首页 > 文献资料
-
大黄素通过逆转Notch信号通路抑制雄激素非依赖前列腺癌细胞PC3增殖和诱导凋亡研究
目的:研究大黄素(EM)对雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用,并探讨EM是否通过Notch信号通路达到抗肿瘤作用.方法:MTT比色法检测10、20、40、60、80μmol/L浓度EM作用于PC3细胞12、24、36、48、72、96h后细胞活性;24h后流式细胞仪测定细胞周期及凋亡的变化,透射电镜观察细胞超微结构变化;RT-PCR和Western Blot检测PC3细胞内Notch1、Jagged1、VEGF和bFGF mRNA和蛋白的表达;激光共聚焦显微镜免疫荧光分析法评价Notch1蛋白的表达水平和亚细胞定位分布.结果:EM能显著抑制PC3细胞的生长,呈剂量与时间依赖性,不同浓度EM组之间及不同时间组之间差异均有统计学意义(P＜0.01);PC3细胞出现有EM剂量依赖性G2/M期阻滞(P＜0.01),且各浓度组凋亡细胞比例均显著高于空白对照组(P＜0.01),差异有统计学意义;EM作用24h后PC3细胞出现凋亡形态学改变;PC3细胞内Notch1 mRNA和蛋白表达均上升,Jagged1、VEGF、bFGF mRNA和蛋白的表达呈剂量依赖性降低;激光共聚焦检测结果显示PC3细胞中Notch1不仅有胞膜、胞浆定位,胞核也有少量表达,随EM浓度升高胞核内表达增加.结论:EM能显著抑制PC3细胞的生长,促进凋亡;并促进其G2/M期阻滞;Notch1的表达和核易位激活引起VEGF、bFGF表达明显降低,可能是EM抑制前列腺癌细胞生长转移的机制之一.
-
1α,25(OH)2D3抑制前列腺癌机制研究进展
1α,25(OH)2D3是一种类固醇激素,在抑制前列腺癌发生和发展中具重要作用.1α,25(OH)2D3抑制前列腺癌涉及多方面的分子过程,包括G1/S细胞周期阻滞、促癌细胞凋亡、抗血管生成和阻止癌细胞迁移等.本文将从维生素D3合成代谢羟化酶表达调控、VDR基因多态性、雄激素及受体调控、抗炎因子表达调控、胰岛素样生长因子及相关结合蛋白表达调控等方面阐述了近年来1α,25(OH)2D3抑制前列腺癌分子机制的研究进展,为维生素D3预防和治疗前列腺癌的应用提供了参考.
-
左旋紫草素诱导人前列腺癌PC3细胞凋亡
目的 探讨左旋紫草素诱导雄激素非依赖型前列腺癌PC3细胞凋亡的作用及其可能机制.方法 实验分为对照组(只加DMSO)、不同浓度的左旋紫草素组(2、4、8、16、32 μmol/L),作用PC3细胞24 h后收集细胞,应用MTT法检测各组细胞生长抑制率并计算左旋紫草素半数有效抑制浓度IC50.8μmol/L左旋紫草素作用PC3细胞0、6、12、24、48、72 h后收集细胞,用MTT法计算各时间点细胞生长抑制率.PC3细胞加入8μmol/L的左旋紫草素,分别培养0、12、24、48 h后收集细胞,流式细胞仪检测各时间点细胞凋亡率.8μmol/L浓度的左旋紫草素作用PC3细胞0、6、12、24、48、72 h后收集细胞,荧光分光光度计检测caspases3的活性.将PC3细胞分为对照组(DMSO)、z-DEVD-fmk(caspase3抑制剂,20 μmol/L)、z-IETD-fmk(caspase9抑制剂,20 μmol/L)和z-LEHD-fmk(caspase8抑制剂,20 μmol/L)组,各组加入抑制剂1h后加入左旋紫草素,24 h后收集细胞,MTT法计算各组细胞生长抑制率.结果 左旋紫草素能抑制PC3细胞的增殖,作用24 h后随浓度的升高,细胞生长抑制率逐渐增加,IC50为(7.91 ±0.73) μmol/L.8μmol/L左旋紫草素作用PC3细胞0、6、12、24、48、72 h后,随着时间的延长,细胞生长抑制率逐渐升高.左旋紫草素8μmol/L作用12、24、48 h后,PC3细胞的凋亡率分别为(5.73±0.82)％、(19.15±1.14)％、(32.68±1.03)％,与0h时(0.98±0.34)％相比明显升高(均P＜0.05).左旋紫草素8 μmol/L作用PC3细胞后,caspase3活性6h时开始升高,在24 h达高峰,其后开始下降.caspase3、caspase9、caspase8抑制剂均可明显逆转左旋紫草素对PC3细胞增殖的抑制作用,与DMSO对照组比较,细胞生长抑制率由(50.63±0.99)％分别降至(25.30±0.58)％、(30.81±0.35)％、(39.64±1.19)％(均P＜0.05).结论 左旋紫草素能有效抑制PC3细胞的增殖,并诱导其凋亡,该作用可能通过激活caspase9线粒体通路为主.
