员作用.方法 用Percoll非连续密度梯度离心法分离狗外周血单个核细胞,再用流式细胞术分选VEGFR-3+ LEPCs,激光扫描共焦显微镜下观察细胞特征性标志物CD34和CD133的表达.通过跨膜迁移实验观察VEGF-C、SDF-1、MCP-1和G-CSF对LEPCs的趋化作用,并用扫描电镜观察迁移细胞的形态特征.在大鼠皮下分别注射VEGF-C、SDF-1、MCP-1和C-CSF,用流式细胞术检测外周血单个核细胞中LEPCs数目,同时用全自动血样分析仪计数白细胞.结果 与对照组相比,VEGF-C、SDF-1、MCP-1和G-CSF组跨膜迁移细胞的百分率增大,用VEGFR-3和CXCR-4阻断抗体处理后VEGF-C和SDF-1的趋化迁移作用明显降低.注射VEGF-C、SDF-1、MCP-1和G-CSF后,大鼠外周血中LEPCs的数量明显增多.未见白细胞显著增多.结论 VEGF-C、SDF-1、MCP-1和G-CSF对LEPCs有趋化迁移和动员作用,VEGF-C/VEGFR-3和SDF-1/CXCR-4信号途径在LEPCs趋化迁移方面起着重要调控作用.
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淋巴管新生及其在相关疾病发生和治疗中的意义
淋巴管在维持体内微环境衡定、免疫反应和肿瘤淋巴转移等方面起着重要作用,淋巴管新生与胚胎发育、外伤修复、炎症转归和肿瘤转移密切相关.在趋化因子和生长因子的作用下,淋巴管内皮细胞迁移、增殖和构成管腔,形成新的淋巴管.近年来发现淋巴管内皮祖细胞参与淋巴管新生.淋巴管内皮特异表达Prox-1、podoplanin、VEGFR-3和 LYVE-1等,这些因子和受体调控淋巴管新生.VEGF-C/VEGFR-3或VEGF-D/VEGFR-3信号途径在淋巴管新生过程中起着重要作用.VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3可作为基因治疗的靶点,有望治疗淋巴管新生障碍性疾病以及抗移植后免疫排斥和抗肿瘤淋巴管转移.本文主要综述了胚胎发育、先天性淋巴水肿、炎性病变和肿瘤等状态下淋巴管新生的变化及其机制、淋巴管内皮祖细胞参与淋巴管新生的过程、淋巴管内皮细胞特异性转录因子和受体对于淋巴管新生的调控作用.
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人脐带血淋巴管内皮祖细胞的分化及其生物学特征
目的研究脐带血中CD34+/CD133+/VEGFR-3+淋巴管内皮祖细胞经VEGF-C诱导向内皮细胞分化过程中生物学特征的变化,并探讨其分化的机制.方法取脐带血,用Percoll密度梯度离心法分离单形核细胞,再用流式细胞仪分选CD34+/CD133+/VEGFR-3+细胞,然后用VEGF-C诱导分化.在扫描电镜和透射电镜下观察细胞表面形态和细胞内结构的变化,并在激光扫描共焦显微镜下观察特征性标志物的表达变化.结果脐带血中的淋巴管内皮祖细胞表达CD34、CD133和VEGFR-3.CD34+/CD133+/VEGFR-3+细胞经VEGF-C诱导后7 d,呈长梭形,细胞伸出板状伪足和丝状伪足,出现较多短的微绒毛,表面可见细胞小凹,细胞质中含有丰富的线粒体和粗面内质网.诱导后14 d,细胞已具有内皮细胞的特征,表达淋巴管内皮特异性标志物LYVE-1和5-核苷酸酶,CD133表达消失,细胞质中可见Weibel-Palade小体.结论脐带血中存在CD34+/CD133+/VEGFR-3+淋巴管内皮祖细胞,这些细胞在VEGF-C诱导作用下可能通过VEGF-C/VEGFR-3信号途径分化为淋巴管内皮细胞.
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RNAi体外沉默淋巴管内皮祖细胞VEGFR-3基因表达
目的：应用聚乙烯亚胺（polyethyleneimine，PEI）包裹淋巴管内皮祖细胞（lymphatic endothelial progenitor cells，LEPCs）血管内皮生长因子受体3（vascular endothelial growth factor receptor-3，VEGFR-3）基因siRNA，体外沉默VEGFR-3基因表达，研究抑制LEPCs分化抗肿瘤淋巴管新生的作用。方法 Ficoll法分离人脐血单个核细胞，流式细胞仪、免疫荧光分选并鉴定LEPCs。PEI包裹VEGFR-3siRNA并转染入LEPCs，流式细胞仪检测转染效率。RT-PCR和Western blot检测mRNA和蛋白质水平VEGFR-3基因沉默效果。结果 VEGFR-3siRNA成功转入LEPCs，转染效率30%。VEGFR-3siRNA转染组LEPCs VEGFR-3mRNA和蛋白表达均降低（P＜0.05）。结论体外经由PEI介导的siRNA能有效的抑制LEPCs VEGFR-3的表达，为以LEPCs为靶点抑制肿瘤淋巴管新生提供了实验依据。
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淋巴管内皮祖细胞在淋巴管新生中的作用及其机制
淋巴管新生在胚胎发育、外伤修复、炎症转归、肿瘤转移和器官移植后排斥反应等方面起着重要作用.除淋巴管内皮细胞外,淋巴管内皮祖细胞参与淋巴管新生.淋巴管内皮祖细胞表达CD34、CD133和VEGFR-3,在趋化因子作用下由骨髓动员入外周血,继而迁入局部组织.经VEGF-C等生长因子诱导向淋巴管内皮细胞分化,参与淋巴管新生.VEGF-C/VEGFR-3信号途径在LEPCs分化和淋巴管新生方面起着关键调控作用,故VEGF-C和VEGFR-3可作为基因治疗的靶点,调节淋巴管内皮细胞向内皮细胞分化,从而促进或抑制淋巴管新生.阐明内皮祖细胞在淋巴新生方面的作用机制对于探讨肿瘤淋巴转移和器官移植后存活等具有重要意义.
