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大承气汤对心脏骤停后综合征兔心肺组织蛋白酶激活受体1活性的抑制作用
目的:探讨大承气汤对心脏骤停后综合征(PCAS)兔心、肺组织蛋白酶激活受体1(PAR-1)激活的影响.方法:采用窒息性心脏骤停制备兔PCAS模型,复苏成功兔随机分为PCAS组、大承气汤组,另选5只健康兔作为正常对照组.在ROSC后15 min,大承气汤组给予大承气汤15 g/(kg·d)灌胃.48 h取动物血液检测,后处死动物,取心肺组织,采用Western blot测定PAR-1蛋白含量.结果:PCAS组兔心肺组织中PAR-1蛋白含量降低(均P＜0.01).大承气汤组心肺组织中PAR-1蛋白含量较PCAS组升高(P＜0.05).结论:PCAS发生时,心肺组织存在PAR-1过度激活,大承气汤对PCAS兔PARI激活有抑制作用.
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大鼠脑出血后血肿周围蛋白酶激活受体-1的表达及其机制
目的 探讨脑出血后血肿周围蛋白酶激活受体-1(PAR-1)表达的情况及其与凝血酶的关系.方法 胶原酶Ⅶ型、凝血酶(TM)、水蛭素分别脑内立体定向注射制作动物模型,应用RT-PCR技术检测PAR-1 mRNA表达,应用免疫组织化学技术检测PAR-1蛋白表达.结果 脑出血后6 h PAR-1mRNA及蛋白表达分别为0.802±0.143和19.65±1.12,与对照组比较明显增加(P＜0.05),24 h分别为1.825±0.214和33.34±1.09(P＜0.01),持续至72 h(P＜0.01),然后逐渐减少,96 h时已恢复正常.凝血酶脑内注射后PAR-1 mRNA及蛋白表达的动态变化趋势与脑出血组相似,凝血酶组PAR-1 mRNA及蛋白表达在各个时间点与脑出血组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).水蛭素组PAR-1 mRNA及蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 脑出血后血肿周围PAR-1 mRNA和蛋白表达明显增加,可能是凝血酶直接作用的结果.PAR-1表达上调可能参与了脑出血后凝血酶神经毒性损伤过程.
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凝血酶大鼠脑内注射ICAM-1mRNA表达和MPO活性的影响
目的 探讨大鼠脑内注射凝血酶(Thrombin,TM)对细胞间粘附分子-1(Intracellular adhension molecule-1,ICAM-1)mRNA表达及白细胞浸润的影响及其可能机制TM、TM+组织蛋白酶G(CathepsinG,CATG)脑内立体定向注射于SD大鼠尾状核,在不同的时间点处死动物,RT-PCR技术检测ICAM-1mRNA表达,通过测定髓过氧化物酶(MPO)活性来检测中性粒细胞的浸润情况.结果 凝血酶脑内注射后24 h ICAM-1mRNA表达开始增加(P＜0.05),48 h达高峰(P＜0.01),然后逐渐下降.MPO活性动态变化趋势与ICAM-1mRNA相似.CATG组ICAM-1mRNA及MPO活性与对照组比较差异均无显著性(P＞0.05).结论 TM通过蛋白酶激活受体-1(protease activated receptor-1,PAR-1)诱导ICAM-1mRNA,促进白细胞浸润.
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凝血酶大鼠脑内注射对NF-κB活性的影响
目的 探讨大鼠脑内注射凝血酶(Thrombin,TM)对核因子(Nuclear factor-kappaB,NF-κB)活性的影响及其可能机制.方法 TM、TM+组织蛋白酶G(Cathepsin G,CATG)脑内立体定向注射于SD大鼠尾状核,在不同的时间点处死动物,应用EMSA技术测定NF-κB活性.结果 凝血酶脑内注射后6 h NF-κB活性开始增加(P＜0.05),24 h时达高峰(P＜0.01),然后逐渐下降.CATG组NF-κB活性与对照组比较差异均无显著性(P＞0.05).结论 TM通过蛋白酶激活受体-1(protease activated receptor-1,PAR-1)激活NF-κB,诱导炎症反应.