关键词： 左旋紫草素 前列腺肿瘤 PC3细胞 细胞凋亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 -
20 kHz超声联合微泡诱导人前列腺癌PC3细胞的细胞自噬及早期凋亡
目的 探讨低频、低功率超声联合微泡造影剂诱导人雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞早期细胞凋亡及自噬.方法 以频率20 kHz、声功率80 mW超声连续波辐照人前列腺癌PC3细胞悬液60 s,之后分为单纯微泡组(A)、单纯超声组(B)、超声联合微泡组(C)、空白对照组(D),分别给予相应处理.辐照后继续培养24 h,以流式细胞仪检测细胞早期凋亡情况,吖啶橙染色荧光显微镜观察细胞胞浆内酸性囊泡,透射电镜观察细胞自噬泡.结果 4组细胞早期凋亡率差异有统计学意义(P＜0.01);两两比较,除A组与D组差异无统计学意义(P＞0.05)外,余差异均有统计学意义(P＜0.01).C组细胞核基本正常,胞浆内可见大量发红色荧光的酸性囊泡及大量由双层膜包裹的自噬泡或自噬体.D组细胞形态基本正常,胞浆内未见到明显自噬泡形成.结论 低频低功率超声联合微泡造影剂能明显提高人雄激素非依赖型前列腺癌PC3细胞的早期凋亡率,并可促进细胞自噬.
-
蟾蜍灵对前列腺癌PC3细胞增殖和凋亡的作用及其机制
目的 探讨蟾蜍灵对前列腺癌细胞PC3生长特性的影响及其机制.方法 采用不同浓度的蟾蜍灵作用于雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC3.四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测细胞增殖变化,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western杂交的方法检测细胞增殖和凋亡相关基因Bcl-2、Akt和P-Akt蛋白的表达.结果 蟾蜍灵对前列腺癌细胞PC3的生长抑制作用呈时间和剂量依赖关系,促进细胞凋亡,并且可以抑制增殖和凋亡相关基因Bcl-2和P-Akt的表达.结论 蟾蜍灵可以抑制前列腺癌细胞PC3的生长,促进细胞凋亡,通过Akt/Bcl-2途径发挥作用.
-
血管内皮生长因子反义寡核苷酸对体外及裸鼠体内前列腺癌细胞PC3生物学特性的影响
目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸对前列腺癌细胞PC3在体外和裸鼠体内生长特性的影响,并探讨局部注射反义寡核苷酸治疗裸鼠皮下移植肿瘤的疗效.方法 采用Oligofectamine携带VEGF反义寡核苷酸转染前列腺癌细胞PC3,实验分为反义寡核苷酸组、正义寡核苷酸组和对照组.软琼脂糖凝胶实验和细胞侵袭实验检测转染反义寡核苷酸的肿瘤细胞成瘤性和侵袭性.裸鼠成瘤实验观察VEGF反义寡核苷酸对体内PC3细胞增殖的影响.建立裸鼠前列腺癌种植瘤模型,局部注射VEGF反义寡核苷酸治疗,测定体内抑瘤率.结果 对照组、正义寡核苷酸组和反义寡核苷酸组的PC3细胞每组阳性克隆数分别为53.67±5.86、52.33±6.43和26.00±4.58( F=13.73,P＜ 0.01),反义寡核苷酸组体外形成克隆数显著减少；三组细胞侵袭至下室的细胞数分别为45.60±5.53、42.35±6.21和18.37±3.52( F=14.18,P＜ 0.01),反义寡核苷酸组细胞明显减少；转染VEGF反义寡核苷酸的细胞移植瘤生长较慢,接种28 d后三组的肿瘤体积分别为(1330.32±81.38 )mm3、( 1267.64±120.26 )mm3和( 641.83±58.34 )mm3(F=17.26,P＜ 0.01)；局部注射治疗4周后,三组肿瘤质量分别为(1.25±0.08)g、( 1.17 ±0.06)g和(0.41 ±0.05)g,与对照组比较,正义寡核苷酸组和反义寡核苷酸组肿瘤抑制率分别为6.4％和67.2％,差异有统计学意义(x2=17.72,P＜0.005).结论 VEGF反义寡核苷酸可以抑制前列腺癌细胞PC3 VEGF的表达,进而促进细胞凋亡,降低其成瘤性,抑制侵袭能力.转染VEGF反义寡核苷酸的前列腺癌细胞PC3移植瘤在裸鼠体内生长受抑制,局部注射反义寡核苷酸可显著抑制移植瘤的生长.