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PEI介导 VEGFR-3 siRNA 转染对 VEGF-C诱导LEPCs分化的影响
目的：应用聚乙烯亚胺（ polyethyleneimine ， PEI ）介导淋巴管内皮祖细胞（ lymphatic endothelial progenitor cells ， LEPCs ） VEGFR-3基因 siRNA，体外沉默 LEPCs VEGFR-3基因表达，观察VEGFR-3siRNA对VEGF-C诱导LEPCs分化的影响。方法采用Ficoll法分离人脐血单个核细胞，流式细胞仪、免疫荧光分选并鉴定 LEPCs。 PEI 包裹前期实验抑制效果好的 VEGFR-3siRNA 体外转染入LEPCs，荧光显微镜和流式细胞仪检测转染效率。流式细胞仪检测经 VEGF-C 诱导7天各组 LEPCs CD133＋细胞所占比例，14天后各组LYVE-1＋细胞所占比例。结果 VEGFR-3siRNA成功转染入LEPCs，转染效率30％，与lipofectimine转染效率无差异，VEGFR-3siRNA转染组7天的LEPCs CD133＋细胞所占比例明显高于VEGF-C诱导组（P＜0．05），而14天后两组之间LYVE-1＋细胞所占比例无显著差异（P＞0．05）。结论体外经由PEI介导的siRNA能有效的沉默LEPCsVEGFR-3的表达，从而抑制VEGF-C诱导的LEPCs分化。
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淋巴管内皮祖细胞标志物的研究进展
淋巴管内皮祖细胞是淋巴管新生和再生的起点，分化成的淋巴管内皮细胞构成了淋巴管网络的基本框架。随着淋巴管新生和再生研究的深入，淋巴管内皮祖细胞在其中发挥的作用得到越来越多的关注。淋巴管内皮祖细胞已成为当前的研究热点之一，我们就其标志物的相关进展进行综述。
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人外周血单核细胞经体外诱导向淋巴管内皮细胞分化的实验研究
目的 探讨人外周血单核细胞经体外诱导能否向淋巴管内皮细胞分化.方法 从健康人外周血分离单个核细胞,经贴壁法获取单核细胞,用内皮细胞培养基EGM-2和体外诱导培养单核细胞,分别用免疫荧光细胞化学染色法、RT-PCR及流式细胞术检测单核细胞对淋巴管内皮标志物VEGFR-3、Podoplanin、LYVE-1、Prox-1和内皮共同标志物vWF、VEGFR-2的表达.结果 经过诱导培养后的细胞呈纺锤形或多角形,表达VEGFR-3、LYVE-1、Prox-1、Podoplanin和vWF,弱表达或者不表达VEGFR-2.结论 人外周血来源的单核细胞经体外诱导培养可分化为淋巴管内皮样细胞.
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糖尿病和糖尿病足溃疡患者淋巴管内皮祖细胞改变及其影响因素研究
目的 探讨耱尿病患者和糖尿病足溃疡患者外周血淋巴管内皮祖细胞的改变及其影响因素.方法 采用RT-PCR检测外周血白细胞中淋巴管内皮祖细胞标志物VEGFR3mRNA表达;采用免疫组织化学检测外周血白细胞VEGFR3蛋白表达,并计数VEGFR3阳性细胞数量;检测各组患者临床指标,分别和外周血VEGFR3表达进行统计学相关分析.结果 与正常对照组比较,实验组外周血VEGFR3mRNA表达及VEGFR3蛋白表达减少,差异有统计学意义(P＜0.01).糖尿病1组(HbAlC ＜7％)与正常对照组比较,VEGFR3阳性细胞数量减少,差异有统计学意义(P＜0.05);糖尿病2组(HbA1C≥7％)和糖尿病足组与正常对照组比较,VEGFR3阳性细胞数量减少(P＜0.01).相关因素分析显示:VEGFR3表达的影响因素为糖化血红蛋白、空腹血糖、收缩压、舒张压.结论 耱尿病及耱尿病足溃疡患者外周血淋巴管内皮祖细胞标志物VEGFR3表达减少,且和糖化血红蛋白、空腹血糖、收缩压、舒张压呈负相关.
