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白头翁皂苷对佐剂性关节炎大鼠FZD8表达的影响
研究中药白头翁有效成分白头翁皂苷(pulchinenoside,PULC)对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠Frizzled(FZD)表达的影响.采用足跖注射完全弗氏佐剂制备AA大鼠,原代培养AA大鼠滑膜成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like syno-viocytes,FLS),Real-time qPCR检测PULC灌胃治疗对AA大鼠FLS FZD8表达的影响,MTT,ELISA检测FZD8敲除对FLS增殖和IL-1,IL-6,IL-8表达的影响,Real-time qPCR检测miR-375在FZD8异常表达中的作用.检测发现经PULC灌胃治疗后,AA大鼠FLS中FZD8表达明显降低,FZD8敲除后FLS增殖明显减弱,IL-1,IL-6,IL-8表达明显减少,PULC灌胃治疗后miR-375表达明显升高,上调表达的miR-375能够抑制FZD8的表达.PULC可能通过上调miR-375表达抑制FZD8的表达.
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miR-375靶向IGF-1对子宫内膜癌细胞增殖的调控作用
目的 探讨miR-375靶向胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对子宫内膜癌细胞增殖的调控作用.方法 选择对数生长期的人子宫内膜癌Ishikawa细胞,随机分为5组,模拟剂组转染miR-375模拟剂,模拟剂NC组转染miR-375模拟剂NC,抑制剂组转染miR-375抑制剂,抑制剂NC组miR-375抑制剂NC,对照组为未转染的Ishikawa细胞.利用qRT-PCR技术验证miR-375的表达;利用CCK8及凋亡实验检测Ishikawa细胞增殖及凋亡情况;利用West-ern blot技术检测IGF-1表达水平.结果 转染后48 h与96 h,模拟剂组比模拟剂NC组细胞的增殖能力下降,抑制剂组比抑制剂NC组细胞的增殖能力增强(P<0.05).转染48 h后,模拟剂组、miR-375 NC组、抑制剂组、抑制剂NC组、对照组凋亡率分别为(40.00±3.18)％、(18.19±2.01)％、(7.44±1.11)％、(18.11±1.86)％、(17.22±3.84)％,miR-375 NC组显著低于模拟剂组,抑制剂NC组显著高于抑制剂组(P<0.05).转染48 h后,IGF-1蛋白在模拟剂组、miR-375 NC组、抑制剂组、抑制剂NC组、对照组中的相对表达水平分别为0.45±0.22,1.45±0.14,3.89±0.11,1.66±0.33,1.74±0.32,miR-375 NC组显著高于模拟剂组,抑制剂NC组显著低于抑制剂组(P<0.05).结论 过表达的miR-375能抑制子宫内膜癌细胞增殖与促进细胞凋亡,其具体机制可能是miR-375通过负向调控IGF-1的表达而实现.
关键词： 子宫内膜癌 miR-375 胰岛素样生长因子-1 细胞增殖 -
循环miR-375作为2型糖尿病生物标志物的研究进展
MicroRNAs (miRNAs)是微小非编码RNA,控制基因表达、参与生理病理过程,很多miR-NAs主动或被动释放到循环系统中,可用于评价健康状态和疾病进程,是新生物标志物的候选者.miR-375是人和小鼠胰岛中表达量高的一个miRNA,可作为胰岛特异的标志物,也是糖尿病潜在的新生物标志物.本文对循环miR-375作为T2DM新生物标志物的研究进展和存在问题作简要综述.
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新疆汉族2型糖尿病患者miR-375基因启动子区甲基化的初步研究
目的 探讨新疆汉族T2DM及糖耐量正常(NGT)人群miR-375启动子区部分CpG位点的甲基化状态. 方法 采用基质辅助激光解析电离时间飞行质谱仪检测100例T2DM患者(T2DM组)和100名NGT者(NGT组)外周血白细胞中miR-375基因启动子区5个CpG位点的甲基化状态,并对结果进行分析. 结果 (1)T2DM组平均甲基化水平高于NGT组(10.27％ vs 7.24％,P＜0.01);(2)T2DM组miR-375基因5个CpG位点的甲基化率均高于NGT组,如CpG_22、CPG_24.25、CpG_26.27,仅CpG_26.27在两组中比较,差异有统计学意义(P＜0.01). 结论 汉族T2DM患者外周血白细胞中miR-375基因部分启动子区异常甲基化水平可能与T2DM的发生有一定的关系.