-
血管内皮生长因子反义寡核苷核对前列腺癌细胞PC3生长特性的影响
目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷核对前列腺癌细胞PC3生长特性的影响.方法 采用新型脂质体Oligofectamine携带VEGF反义寡核苷酸转染激素非依赖性前列腺癌细胞PC3,实验分为对照组、反义寡核苷核苷酸组和正义寡核苷酸组.Western Blot杂交的方法 检测细胞VEGF蛋白的表达,四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测细胞增殖变化,流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 新型脂质体可以携带VEGF反义寡核苷酸转染前列腺癌细胞PC3,与对照组和正义寡核苷酸组比较,反义寡核苷酸组细胞VEGF蛋白的表达明显下降,增殖受到明显抑制,凋亡率增加.结论 新型脂质体Oligofectamine可以携带VEGF反义寡核苷酸成功转染前列腺癌细胞PC3,抑制VEGF的表达,进而抑制肿瘤细胞的增殖,促进其凋亡.
-
低剂量双酚A及邻苯二甲酸二乙基己酯对PC3细胞增殖的影响
目的:探讨低剂量环境内分泌干扰物双酚A(Bisphenol A,BPA)和邻苯二甲酸二乙基己酯(Di-2-ethylhexylPhthalate,DEHP)对PC3细胞增殖的影响.方法:PC3细胞用含10%胎牛血清的F12培养基培养,将处于对数生长期的细胞制成104/ml的细胞悬液,按100μl/孔容积加入96孔板,24 h后分别加入BPA、DEHP、雌二醇(Estradiol,E2)和双氢睾酮(Dihydrotestosterone,DHT)10μl/孔,终浓度为0、0.0001、0.001、0.01、0.1、1、10、100、1 000、10 000、100 000 nM,每个剂量设3个复孔,重复2次,24 h后加入CCK8 10μl/孔,37℃孵育4 h后450 nm处检测吸光度;然后在培养液中加入终浓度为0.1 μM/ml的他莫昔芬(Tamoxifen,Tam)拮抗雌激素受体(Estradiol Receptor,ER)的作用,用能明显促进细胞增殖的0.01、0.1、1、10、100 nM剂量,再次对PC3细胞进行染毒,同样方法检测4种物质作用PC3后的吸光度.结果:10 nM和100 nM的BPA,0.01 nM、0.1 nM和10nM的E2,0.01、0.1、1、10、100、1000、10 000、100 000 nM的DEHP均有促进PC3细胞增殖的作用,而DHT却无这种影响,用TAM封闭ER功能后,0.1、1、10、100nM的BPA、DEHP、E2、DHT均有促进PC3增殖的效果.结论:低剂量环境内分泌干扰物BPA和DEHP可促进PC3细胞增殖,作用机制与E2相似;而当ER被封闭后,DHT却呈现出促细胞增殖作用.
