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PI3K信号通路及其在后发性白内障发病机制中的研究进展
磷脂酰肌醇3-激酶( phosphoinositide 3-kinases，PI3K)是使磷脂酰肌醇的肌醇环第3位磷酸化的酯酶，属于磷脂酰肌醇激酶相关蛋白家族，具有内源性脂质底物。PI3K信号通路参与细胞的增殖、分化、凋亡等生命活动，是重要的生命信号通路。晶状体上皮细胞发生上皮-间质转化是后发性白内障形成的主要机制，H3K信号通路是介导该过程的重要信号传导通路。
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地塞米松对急性肺损伤大鼠细胞信号转导系统ERK和PI3-K的影响
目的研究地塞米松对急性肺损伤(ALI)大鼠细胞信号转导系统中细胞外信号调节激酶(ERK)和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3-K)的影响,为临床治疗提供理论依据.方法健康雄性SD大鼠36只,随机分为损伤组、地塞米松组(DEX组)和对照组,每组12只,损伤组和DEX组均在尾静脉注入油酸0.25ml/kg建立ALI模型:①DEX组在注入油酸后15min注入地塞米松1.0mg/kg;②损伤组注入油酸后15min注入等量生理盐水;③对照组2次均注入等量生理盐水,各组均在用药后2h颈总动脉放血处死.观察各组PaO2、左肺湿/干比、肺通透性指标、肺病理,免疫组化法和免疫印迹法测定肺内PI3-K、ERK和磷酸化ERK(P-ERK)表达.结果损伤组大鼠PaO2明显降低,左肺湿/干比、肺通透性指标升高,肺病理肺水肿及透明膜形成;DEX组上述指标较损伤组有所减轻.损伤组支气管、肺泡上皮细胞,肺血管内皮细胞,肺泡巨噬细胞上表达PI3-K、ERK和P-ERK明显增多,DEX组表达PI3-K、ERK和PERK有所下降,但两组均明显高于对照组.结论PI3-K和ERK信号通路参与调节ALI的早期病程,地塞米松可能通过抑制PI3-K和ERK的高表达,从而对ALI有一定的改善作用.
关键词： 急性肺损伤 有丝分裂素激活蛋白激酶类 磷脂酰肌醇3-激酶 地塞米松 -
磷脂酰肌醇3-激酶在油酸型急性肺损伤大鼠肺内的表达及其意义
目的研究磷脂酰肌醇3-激酶(PI3-K)在油酸型急性肺损伤大鼠肺内的表达情况及其与肺组织细胞凋亡的关系.方法健康雄性SD大鼠60只,随机分为5组,每组12只:油酸组共4组,分别在尾静脉注入油酸0.25ml/kg后1h,2h,4h, 24h颈总动脉放血处死,对照组:尾静脉注入生理盐水0.25ml/kg,2h颈总动脉放血处死.观察各组动脉血气、左肺湿/干比、肺系数、BALF中蛋白含量、肺通透指数,免疫组化法测定肺内Fas-L表达,免疫组化法和免疫印迹法测定肺内PI3-K蛋白表达.结果油酸组大鼠PaO2明显降低,左肺湿/干比、肺系数、BALF中蛋白含量及肺血管通透性明显增高(P＜0.01),支气管、肺泡上皮细胞,肺血管内皮细胞,肺泡巨噬细胞上表达PI3-K和Fas-L明显增多(P＜0.01),且PI3-K表达峰值时间早于Fas-L.结论 Fas-L依赖的肺泡上皮细胞、肺血管内皮细胞和巨噬细胞凋亡参与早期ALI发病机制,此过程可能通过PI3-K信号转导通路予以实现.
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PI3-K的激活在TGF-β1诱导肾小管上皮细胞间质转分化过程中的作用
目的探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3-K)的激活在转化生长因子β1(TGF-β1)体外诱导人肾小管上皮细胞(HKCs)间质转分化(EMT)过程中的作用及意义.方法将HKCs细胞株分为正常对照组(C)、不同浓度TGF-β1组、TGF-β1+PI3-K抑制剂Wortmannin组.选取不同时相,采用免疫印迹法(Western blot)测定总Akt(t-Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏素(E-cadherin)蛋白水平的表达变化;Akt磷酸化水平用磷酸化Akt与总Akt水平的比值表示.结果正常体外培养的HKCs经10ng/ml TGF-β1刺激1h后p-Akt水平显著升高;α-SMA蛋白表达水平在10ng/ml TGF-β1诱导48h后表达显著升高,而E-cadherom蛋白表达水平在TGF-β1诱导48h后表达显著下降.同时加用Wortmannin 10nmol/L组,p-Akt、α-SMA表达明显抑制,E-cadherin表达显著升高.结论PI3-K在TGF-β1诱导的EMT过程中被激活,并且参与TGF-β1诱导的EMT过程,特异性阻断PI3-K的激活可有效抑制TGF-β1介导的HKCs的EMT过程.