关键词： 糖尿病 2型 miR-375 DNA甲基化 基质辅助激光解析电离时间飞行质谱仪 -
miR-375在人胚胎干细胞定向分化为胰岛素分泌细胞过程中对肝细胞核因子1β表达的调控作用
目的 探讨miR-375对人胚胎干细胞(hESC)定向分化为胰岛素分泌细胞(IPCs)的调控作用及其潜在机制.方法 体外诱导hESC定向分化为IPCs,分析miR-375与其预测靶基因肝细胞核因子1β(HNF-1β)之间表达水平的动态变化关系;以miR-375过表达的慢病毒载体感染分化第二阶段细胞,实验分为空白对照组、阴性对照(GFP)组及miR-375过表达组;应用实时定量PCR和(或) Western blotting法检测各组分化细胞中miR-375、HNF-1β、胰岛细胞分化或功能相关的关键基因的表达.两组间比较用t检验,多组间比较用单因素方差分析和Q检验.结果 hESC分化五个阶段中miR-375表达水平呈先高后低的变化趋势,相对表达量分别为100%、(472.25 ± 33.53)%、(768.00 ± 25.65)%、(54.25±5.74)%、(30.75±5.70)% (F=1137.57,P<0.001).HNF-1β表达水平在分化第三阶段开始明显上升,在分化第四阶段达到高峰[分别为(279.50 ± 21.30)%、(645.00 ± 64.55)%,F=224.86,P<0.001],变化趋势与1/miR-375的变化趋势相似.慢病毒感染后,miR-375过表达组的HNF-1βmRNA表达水平与GFP组、空白对照组无显著差异(F=1.467,P>0.05),而miR-375过表达组的HNF-1β蛋白表达水平则下降至GFP组的(38.75±9.22)% (F=60.69,P<0.001).与GFP组相比,miR-375过表达组分化第四阶段细胞的胰十二指肠同源盒因子1(Pdx-1)表达水平显著升高,分化第五阶段细胞(IPCs)的Nkx6.1、配对盒因子4(Pax-4)及胰岛素的表达水平则显著降低(F=105.19~484.05,均P<0.001).结论 miR-375对hESC向IPCs定向分化具有重要的调控作用,该作用可能是通过影响转录因子HNF-1β表达而实现的.
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关键词：
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慢性乙型肝炎患者血清中miR-122、miR-375表达分析
目的 探索慢性乙型肝炎患者血清中miR-122、miR-375表达情况.方法 选取2012-2013年郑州大学第二附属医院,经检测诊断为慢性乙肝病人488例,同时选取健康体检者488例作为对照.采外周血2ml,提取RNA,定量逆转录PCR方法检测miR-122和miR-375相对表达水平.与ELISA五项、HBV DNA和ALT检测结果对比分析.结果 健康对照组和慢性乙肝组血清中miR-122和miR-375相对表达量分别为(1.92 ±0.67)、(10.38±2.27)和(1.24±0.36)、(6.57±1.26).在慢性乙肝病人中,HBeAg阳性病人的miR-122和miR-375相对表达量高(13.22 ±2.34)和(8.11±1.34),与HBeAg阴性的非活动性携带者比较,差异均有显著性(P＜0.05).结论 慢性乙肝患者血清中miR-122和miR-375相对表达量显著升高;不同慢性乙肝病人中miR-122和miR-375表达水平升高存在差异,其中HBeAg阳性病人的升高显著,而非活动性携带者的升高少.
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肝癌患者组织中miR-122、miR-375表达分析
目的 探索肝癌患者组织中miR-122、miR-375的表达情况.方法 选取2013-2014年河南省省直第二医院、郑州大学第二附属医院的原发肝癌手术切除患者30例.提取各癌组织标本中的miRNA(以癌旁正常组织为对照),定量逆转录PCR的方法检测miR-122、miR-375的相对表达水平,并分析各组各组织中miR-122、miR-375表达水平及与肝癌病理学特征的关系.结果 30例肝癌组织中miR-122、miR-375相对表达水平分别为(16.84±4.11)和(14.32±3.81),均都显著高于癌旁的正常组织,差异非常有显著性(P＜0.01);miR-122的相对表达水平与肝癌的大小、肿瘤的分化程度及其TNM分期显著相关(P＜0.05);而miR-375相对的表达水平则与患者年龄和性别及肝癌的大小、分化程度、TNM分期均无关(P＞0.05).结论 肝癌组织中miR-122、miR-375表达升高,且miR-122的相对表达水平和肝癌大小、肿瘤的分化程度及TNM分期有显著相关.