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大脑中动脉缺血再灌注大鼠脑组织PAR-1表达与炎症反应的关系
目的:研究脑缺血再灌注(CIR)后脑组织中蛋白酶激活受体-1(PAR-1)的表达及其与炎症反应的关系. 方法:40只雄性SD大鼠线栓法建立大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,再灌注后于3 、6 、12 h及1 、2 、3 、7 d取脑,免疫组化法和脑组织匀浆法检测PAR-1、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量. 结果:缺血再灌注后脑组织PAR-1表达增加(P＜0.01),MDA含量增多(P＜0.01),SOD活性降低(P＜0.01);PAR-1表达与MDA含量正相关(r1=0.844,P＜0.05),与SOD含量负相关(r2=-0.901,P＜0.01). 结论:CIR后PAR-1表达增多可加重脑组织炎性反应.
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凝血酶预处理对海马神经元的保护作用
目的:研究凝血酶预处理(TPC)对大剂量凝血酶(TM)诱导海马神经元凋亡的影响,阐明TPC的保护作用.方法:海马神经元分别经生理盐水(Sham组)、小剂量TM(TPC组)及凝血酶受体激活肽(TRAP组)预处理48 h后再加大剂量TM作用24 h.TUNEL法及流式细胞术检测凋亡细胞数和凋亡百分率,应用免疫细胞化学方法检测神经元Bcl-2及Bax蛋白表达.结果:与Sham组比较,TPC组TUNEL阳性细胞数和凋亡百分率明显降低(P＜0.01),Bcl-2表达上调,Bax表达明显下调(P＜0.01).与Sham组比较,TRAP预处理组TUNEL阳性细胞数和凋亡百分率明显降低(P＜0.01),Bcl-2表达上调,Bax表达明显下调(P＜0.01).TRAP预处理组与TPC组相比差异无显著性(P＞0.05).结论:TPC可抑制TM导致的神经细胞凋亡,激活PAR-1,促进Bcl-2的表达和降低Bax的表达,可能是TPC抑制细胞凋亡的机制之一.
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凝血酶对血脑屏障通透性的影响及细胞凋亡机制的研究
目的 探讨凝血酶(thrombin,TM)对血脑屏障(blood brain barrier,BBB)通透性的影响和细胞凋亡(Apoptosis)的可能机制.方法 108只SD大鼠随机分为A、B、C 3组,分别向大鼠右侧基底节区注入凝血酶、凝血酶加组织蛋白酶G(Cathepsin G,CATG)、生理盐水,于注射后6、24、48和72 h取脑组织,测定BBB通透性(Evans-blue法)、脑水含量(干湿重法)以及Caspase-3蛋白表达(Western-blot).结果 TM脑内注射后6 h同侧基底节区BBB通透性明显增加(P＜0.05),24 h时达高峰(P＜0.01),持续至48 h(P＜0.05),然后逐渐消退;脑水含量的变化规律与BBB通透性的变化类似.TM脑内注射后6 h Caspase-3蛋白开始增加(P＜0.01),24 h达高峰(P＜0.01),然后逐渐下降.TM+CATG组在各个时间点BBB通透性、脑水含量和Caspase-3蛋白表达与对照组比较均无明显差异(P＞0.05).结论 TM增加BBB通透性是其诱发脑水肿形成的主要机制.TM对BBB通透性的影响可能是通过激活蛋白酶激活受体-1(protease activated receptor-1,PAR-1)实现的;凝血酶可能通过激活PAR-1受体诱导凋亡.
