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DLC-1基因表达缺失在胰腺癌发展过程中的机制研究
目的 探讨DLC-1基因在胰腺癌的发展过程中的作用.方法 通过表达谱基因芯片分析和qPCR检测DLC-1基因在胰腺癌组织和癌旁组织中的表达差异,并检测不同胰腺癌细胞株中该基因的表达水平;同时过表达DLC-1基因的慢病毒感染胰腺癌细胞系SW1990,通过流式细胞术和Transwell实验观察DLC-1基因对胰腺癌细胞株的增殖及侵袭能力的影响.结果 DLC-1基因在胰腺癌组织中的表达显著低于癌旁组织;过表达DLC-1基因能够抑制胰腺癌细胞系SW 1990的增殖和侵袭能力.结论 DLC-1基因的过表达对胰腺癌的发展有着明显的抑制作用.
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5-氮杂-2'-脱氧胞苷联合古曲霉素A对人多发性骨髓瘤细胞系RPMI 8226细胞增殖、凋亡及DLC-1基因表达的影响
本研究旨在探讨DNA甲基化抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-cdR)联合组蛋白去乙酰化抑制剂古曲霉素A(TSA)对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226细胞的生物学活性及DLC-1基因表达调控的影响.5-Aza-CdR及TSA单独或联合作用于RPMI 8226细胞系,用CCK-8法检测细胞增殖活性,实时定量PCR(RT-PCR)检测药物作用后DLC-1基因表达情况,ELISA检测药物作用后RhoA及Rac1蛋白表达水平.结果表明,5-Aza-CdR及TSA对多发性骨髓瘤细胞具有明显生长抑制作用并呈剂量依赖性(P＜0.05);与5-Aza-CdR及TSA单药组比较,联合用药组对细胞的抑制作用更强,细胞凋亡率明显升高(P＜0.05);对照组RPMI 8226细胞DLC-1基因微弱表达,5-AzacdR组DLC-1基因表达增强,且呈剂量依赖性重新表达(P＜0.05),TSA虽不能诱导基因重新表达,但两药联合应用时可明显增强细胞DLC-1基因的表达;实验组与对照组多发性骨髓瘤细胞相比,rhoA及Rac1蛋白表达明显下降(P＜0.05).结论:5-Aza-CdR及TSA能有效的逆转RPMI 8226细胞DLC-1基因的表达,并明显增强对多发性骨髓瘤细胞的生长抑制及促凋亡作用.这种抑制作用可能与其抑制Rho/ROCK信号途径有关.
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DLC-1基因甲基化在骨髓增生异常综合征中的临床意义及地西他滨对DLC-1基因表达的影响
目的 检测肝癌缺失基因(DLC-1)在骨髓增生异常综合征(MDS)患者中的异常甲基化情况及异常甲基化对MDS患者DLC-1基因的表达影响;探讨DLC-1基因甲基化对MDS的临床意义及MDS的表观遗传学药物地西他滨对DLC-1基因的表达影响.方法 选取福建医科大学附属协和医院血液内科2013至2015年收治的43例MDS患者,采用甲基特异性PCR法(MSP)定性检测MDS患者DIC基因甲基化状态,荧光实时定量PCR(RTFQ-PCR)检测MDS患者DLC-1基因的表达情况;根据MDS的世界卫生组织(WHO)预后积分系统(WPSS积分)标准及危险度分组将MDS患者分为极低危、低危、中危、高危、极高危5组(n=0、8、7、18、10),探讨DLC-1基因甲基化对MDS患者的临床意义.采用重亚硫酸盐测序PCR(BSP)法定量检测地西他滨作用前、后MDS患者DLC-1基因的甲基化状态,RTFQ-PCR检测MDS患者用药前、后DLC-1基因基因mRNA的表达变化.结果 MDS患者DLC-1基因的甲基化比例为55.16％ (22/43),DLC-1基因甲基化阳性患者骨髓DLC-1基因mRNA的表达(0.32 ±0.06)显著低于DLC-1基因甲基化阴性患者(0.91 ±0.11) (P=0.008).对于MDS患者,危险度分层中、高危患者的DLC-1基因甲基化率为21/35,明显高于低危患者的1/8(P =0.006).8例采用含地西他滨治疗方案(地西他滨20 mg/m2,共5d,28 d为1疗程,4疗程以上)的患者治疗前、后的DLC基因甲基化率分别为57.50％±5.11％和14.13％±2.07％(P=0.010),DLC-1基因mRNA表达分别为0.28±0.06和0.67 ±0.08(P =0.015),差异均有统计学意义.结论 DLC-1基因甲基化在MDS患者中较为常见,且可能与不良预后相关;表观遗传学治疗药物地西他滨可逆转MDS患者DLC-1基因异常甲基化状态,使DLC-1基因表达上调,恢复其活性,可能是地西他滨治疗MDS患者的机制之一.