关键词： 双酚A 邻苯二甲酸二乙基己酯 PC3细胞 细胞增殖 -
小檗碱诱导体外培养PC3细胞凋亡的作用
目的 观察小檗碱对体外培养人前列腺癌PC3细胞凋亡的作用.方法 体外培养前列腺癌PC3细胞,分别用10、20和40 μmol/L小檗碱处理细胞后,采用MTT法检测其对细胞增殖的影响,20 μmol/L小檗碱处理细胞后流式细胞术检测细胞周期,吖啶橙染色法检测细胞凋亡情况,并通过Western印迹法检测Bcl-xL及前列腺特异性抗原(PSA)蛋白表达.结果 小檗碱处理后,PC3细胞出现增殖抑制,细胞周期停滞于G2/M期,吖啶橙染色呈黄染,PSA及Bcl-xL蛋白表达明显下调.结论 小檗碱可诱导人前列腺癌PC3细胞凋亡,其作用机制可能与Bcl家族信号通路有关.
-
天花粉蛋白通过下调p－ERK及Cyclin D1表达抑制PC3细胞增殖
目的：探讨天花粉蛋白（TCS）体外对前列腺癌细胞（PC3）生长的抑制作用及可能机制。方法采用噻唑蓝（MTT）检测TCS对PC3细胞的抑制作用。流式细胞术（ FCM）检测TCS对PC3细胞周期的影响，Western印迹检测TCS对ERK、p－ERK及细胞周期调节蛋白Cyclin D1表达的影响。结果 MTT 结果显示 TCS 能有效抑制 PC3细胞的生长，具有时间及剂量依赖性。流式细胞检测发现 TCS能够将 PC3细胞阻滞于 G1期， Western 印迹检测TCS能抑制ERK磷酸化及细胞周期调节蛋白Cyclin D1的表达。结论 TCS对PC3细胞的增殖具有明显的抑制作用，其作用机制可能与抑制丝裂原活化蛋白激酶（ MAPK）细胞增殖信号通路及降低Cyclin D1表达，从而诱导细胞发生G1期阻滞有关。
-
20(s)-原人参二醇对体外培养的人前列腺癌PC3细胞凋亡的诱导作用及其机制
目的:观察20 (s)-原人参二醇(PPD)对体外培养的人前列腺癌(PCa) PC3细胞凋亡的作用,阐明其抗肿瘤作用机制.方法:将体外培养的PC3细胞分为对照组及20、30和40 μmol·L1 PPD组.采用PPD处理细胞48 h后,利用光学显微镜观察细胞形态学改变,MTT法检测细胞增殖抑制情况,采用吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)染色法检测细胞凋亡情况,并通过Western blotting方法检测Bcl-2、Bax和γH2Ax蛋白的表达情况.结果:不同剂量PPD处理后,PC3细胞变圆回缩并出现碎片,AO/EB染色呈现不同程度的黄绿色;不同剂量PPD作用后,各组细胞增殖抑制率均显著升高,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);不同剂量PPD作用PC3细胞48 h后,Bcl-2蛋白表达明显下调(P＜0.05),Bax蛋白表达变化不明显,γH2Ax蛋白表达上调(P＜0.05).结论:PPD可诱导PC3细胞凋亡,其作用机制可能与Bcl-2、Bax信号通路以及DNA断裂基因γH2Ax蛋白表达上调有关.
关键词： 20(S)-原人参二醇 前列腺肿瘤 PC3细胞 细胞凋亡 -
紫杉醇联合姜黄素对人前列腺癌PC3细胞侵袭和老化的影响
目的:选用姜黄素与紫杉醇联合作用于前列腺癌PC3细胞株,从细胞水平观察姜黄素和紫杉醇合用对癌细胞增殖、侵袭和老化的影响,以进一步寻找综合治疗前列腺癌的有效措施.方法:低剂量姜黄素和紫杉醇作用于PC3细胞,用CCK-8、β-半乳糖苷染色、划痕侵袭实验等方法从细胞增殖、侵袭和老化等方面观察对PC3的影响.结果:姜黄素联合紫杉醇可协同降低PC3细胞增殖活性(P＜0.01);划痕实验显示,姜黄素和紫杉醇合用可降低细胞的侵袭浸润能力;低浓度的姜黄素还可促使PC3细胞老化.结论:在细胞水平,紫杉醇联合姜黄素可协同降低PC3细胞增殖分化活性,减弱肿瘤细胞的侵袭浸润能力.