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miR-375与2型糖尿病
miR-375是一类特异性高表达于胰腺组织的非编码小RNA.研究表明,miR-375直接调控多种胰岛组织中特异性转录因子的表达,参与调控多种基因及信号转导通路,影响糖、脂代谢,在2型糖尿病的发生、发展中起一定作用.miR-375对胰岛β细胞分化、胰岛素分泌及糖、脂代谢的调控作用可能为2型糖尿病的早期干预和治疗提供新方向.
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miR-375调控PDGFC基因表达抑制肝癌血管生成
目的:miR-375已被证明能够抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进肝癌细胞凋亡,本研究旨在探索miR-375对肝癌新生血管生成的影响及其分子机制.方法:利用血管生成相关的功能实验探索miR-375对肝癌新生血管生成的影响;使用生物信息学方法预测miR-375潜在的与血管生成相关的功能靶基因;在肝癌细胞系中过表达和下调表达miR-375,验证miR-375对靶基因的调控作用,并利用双荧光素酶报告实验明确其分子机制;靶基因功能挽救实验明确miR-375通过调控靶基因的表达发挥抑制肝癌新生血管生成的作用.结果:miR-375能够抑制肝癌新生血管生成;血小板源性生长因子C(PDGFC)是miR-375的潜在功能靶基因;miR-375能够直接作用于PDGFC基因mRNA 3'-非编码端(3'-UTR)而抑制PDGFC基因表达;miR-375能够通过抑制PDGFC基因表达抑制肝癌新生血管生成.结论:miR-375能够调控PDGFC基因表达抑制肝癌新生血管生成.
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miR-29与miR-375在妊娠期糖尿病中的表达水平及临床意义研究
目的 探讨妊娠期糖尿病(GDM)患者外周血miR-29、miR-375的表达情况及临床意义.方法 以该院2013年1月～2014年12月期间收诊的135例GDM患者为研究对象,设为研究组,并以同期糖耐量正常的孕妇作为正常组,分别检测血浆空腹胰岛素(FINS)及其外周血miR-29、miR-375的表达水平.结果 ①研究组及正常组的FINS分别为(15.21±5.88) mIU/L和(27.15±11.21) mIU/L (P＜0.01);②研究组外周血miR-29表达量(24.83±11.24)低于正常组(76.01±12.52) (P＜0.05);③研究组外周血miR-375的表达量(66.58±21.56)显著高于正常组(22.54±8.80) (P＜0.05).结论 妊娠期糖尿病患者中miR-29、miR-375的异常表达与GDM易感性有一定相关,二者在GDM的筛查诊治中的作用值得更深层次的探讨研究.
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初诊2型糖尿病患者血清中miR-29a和miR-375表达变化及其与糖、脂标志物相关性研究
目的 探讨miR-375和miR-29a在初诊2型糖尿病(DM)患者血清中的表达水平,及其表达变化与糖、脂标志物的相关性.方法 排除既往已诊断DM的健康体检者,所有研究对象均行75克葡萄糖耐量(OGTT)实验,根据1999年WHO的DM诊断标准,将研究对象分为糖代谢正常组(38例)和DM组(48例).以RNU6B 作为内参基因,采用实时荧光定量PCR的方法检测血清中miR-29a和miR-375的相对表达水平.结果 DM患者血清中的miR-29a 和miR-375表达量皆显著高于对照组.血清中miR-29a和miR-375的表达量与FPG、2hPG和糖化血红蛋白皆呈显著正相关(P<0.05),与血脂各指标无显著相关性(P>0.05).血清miR-29a和miR-375表达量间呈显著正相关性.结论 miR-29a和miR-375在血清中表达变化有可能作为诊断2型糖尿病的分子标志物.miR-29a和miR-375两者在2型糖尿病的发生、发展中可能具有协同调控作用.
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miR-375在AGEs介导糖尿病血管损伤细胞中的生物学功能
目的:探讨miR-375在血管损伤细胞中的表达及生物学功能.方法:利用基因克隆技术构建miR-375表达载体;然后将miR-375表达质粒转染至血管损伤细胞中,同时分别设立Huvec 12对照组,血管损伤细胞组,血管损伤抑制组,Huvec12转染miR-375组.24h后收集细胞,在mRNA和蛋白水平检测Mtpn、NFκB、profilin1、sICAM1的表达,经荧光染色观察细胞F-actin的变化,再用流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:血管损伤细胞中过表达miR-375后,在mRNA和蛋白水平靶基因Mtpn下降,NFκB的表达活性下降,使糖尿病血管病变的标志profilin1下调;F-actin表达恢复;细胞粘附因子(sICAM1)表达下降,细胞凋亡减少.结论:初步证明miR-375可以抑制AGEs介导的糖尿病血管细胞损伤的发生,可能成为糖尿病血管损伤并发症基因治疗的靶点.