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大鼠脑出血后脑组织蛋白酶连接素-1、凝血酶和蛋白酶激活受体-1表达变化的实验研究
目的 研究大鼠实验性脑出血后脑组织内蛋白酶连接素-1(PN-1)、凝血酶及蛋白酶激活受体-1(PAR-1)的表达及变化规律. 方法采用自体血注入法制备大鼠脑出血模型,Westernblot方法检测假手术组及脑出m模型组不同时程(3 h、6 h、10 h、12 h、24 h、48 h、120 h)PN-1、凝血酶和PAR-1蛋白的表达水平. 结果假手术组可以检测到少量PN-1、凝血酶和PAR-1蛋白的表达;PN-1于脑出血后3 h开始增加,此后持续上升,10 h达高峰,后逐渐回降;凝血酶于脑出血后12h显著增加,48 h达高峰;PAR-1于脑出血后3 h即显著增加,48 h达高峰,120 h仍处于较高水平.脑出血后各时间点PN-1、凝血酶和PAR-1蛋白的表达量与假手术组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05).PN-1与PAR-1在脑出血后10h时呈负相关(r=-0.900,P<0.05),PN-1与凝血酶在脑出血后12h、120h时呈负相关(r=-0.900,P<0.05:r=-0.895,P<0.05). 结论脑出血后增多的凝血酶通过不断激活PAR-1从而介导了脑出血后的神经损伤过程,与此同时凝血酶抑制剂PN-1也大量表达,一定程度上抑制凝血酶过表达所引起的毒性效应:脑出血后三种蛋白的表达增加可能与脑出血后神经损伤的发病机制有关.
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凝血酶大鼠脑内注射对核因子-κB活性及细胞间黏附因子-1 mRNA表达的影响
目的 探讨凝血酶(TM)大鼠脑内注射对核因子-κB(NF-κB)活性、细胞间黏附分子-1 (ICAM-1) mRNA表达及白细胞浸润的影响及其可能机制.方法 TM、TM+组织蛋白酶G(CATG)、TM+N-乙酰半胱氨酸(NAC)脑内立体定向注射制作动物模型,在不同的时间点处死动物,应用EMSA技术检测NF-κB活性,RT-PCR技术检测ICAM-1 mRNA表达,测定髓过氧化物酶(MPO)活性来检测中性粒白细胞的浸润情况.结果 TM脑内注射后6 hNF-κB活性开始增加(P＜0.05),24 h时达高峰(P＜0.01),然后逐渐下降.TM脑内注射后24 hICAM-1 mRNA表达开始增加(P＜0.01),48 h达高峰(P＜0.01),然后逐渐下降.MPO活性动态变化趋势与ICAM-1 mRNA相似.TM+NAC组ICAM-1 mRNA及MPO活性与对照组比较差异均无显著性(P＞0.05).TM+CATG组NF-κB活性、ICAM-1 mRNA表达及MPO活性与对照组比较差异均无显著性(P＞0.05). 结论 TM通过蛋白酶激活受体-1(PAR-1)激活NF-κB,诱导ICAM-1 mRNA表达,促进白细胞浸润.
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内毒素致大鼠急性肺损伤后蛋白酶激活受体-1、肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-6的表达
目的 探讨内毒素(LPS)致大鼠急性肺损伤(ALI)后蛋白酶激活受体-1(PAR-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的表达.方法 成年SD雄性大鼠60只,随机分为6组,即LPS后0.5h、1h、2h、4h、8h组及对照组(n=10),LPS各组腹腔注射LPS 8 mg/kg,建立LPS致ALI模型,对照组腹腔注射等量生理盐水.分别应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测PAR-1 mRNA的表达,HE染色光镜下观察肺组织病理变化,比较肺内水含量的变化,酶联免疫吸附(ELISA)检测炎性因子TNF-α和IL-6的表达变化.结果 在LPS导致的ALI中,对照组PAR-1 mRNA的表达水平为5.29±0.95;LPS后0.5h组PAR-1 mRNA的表达水平为9.23±0.12,与对照组相比表达增加达74.5％ (P ＜0.05),LPS后8h组的PAR-1 mRNA表达水平高(16.61±0.13),其表达水平随损伤时间的延长而逐渐升高(P＜0.05);LPS各组肺泡结构出现不同程度的破坏,泡腔内炎性细胞浸润明显,同时伴有红染渗出物;肺泡间质增厚,炎性细胞浸润出血,以注射LPS后8h为明显(P＜0.05);LPS各组随着损伤时间的延长,与对照组相比肺组织匀浆中TNF-α、IL-6含量升高,LPS后8h组的TNF-α升高达46.3％、IL-6升高达229.4％(P＜0.05).结论 LPS致大鼠ALI后,肺水含量增加,PAR-1、TNF-α、IL-6的表达水平均上调,其可能与肺损伤的加剧相关.