-
度他雄胺对人前列腺癌PC-3细胞移植裸鼠成瘤预防效应与机制研究
目的：探讨新型5α还原酶抑制剂--度他雄胺对人前列腺癌PC-3细胞裸鼠移植瘤的成瘤预防效应与机制。方法选取BALB/C裸鼠30只，随机平均分为度他雄胺组、非那雄胺对照组和阴性对照组，均采用皮下注射人前列腺癌PC-3细胞建立移植瘤模型，同时度他雄胺组裸鼠每日腹腔注射度他雄胺含药血清，非那雄胺组每日腹腔注射非那雄胺含药血清，阴性对照组每日腹腔注射非含药血清。给药30d内，观察实验期间各组动物移植瘤生长曲线，移植瘤倍增时间，成瘤百分率。30d后处死动物，免疫组化法结合图像分析各组裸鼠瘤体ECM降解程度， RT-PCR法检测细胞外基质-整合素（ECM-integrin）跨膜信号通路关键蛋白integrinβ1，β2和β6的表达情况。结果实验期间各组裸鼠移植瘤成瘤率均为100%，移植瘤生长曲线近似，与阴性对照组相比，度他雄胺和非那雄胺组移植瘤成瘤平均潜伏期延长（P＜0.05），度他雄胺组肿瘤倍增时间比阴性对照组和非那雄胺组延长，差异具均统计学意义（P ＜0.05）。免疫组化检测度他雄胺组和非那雄胺组瘤体ECM较阴性对照组明显降解，表现为纤维链接蛋白（FN）和胶原（CL）表达明显降低（P ＜0.01或P ＜0.05），基质金属蛋白酶-2（MMP-2）表达明显增强（P ＜0.01或P ＜0.05）；RT-PCR法检测度他雄胺组瘤体细胞integrinβ1和β6表达较阴性对照组明显降低（P ＜0.01或P ＜0.05），integrinβ1表达较非那雄胺组降低（P＜0.05），结论度他雄胺能通过降解人前列腺PC-3细胞裸鼠抑制瘤ECM，降低integrinβ1和β6表达，从而抑制决定前列腺癌细胞生长、增殖和转移的关键信号通路-ECM-integrin信号通路，从而延长移植瘤成瘤和倍增时间，但不能有效抑制成瘤率，因此尚不能明确其具有预防前列腺癌的作用，同时也说明前列腺癌形成和生长机制具有多重复杂性。
-
E2F1对TFDP3表达的调控及其对前列腺癌PC3细胞凋亡的影响
目的:构建含TFDP3基因启动子和荧光素酶报告基因的重组载体pGL3-TFDP3-promoter,观察E2F1对TFDP3转录及表达的调控作用以及TFDP3对E2F1诱导肿瘤细胞凋亡的影响.方法:以人前列腺癌PC3细胞系基因组DNA为模板,PCR扩增TFDP3启动子序列并克隆入荧光素酶报告基因载体,与E2F1表达载体pCMV-E2F1-HA瞬时单独或共同转染PC3细胞,测定荧光素酶活性以观察E2F1对TFDP3启动子的调控作用,Western blotting检测pCMV-E2F1-HA转染对PC3细胞内TFDP3表达的影响,流式细胞术检测TFDP3与E2F1相互作用对前列腺癌细胞凋亡的影响.结果:成功构建TFDP3基因启动子重组质粒pGL3-TFDP3-promoter,与E2F1表达载体pCMV-E2F1-HA共转染PC3细胞后,TFDP3启动子诱导的荧光素酶活性较单独转染pGL3-TFDP3-promoter显著升高[(1.14 ±0.06)vs(0.61 ±0.05),P＜0.05].转染pCMV-E2F1-HA的PC3细胞的TFDP3蛋白表达是未转染细胞的2.7倍[(0.24 ±0.03)vs(0.09 ±0.02),P＜0.05].pCMV-E2F1-HA转染后PC3细胞凋亡率较未转染组显著上升[(7.10±0.003)％ vs(2.66±0.001)％,P＜0.05],而pCMV-E2F1-HA与pcDNA3.1-TFDP3共转染后细胞凋亡率较pCMV-E2F1-HA组显著下降[(4.92±0.002)％ vs(7.10±0.003)％,P＜0.05].结论:E2F1可增强TFDP3启动子的活性,增加TFDP3蛋白的表达,其可能通过此机制抑制E2F1诱导的前列腺癌细胞凋亡.