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miR-375在HBV相关性肝细胞癌肿瘤组织与癌旁组织中的表达
目的:比较HBV相关性肝细胞癌患者的肝癌组织与癌旁组织中miR-375的表达.方法:以西京医院进行肝癌切除术治疗的HBsAg阳性的25例患者为研究对象,收集肝癌组织、癌旁组织及术前外周血标本,并采集相关临床信息.采用反转录和实时荧光定量PCR的方法检测组织中miR-375的表达水平.结果:本研究共收集的25例肝癌患者HBsAg均为阳性,在肝癌组织中miR-375的表达水平为2.51× 103± 3.61× 10-3,显著低于在癌旁组织中的表达水平(15.23× 10-3±20.85× 10-3;t=3.12,P＜0.05).结论:miR-375在HBV相关性肝细胞癌肝癌组织中表达显著下调.
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miR-375靶向调控YAP表达对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响
目的:探讨miR-375靶向调控Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)的表达对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响.方法:收集2015年1月至2016年12月河南中医药大学第二附属医院普外二科行手术切除的70例肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者的癌组织及对应的癌旁组织标本,以及肝癌细胞系SMMC-7721、Hb611、HepG2和BEL-7405,用qPCR法检测HCC癌组织和肝癌细胞中miR-375的表达水平.双荧光素酶报告基因检测miR-375与YAP的相互作用;分析miR-375和HCC患者的临床病理特征之间的关系,MTT法检测miR-375对肝癌细胞增殖能力的影响,Transwell小室法检测抑制miR-375表达后HCC细胞侵袭能力的变化;Western blotting检测HepG2细胞中YAP的表达.建立裸鼠肝癌皮下移植瘤模型,观察抑制miR-375表达后移植瘤体积和质量的变化,免疫组化法和Western blotting检测裸鼠移植瘤中YAP的表达情况.结果:HCC组织中miR-375和YAP表达水平明显高于癌旁组织(均P＜0.05),肝癌HepG2细胞中miR-375的表达水平高(P＜0.05).miR-375能与YAP的3' UTR特异性结合,调控YAP的表达活性.抑制miR-375的表达后,HepG2细胞增殖、侵袭的能力显著减弱(均P＜0.05),裸鼠移植瘤体积和质量都明显减小(均P＜0.05),移植瘤组织细胞中YAP的表达水平相应下调(P＜0.05).结论:miR-375在肝癌的发生发展过程中起重要作用,可以通过靶向调控YAP的表达影响肝癌细胞的恶性生物学行为.
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miR-375通过调控EMT参与HER2阳性乳腺癌细胞对曲妥珠单抗的耐药
目的:探讨微RNA-375(microRNA-375,miR-375)通过调控上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),参与人类表皮生长因子受体2 (human epidermal growth factor receptor 2,HER2)阳性乳腺癌细胞对曲妥珠单抗耐药的作用及其可能的分子机制.方法:应用MTT法检测并比较HER2阳性乳腺癌亲本敏感细胞株SK-BR-3和耐药细胞株SK-BR-3R对曲妥珠单抗的敏感性,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测两种细胞中miR-375以及EMT相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)的表达水平.将miR-375模拟物转染耐药细胞SK-BR-3R后,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测细胞中miR-375、E-cadherin和vimentin表达水平的改变,MTT法检测耐药细胞对曲妥珠单抗的敏感性变化.应用生物信息学软件预测miR-375的靶基因,并选取异黏蛋白(metadherin,MTDH)基因作为靶基因.进一步应用荧光素酶报告基因系统检测miR-375对MTDH基因的转录调控作用.设计特异性针对MTDH基因的siRNA,并将其转染耐药细胞SK-BR-3R后,采用蛋白质印迹法观察MTDH表达被干扰后细胞中E-cadherin和vimentin表达水平的改变.结果:与敏感细胞株SK-BR-3相比,耐药细胞株SK-BR-3R对曲妥珠单抗的敏感性明显降低(P＜0.001),而且耐药细胞SK-BR-3R中miR-375和vimentin的表达水平均明显下调(P＜0.001,P＜0.05),而EMT特征蛋白E-cadherin的表达水平明显上调(P＜0.05).miR-375模拟物转染耐药细胞后,miR-375的表达水平明显升高(P＜0.001),vimentin表达水平明显上调(P＜0.01),而E-cadherin表达水平下调(P＜0.001),并且耐药细胞株对曲妥珠单抗的敏感性升高(P＜0.001).miR-375对MTDH基因转录具有负向调控作用(P＜0.001).MTDH siRNA转染后,耐药细胞中MTDH和E-cadherin表达水平均下调(P值均＜0.001),而vimentin表达水平上调(P＜0.001).结论:miR-375通过调控细胞EMT,参与了HER2阳性乳腺癌细胞对曲妥珠单抗的耐药;这一作用可能与靶向调控MTDH表达有关.