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DLC-1基因启动子甲基化对于B-ALL的预后价值
目的 观察儿童急性淋巴细胞白血病中肝癌缺失-1(DLC-1)抑癌基因启动子甲基化状态,评估该基因甲基化对于急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)的预后价值.方法 对40例B-ALL患儿DLC-1启动子甲基化状态与白血病敏感预后指标白血病微小残留病灶(MRD),以及其他对B-ALL预后可能有影响的指标作一比较,评价DLC-1对于B-ALL的预后判断价值,以及是否可以作为B-ALL的独立预后危险因素.结果 DLC-1甲基化阳性的B-ALL患儿的复发率和5年无事件生存率均与DLC-1甲基化阴性患儿差异有统计学意义(P<0.05).DLC-1启动子甲基化与MRD的结果 分布并不一致(P>0.05).但两者同为阳性结果 的5例患儿在5年内全都复发,复发率为100%;而两者同为阴性结果 的11例患儿,仅1例在5年内复发,复发率为9%.多因素分析显示仅MRD可作为独立的预后危险因素(P=0.017),DLC-1基因甲基化阳性患儿复发风险是甲基化阴性患儿的8.5倍.结论 DLC-1甲基化和MRD都是B-ALL有意义的预后指标,两者结合可为临床提供覆盖面更广的预后信息.DLC-1甲基化也显示了该指标有成为独立预后危险因素的趋势.
关键词： DLC-1基因 甲基化 急性B淋巴细胞白血病 预后价值 -
早期肺癌患者DLC-1基因表达与临床特征研究
目的 探讨DLC-1基因在早期肺癌组织中的表达及与肺癌患者临床特征的关系.方法 对60例肺癌组织标本及癌旁组织进行DLC-l基因扩增检测,同时检测9例良性病变组织中DLC-1基因的表达状况,结合患者的临床特征分析DLC-1基因的表达状况与其的关系.结果 60例肺癌标本中,有22例表达阳性,癌旁组织有49例表达阳性,二者差异有统计学意义(P＜0.0l).9例良性病变组织中,有7例DLC-1基因mRNA表达阳性,与肺癌组有显著差异(P＜0.05).结论 DLC-1基因在早期肺癌组织中表达缺失或者低表达,并与肺癌患者较差的临床预后明显相关.
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3种结肠癌细胞株中DLC-1基因的表达及其启动子区的甲基化状态研究
目的:研究候选抑癌基因DLC-1在结肠癌细胞株中的表达及其启动子区的甲基化状态,初步探讨结肠癌细胞株DLC-1基因表达水平与其启动子区甲基化的相关性.方法:采用RT-PCR技术分别检测DLC-1基因在人结肠癌细胞株CaCo-2、HT-29和LoVo中的表达水平;应用甲基化特异性PCR(MSP)方法和亚硫酸氢盐修饰DNA测序检测启动子区域甲基化状态;分别用0、5、10 μmol·L-1浓度的去甲基化药物5氮杂胞苷处理DLC-1基因启动子区域高甲基化状态细胞后,再检测DLC-1基因mRNA表达水平.结果:人结肠癌细胞株CaCo-2和LoVo中DLC-1 mRNA呈阳性表达,HT-29中的表达呈阴性表达;CaCo-2和LoVo细胞DLC-1基因启动子区域未发生甲基化,而HT-29出现启动子区高甲基化状态;经5氮杂胞苷药物干预后,HT-29结肠癌细胞的DLC-1基因表达明显增强.结论:结肠癌细胞株HT-29中DLC-1基因表达沉默与启动子区高甲基化状态有关.