-
端粒酶hTERT基因反义核酸对TNF-α诱导前列腺癌PC3细胞凋亡的影响
目的:探讨hTERT基因的两端部分硫代修饰反义寡核苷酸(AS PS-ODN)抑制前列腺癌细胞PC3端粒酶活性后,肿瘤坏死因子α(TNF-α)对PC3凋亡的增敏作用.方法:采用端粒重复序列扩增法及TRAP-PCR-ELISA法检测前列腺癌细胞的端粒酶活性;采用MTF比色试验观察hTERT AS PS-ODN与TNF-α共同作用对前列腺癌细胞PC3生长活力的影响;倒置显微镜观察凋亡细胞的形态变化;通过流式细胞仪测定凋亡细胞的百分率.结果:hTERT AS PS-ODN作用于PC3细胞48 h,其端粒酶活性下降,作用72 h,其端粒酶活性受到抑制,与正义寡核苷酸组及空白对照组相比差异有显著性(P＜0.05).hTERT AS PS-ODN作用于PC3细胞后加入TNF-α作用48 h,PC3细胞的抑制率与对照组、S PS-ODN组、AS PS-ODN组、TNF-α组及S PS-ODN+TNF-α组相比有统计学差异(P＜0.01).hTERT AS PS-ODN作用于PC3细胞后加入TNF-α作用48 h,细胞出现典型的凋亡形态变化.hTERT ASPS-ODN作用于PC3细胞后加入4μg/ml TNF-α作用48 h,凋亡细胞的百分率分别与对照组、S PS-ODN组、AS PS-ODN组、TNF-α组及S PS-ODN+TNF-α组相比差异有显著性(P＜0.05).结论:hTERT AS PS-ODN能降低前列腺癌细胞PC3端粒酶活性;hTERT基因反义核酸对TNF-α诱导前列腺癌细胞PC3凋亡有增敏作用.
-
血管扩张刺激磷蛋白的表达与前列腺癌转移的关系
目的:研究血管扩张刺激磷蛋白(VASP)与前列腺癌侵袭转移及预后的关系. 方法:将VASP shRNA慢病毒和对照shRNA慢病毒分别感染前列腺癌PC3细胞,采用跨膜迁移实验检测PC3细胞的侵袭能力;采用免疫组化法检测56例前列腺癌患者癌组织中VASP的表达,并根据VASP表达差异及患者前列腺癌根治术后随访结果进行生存分析比较. 结果:与shRNA慢病毒对照组及空白对照组相比,VASP shRNA慢病毒可抑制前列腺癌PC3细胞VASP的表达,并且显著降低PC3细胞的侵袭能力(P＜0.05);对56例前列腺癌患者的生存分析表明,与VASP阴性表达组相比,VASP阳性表达组及VASP强阳性表达组患者生化复发时间显著缩短(P＜0.05),后两者之间比较差异无统计学意义(P＞0.05). 结论:VASP参与调控前列腺癌PC3细胞的侵袭能力;VASP蛋白表达差异与前列腺癌患者的预后相关.
-
FZD5在小鼠前列腺癌骨转移中的作用机制研究
目的:探讨FZD5基因在前列腺癌骨转移中的作用机制,寻找前列腺癌骨转移的新的治疗方法.方法:检测前列腺癌PC3细胞内FZD5基因表达水平.将siRNA转染入PC3细胞后使FZD5基因沉默,继而观察PC3细胞迁移、增殖的变化.在此基础上通过小鼠胫骨注射建立前列腺癌骨转移模型,之后每周在胫骨腔内注射对照siRNA或FZD5基因沉默siRNA,于0、1和3周拍X平片观察肿瘤骨破坏,在3周后取材,行HE染色观察肿瘤骨破坏情况. 结果:将FZD5基因沉默siRNA转染入前列腺癌PC3细胞后,细胞内FZD5基因表达量下降约70％.基因沉默组细胞增殖显著低于对照组(P＜0.05).FZD5基因沉默48 h后,细胞迁移能力较对照组下降了30％ (P ＜0.05).小鼠模型胫骨腔内注射对照siRNA或沉默siRNA 3周时,对照组和实验组均可见溶骨性破坏,但FZD5基因沉默组破坏相对较少,仍可见部分残留骨小梁. 结论:通过抑制FZD5基因,可减少前列腺癌细胞的迁移和增殖,可能辅助减少前列腺癌患者的骨转移及骨破坏,从而提高患者的生存率及生活质量.其从分子生物学的角度为前列腺癌的发病机制以及治疗方法提供了新的思路.