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miR-145、miR-375在乳腺浸润性导管癌中的表达及临床意义
目的 探讨miR-145、miR-375在乳腺浸润性导管癌患者中的表达情况,并做出相应的临床分析.方法 取经病理证实的乳腺浸润性导管癌患者的乳腺癌组织标本及其正常组织各41例,行荧光定量PCR检测其中miR-145、miR-375的表达量,结合临床资料,用SPSS软件分析其阳性表达对临床指导的意义.结果 乳腺癌患者乳腺癌组织中miR-145及miR-375表达明显低于正常组织(P＜0.01),miR-145在乳腺癌中的表达异常与病理分期、淋巴结转移、肿瘤大小相关(P＜0.01),miR-145的表达与ER、PR无明显相关性,而miR-375的表达与病理分期、肿瘤大小相关(P＜0.01),淋巴结转移、PR相关(P＜0.05),与ER无明显相关性.结论 miR-145、miR-375在乳腺癌患者中异常表达,癌组织中的表达低于正常组织,这可能是miR-375肿瘤发生过程中担任了抑癌基因的角色,一定程度上可以衡量肿瘤的恶性程度.
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糖尿病心肌病小鼠心肌成纤维细胞miR-375表达及其对胶原蛋白Ⅰ合成的影响
目的:探讨miR-375在糖尿病心肌病心肌纤维化发生发展过程中的作用机制.方法:原代培养小鼠(C57BL/6)心肌成纤维细胞,采用免疫组织化学染色法鉴定细胞纯度.将培养的第2～3代心肌成纤维细胞随机分成对照组和高糖组,高糖组在处理6,12,24 h后,采用实时定量PCR方法检测各组细胞中miR-375的差异性表达.miR-375抑制剂瞬时转染心肌成纤维细胞,实时定量PCR检测转染效率.免疫组织化学染色检测心肌成纤维细胞中Ⅰ型胶原蛋白的表达.结果:原代分离培养的第2代心肌成纤维细胞纯度可达90％；心肌成纤维细胞经高糖处理6,12,24 h后其miR-375的表达有增加趋势；抑制miR-375的表达后,高糖处理的心肌成纤维细胞内Ⅰ型胶原蛋白的表达显著降低.结论:miR-375可能在糖尿病心肌病心肌纤维化中发挥重要的作用.
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妊娠期糖尿病妇女外周血miR-29、miR-375的表达及临床意义
目的:探讨广东省汉族妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)患者外周血miR-29、miR-375的表达情况及临床意义.方法:选取2012年12月～2013年5月在武警广东省总队医院就诊的90例GDM患者和糖耐量正常的孕妇,分别作为GDM组和对照组,检测血浆空腹胰岛素(fast insulin,FINS)及其外周血miR-29、miR-375的表达情况.结果:①GDM组及对照组的FINS分别为(15.67±5.75)mIU/L和(26.23±10.89)mIU/L(P＜ 0.01);②GDM组外周血miR-29表达量(25.16±10.05)低于对照组(75.26±13.43)(P＜ 0.05);③GDM组外周血miR-375的表达量(65.18±22.08)显著高于对照组(21.31±9.56)(P＜0.05).结论:GDM患者中miR-29、miR-375的异常表达与GDM易感性有一定相关.
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miR-375在胰腺癌的表达及其临床意义
目的 探讨miR-375在胰腺癌的表达及其与临床病理特征的关系.方法 应用RT-PCR方法定量检测44例胰腺癌及其癌旁正常组织中miR-375.结果 胰腺癌组织中miR-375表达水平明显低于癌旁正常组织(P＜0.05)；miR-375在胰腺癌组织中的表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、分化程度均无相关性(P＞0.05),而与T分期、淋巴结转移、TNM分期密切相关(P＜0.01).结论 miR-375在胰腺癌中表达下调,可能与胰腺癌发生、发展及转移过程有关.