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钙通道激动剂BayK8644对急性肺损伤大鼠PAR－1表达的影响
目的：探讨内毒素所致急性肺损伤后大鼠蛋白酶激活受体－1（ PAR－1）的动态表达及钙通道激动剂BayK8644的干预作用。方法将80只大鼠随机分为10组（ n＝8），即正常组、内毒素所致肺损伤0.5 h、1 h、2h和4h组和激动剂干扰后对照组，肺损伤0.5h、1h、2h和4h组。用内毒素制备大鼠急性肺损伤模型。免疫组化方法测定各时间点大鼠肺组织PAR－1蛋白的表达；RT－PCR检测PAR－1 mRNA的表达。结果正常组大鼠可见少量PAR－1 mRNA表达，模型组大鼠内毒素所致肺损伤后PAR－1 mRNA表达随损伤时间的延长而增加（P＜0.01）。经钙通道激动剂BayK8644干预后，内毒素所致肺损伤各时间组内PAR－1 mRNA的表达均有不同程度的下降（P＜0.05），但PAR－1 mRNA的表达在钙通道激动剂BayK8644干预组内仍随着损伤时间的延长而增加（ P＜0.05）。结论在内毒素致肺损伤的4 h内，早期有针对性地使用钙通道激动剂BayK8644可增加钙离子内流，有一定的肺保护作用。
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脑内注射凝血酶对大脑细胞凋亡的影响
目的 探讨脑内注射凝血酶(thrombin,TM)对周围组织Caspase-3蛋白表达和细胞凋亡机制的影响.方法 24只SD大鼠随机分为A,B,C 3组,A组在大鼠右侧基底节区注入凝血酶(TM),B组注入TM+组织蛋白酶G(cathepsin C,CATG),分别于注射后6,24,48,72,96h时间点处死,C组注入生理盐水.取脑组织应用Westernblot技术检测Caspase-3蛋白表达.结果 TM脑内注射后6 h Caspase-3蛋白开始增加(P＜0.01),24h达高峰(P＜0.01),然后逐渐下降.TM+CATG脑内注射后Caspase-3蛋白表达与对照组比较差异均无显著性(P＞0.05).结论 TM脑内注射后Caspase-3蛋白表达明显增加,TM通过蛋白酶激活受体-1激活(PAR-1)激活Caspase-3,诱导细胞凋亡.
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大鼠脑出血后蛋白酶激活受体-1与细胞凋亡关系的实验研究
目的：研究大鼠脑出血（IC H ）后血肿周围蛋白酶激活受体-1（PA R-1）、神经细胞凋亡等的表达。方法将60只SD大鼠分为假手术组和ICH组，采用立体定位仪定位注射自体不凝血制造大鼠ICH模型，分别于术后6h、1d、2d、3d、5d、7d处死，免疫组织化学法检测血肿周围PAR-1、TUNEL阳性细胞（凋亡细胞）数及小胶质细胞的表达。结果假手术组 PAR-1少量表达，偶见凋亡细胞；ICH组自6 h起PAR-1、凋亡细胞及小胶质细胞数量大量增加，3 d达高峰，PAR-1在7 d基本降至假手术组水平，但凋亡细胞、小胶质细胞仍处于较高水平，与假手术组比较差异有统计学意义（P＜0．05）。结论 ICH后血肿周围存在大量PAR-1表达上调、神经细胞凋亡、小胶质细胞增加。
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PAR-1激活对小鼠内皮祖细胞CXCR4 mRNA 表达及细胞增殖与迁移的影响