-
喹啉衍生物PQ1联合顺铂对前列腺癌PC3细胞的增殖及细胞缝隙连接通讯的影响
目的:探讨喹啉衍生物PQ1联合顺铂对前列腺癌PC3细胞的增殖及细胞缝隙连接通讯的影响.方法:体外培养前列腺癌PC3细胞,对比空白对照组、10 mg/ml顺铂对照组及顺铂联合不同浓度(1、2、5、10、15 μmol/L)喹啉衍生物PQ1各组PC3细胞增殖情况,通过RT-PCR法及Western印迹法检测各组间细胞缝隙连接相关蛋白Cx43 mRNA及蛋白表达情况. 结果:喹啉衍生物PQ1浓度在1～10 μmol/L联合顺铂能明显抑制PC3细胞的体外增殖,随浓度、时间的增加,抑制率相应升高.不同浓度联合药物处理PC3细胞后,Cx43 mRNA及蛋白表达也有不同程度升高. 结论:喹啉衍生物可以通过上调前列腺癌PC3细胞间缝隙连接相关蛋白Cx43 mRNA及蛋白的表达水平来促进前列腺癌PC3细胞的细胞间缝隙连接功能,增强顺铂对前列腺癌PC3细胞的杀伤作用.
-
miR-124通过靶向调控PKM2基因的表达抑制前列腺癌PC3细胞的增殖
目的:探讨miR-124抑制前列腺癌PC3细胞增殖活性的机制. 方法:利用荧光素酶报告基因验证miR-124能否靶向作用于丙酮酸激酶M2型(PKM2)3端非编码区(UTR).将miR-124 mimic转染至PC3细胞后,采用实时荧光定量PCR和Western印迹检测前列腺癌PC3细胞PKM2 mRNA和蛋白的表达水平,MTT法检测miR-124 mimic与PKM2 siRNA对PC3细胞生长活性的影响. 结果:与人前列腺上皮细胞RWPE-1比较,PC3细胞中PKM2 mRNA和蛋白水平表达分别上调(5.12 ±-0.35)倍和(4.05±0.20)倍(P＜0.05).荧光素酶报告基因结果证实,PKM2是miR-124调控的靶基因,miR-124可特异性地结合于PKM2 mRNA的3'-UTR.转染miR-124 mimic 24 h后,PKM2蛋白水平下调至阴性对照组(0.16±0.04)倍(P＜0.05),但对PKM2 mRNA表达无显著影响(P＞0.05).MTT结果显示,转染miR-124 mimic和PKM2 siRNA都能显著抑制PC3细胞的增殖,但miR-124 mimic对PC3细胞生长活性的抑制能力较PKM2 siRNA强.转染miR-124 mimic和PKM2 siRNA 24 h和48 h后,PC3细胞的增殖率分别为(66.20±5.10)％和(82.10 ±6.35)％(P＜0.05)、(49.34±2.37)％和(70.10 ±5.80)％ (P ＜0.05). 结论:miR-124可通过靶向调控PKM2基因的表达而抑制前列腺癌PC3细胞的增殖.
-
前列腺癌中netrin-1/UNC5B的表达及临床意义
目的:通过比较不同侵袭能力的前列腺癌细胞netrin-1/UNC5B表达量的差异,为前列腺癌寻找新的生物标志物及治疗手段. 方法:选取前列腺癌细胞系DU145、22RV1、PC3、PC3M、RWPE-1,通过RT-PCR、Western 印迹检测netrin-1/UNC5B的表达及其差异,并通过免疫荧光检测配体netrin-1及其受体UNC5B在前列腺癌细胞中的定位. 结果:netrin-1/UNC5B在前列腺癌细胞中均表达,侵袭能力强的前列腺癌细胞中netrin-1表达量明显增多(P＜0.05),而UNC5B在RWPE-1(正常细胞)中表达量明显增多(P＜0.05). 结论:netrin-1/UNC5B表达量与前列腺癌的浸润及进展程度紧密关联,有望作为一种潜在的生物标志物来预测前列腺癌的恶性程度.