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反义DLC-1基因对结直肠癌LoVo细胞增殖和细胞周期的影响
目的 应用核糖核酸干扰(RNAi)技术,通过对大肠癌细胞株LoVo中DLC-1基因mRNA表达的抑制,初步探讨DLC-1基因对大肠癌细胞株的生物学行为影响.方法 构建DCL-1的RNAi重组体pGCsiDLC,转染大肠癌LoVo细胞株.采用RT-PCR观察转染前后细胞株中DLC-1 mRNA以及 Bax、Bcl-2基因表达的改变,MTT比色法检测转染前后细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期.结果 成功构建发卡siRNA真核表达载体pGCsiDLC;pGCsiDLC转染LoVo细胞后,电泳显示DLC-1 mRNA表达水平明显下降;LoVo细胞生长曲线增长幅度亦随时间的增加而逐渐增高,在48h为明显,RNAi组细胞比脂质体组及空白对照组细胞增殖明显增高(P＜0.05);干扰后的LoVo细胞株G0/G1期发生阻滞,而G2/M 期细胞数量分布减少.而Bax和bcl-2基因表达在干扰前后未见明显改变.结论 成功构建载体介导的DLC-1靶向RNAi重组体可有效抑制LoVo细胞DLC-1 mRNA表达;DLC-1基因可抑制结直肠癌细胞增殖并且对细胞周期重新分布,其可能与结直肠癌的发生发展有一定关系,可能是一个新的抑癌基因.
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5氮杂胞苷对HT29细胞DLC-1基因表达和细胞增殖活性的影响
目的探讨去甲基化药物5氮杂胞苷对肠癌细胞系HT29的DLC-1基因表达和细胞增殖活性的影响.方法使用浓度为5 μmol·L-1和10 μmol·L-1的去甲基化药物5氮杂胞苷处理HT29细胞,通过MTT实验观察细胞增殖活性的差异,RT-PCR技术检测DLC-1 mRNA表达强度的变化.结果经药物处理后,HT29细胞的增殖活性受到抑制,DLC-1 mRNA的表达明显增强.结论 HT29细胞DLC-1 mRNA的表达下调可能是由于启动子区域高甲基化所致,DLC-1基因具有抑制肿瘤细胞生长的功能,其可能参与了结肠癌的发病机制.
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5-氮杂-2-脱氧胞苷及曲古抑菌素A对人胃癌SNU-1细胞系中DLC-1基因启动子甲基化及mRNA表达的影响
目的 探讨5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycitydine,5-Aza-dC)联合曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对胃癌细胞株SNU-1中DLC-1基因的甲基化水平和mRNA表达的影响.方法 应用甲基化特异性聚合酶链式反应(MSP)和实时荧光定量PCR,检测5-Aza-dC单药或联合TSA作用于SNU-1细胞后,DLC-1基因的甲基化水平及DLC-1基因mRNA表达量.结果 对照组中DLC-1基因呈甲基化状态;5-Aza-dC药物干预组DLC-1基因出现明显的非甲基化条带,甲基化条带亮度减弱;TSA组条带无明显变化;5-Aza-dC+ TSA组DLC-1基因甲基化条带明显减弱,且出现非甲基化条带.5-Aza-dC组DLC-1 mRNA表达量是对照组的2.22倍,TSA组DLC-1 mRNA表达量是对照组的2.20倍,5-Aza-dC+ TSA组DLC-1 mRNA表达量是对照组的4.50倍(P＜0.05).结论 5-Aza-dC能诱导胃癌细胞系SNU-1中DLC-1基因去甲基化,与TSA联用可提高DLC-1 mRNA表达.
关键词： 5-氮杂-2-脱氧胞苷 曲古抑菌素A 胃癌 SNU-1细胞系 DLC-1基因 -
肝癌中医证型与DLC-1基因甲基化表达的相关性研究
目的:探讨肝癌不同证型与DLC-1基因甲基化表达的相关性.方法:63例肝癌患者依据中华人民共和国国家标准,从瘀论治分为肝郁(气滞)血瘀证、肝气虚血瘀证、肝瘀痰结(阻)证和肝胆湿热瘀滞证;采用荧光定量PCR方法检测患者治疗前及治疗后外周静脉血DLC-1基因甲基化表达在肝癌各证型的分布情况,并进行统计分析.结果:(1)研究发现肝癌患者各证型都有DLC-1甲基化阳性反应,阳性率从高到低依次为:肝瘀痰结组＞肝郁血瘀组＞肝胆湿热组＞气虚血瘀组;(2)统计学分析四组证型之间DLC-1甲基化表达没有明显的差异性,无统计学意义(P＞0.05).结论:肝癌中医证型的分布可能与DLC-1基因有关,有待进一步的研究.