目的：研究蛋白酶激活受体-1（PAR-1）活化后对小鼠内皮祖细胞（EPCs） CXC型趋化因子受体4（CXCR4） mRNA表达及细胞增殖、迁移的影响。方法分离鉴定小鼠 EPCs ，分别以不同浓度 PAR-1激活剂SFLLRN加入培养的EPCs中，以PAR-1小干扰RNA（siRNA）转染EPCs ，并设立空白对照组。采用荧光定量实时聚合酶链反应（RT-PCR）分析各组细胞PAR-1、CXCR4 mRNA表达；MTT法检测各组EPCs增殖情况；Transwell小室共培养分析各组EPCs的迁移能力。结果 SFLLRN激活组EPCs增殖率、迁移率及PAR-1、CXCR4 mRNA表达均较空白对照组、PAR-1特异siRNA转染组增高，差异有统计学意义（ P＜0．05）。CXCR4 mRNA与PAR-1 mRNA表达呈明显正相关（r＝0．991）。结论 PAR-1可能通过促使CXCR4的表达增加，从而促进EPCs的增殖和迁移。
关键词： 内皮祖细胞 蛋白酶激活受体-1 CXC型趋化因子受体4 细胞增殖 迁移 -
蛭龙活血通瘀胶囊对脑出血大鼠神经细胞凋亡与HIF-1α PAR-1蛋白表达的作用研究
目的:通过观察大鼠脑出血后神经细胞凋亡与缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、蛋白酶激活受体-1 (PAR-1)表达的动态变化及蛭龙活血通瘀胶囊的干预作用,探讨蛭龙活血通瘀胶囊可能的脑保护作用.方法:将大鼠随机分为假手术组、模型组、蛭龙活血通瘀胶囊低、中、高剂量组.采用自体血注入法制备脑出血大鼠模型.采用TUNEL法测定凋亡细胞的表达,免疫组化法测定HIF-1α、PAR-1蛋白的表达.结果:与模型组比较,蛭龙活血通瘀胶囊低、中、高剂量组的凋亡细胞与PAR-1蛋白表达明显下降,而HIF-1α蛋白的表达明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01).与低剂量组比较,中、高剂量组各时间点的凋亡细胞与PAR-1蛋白表达均明显下降,而HIF-1α蛋白的表达明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:蛭龙活血通瘀胶囊能明显抑制PAR-1活化,促进HIF-1α表达,抑制细胞凋亡,对脑出血大鼠具有明显的脑保护作用,且存在一定量效关系.
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蛭龙活血通瘀胶囊对脑出血大鼠神经细胞保护作用的研究
目的:观察大鼠脑出血后神经细胞凋亡与蛋白酶激活受体-1 (PAR-1)表达的动态变化及蛭龙活血通瘀胶囊的干预作用,探讨蛭龙活血通瘀胶囊可能的脑保护作用.方法:将大鼠随机分为假手术组、模型组、蛭龙活血通瘀胶囊低、中、高剂量组.自体血注入法制备脑出血大鼠模型,TUNEL法测定凋亡细胞,免疫组化法测定PAR-1蛋白.结果:与模型组比较,蛭龙活血通瘀胶囊低、中、高剂量组的凋亡细胞与PAR-1表达均明显下降,差异有统计学意义(P＜0.01).与低剂量组比较,中、高剂量组各时间点的凋亡细胞与PAR-1表达均明显下降,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:蛭龙活血通瘀胶囊能明显抑制PAR-1活化,减少细胞凋亡,对脑出血大鼠具有明显的脑保护作用,且存在一定量效关系.
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星形细胞肿瘤血管内皮生长因子和蛋白酶激活受体-1的表达
目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)和蛋白酶激活受体-1(PAR-1)的表达与星形细胞肿瘤病理分级的关系以及两者的相关性.方法:用半定量RT-PCR方法检测50例星形细胞肿瘤和10例正常脑组织中VEGF和PAR-1的表达水平.结果:在正常脑组织中VEGF和PAR-1的表达与星形细胞肿瘤比较差异有统计学意义;VEGF和PAR-1在星形细胞肿瘤Ⅱ级、Ⅲ级与Ⅳ级中的表达水平,差别具有统计学意义.经Spearman等级相关分析VEGF和PAR-1两者的表达指数正相关(r=0.355,P<0.05).结论:VEGF和PAR-1的表达与星形细胞肿瘤的侵袭性密切相关,可作为临床判断胶质瘤恶性程度、侵袭性的重要指标.