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PI3 K在肿瘤坏死因子诱导L929细胞程序性坏死过程中的调控作用研究
目的：探讨磷脂酰肌醇3-激酶（ phosphatidylinositol-3-kinase， PI3K）在肿瘤坏死因子α（ tumor necrosis factor alpha， TNFα）诱导细胞程序性坏死过程中的调控作用与机制。方法利用慢病毒介导的RNA干涉技术构建PI3K催化亚基p110α敲低、RIP1敲低及RIP1与p110α双敲低的L929细胞株，Western印迹或RT-PCR验证敲低效果。同时，利用Western印迹检测AKT和混合系激酶区域样蛋白（ MLKL）磷酸化及MLKL多聚化。流式细胞术和显微拍照术检测细胞死亡。结果 PI3K和AKT抑制剂及p110α敲低都可降低AKT磷酸化水平，并阻断TNFα诱导的L929细胞程序性坏死。敲低RIP1并不抑制TNFα与Z-VAD联合诱导的L929细胞程序性坏死，但这种RIP1非依赖性细胞程序性坏死能为p110α敲低抑制。此外，p110α敲低可抑制TNFα与Z-VAD联合诱导的MLKL活化及其介导的细胞程序性坏死。结论 PI3K是调控细胞程序性坏死的重要靶点，可通过RIP1依赖及非依赖性方式激活，进而活化AKT与MLKL，启动TNFα诱导的细胞程序性坏死。
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PI3K调控细胞程序性坏死的分子机制
目的 探讨磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol-3-kir ase,PI3K)调控肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNFα)诱导的细胞程序性坏死(necroptosis)的具体机制.方法 利用慢病毒介导的RNA干涉技术构建PI3K催化亚基p110α敲低的L929细胞株,利用TNFα与Z-VAD联合处理构建细胞程序性坏死模型,Western印迹检测p110α敲低效果及受体相互作用蛋白激酶(RIP)1、3和混合系激酶域样蛋白(MLKL)的磷酸化水平,Duolink实验检测RIP1与RIP3的相互作用,p110α与RIP1及RIP3的相互作用,RIP1和RIP3同源多聚体的形成情况.结果 慢病毒介导的p110α敲低效果显著,能抑制RIP1、RIP3和MLKL的初始磷酸化以及TNFα与Z-VAD联合诱导的磷酸化,表明p1 10α敲低显著抑制RIP1/RIP3/MLKL信号通路的活化.Duolink实验结果表明,在TNFα与Z-VAD联合诱导细胞程序性坏死过程中p110α与RIP3的结合显著增强,且p110α敲低显著抑制RIP1与RIP3的结合,以及RIP1和RIP3同源多聚体的形成.结论 PI3K通过调控RIP1和RIP3的初始磷酸化水平,促进坏死复合体及RIP1和RIP3同源多聚体的形成,进而活化RIP1/RIP3/MLKL信号通路,启动细胞程序性坏死.鉴于PI3K催化亚基p110α与RIP3的相互作用随细胞程序性坏死的发生而增强,PI3K可能通过直接磷酸化RIP3来提高其激酶活性.
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新型咪唑酮并吡啶类化合物的合成和体外抗肿瘤活性
目的:建立一类咪唑酮并吡啶衍生物的合成方法并初步评价其体外抗肿瘤活性.方法:以4-羟基吡啶为起始原料经双硝基化、羟基氯代、芳族亲核取代反应、单硝基还原、环合、N-甲基化、硝基还原、酰化等反应制备目标分子.采用Kinase-Glo Luminescent Assay、Lance Ultra Assay、磺酰罗丹明B法评价其体外抗肿瘤活性.结果:11个目标分子经1HNMR,13CNMR,MS确证.目标分子对磷脂酰肌醇3-激酶α(phosphatidylinositol 3-kinase α,PI3 Kα)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(the mammalian target of rapamycin,mTOR)均未呈现出明显的抑制活性;3,5-2(三氟甲基)苯基脲衍生物(27)对结肠癌细胞株HCT-116、前列腺癌细胞株PC-3呈现出中等强度的抗增殖活性.结论:该类化合物结构骨架新颖,具有进一步结构衍生化空间,可用于新型激酶抑制剂的研究.
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三氟拉嗪诱发细胞凋亡及对DNA依赖蛋白激酶催化亚单位表达和P38磷酸化的抑制作用
目的探讨三氟拉嗪(TFP)对肿瘤细胞生长的抑制作用和分子机制,寻找抑制肿瘤生长的作用靶分子.方法用不同剂量TFP作用于人宫颈癌上皮细胞(HeLa),体外细胞计数绘制生长曲线;荧光染料染色及DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;γ射线及TFP处理细胞观察TFP对细胞辐射敏感性的影响;Western印迹分析蛋白表达或磷酸化.结果TFP作用后HeLa细胞的生长受到抑制,对γ射线的敏感性增加,且随着剂量的增加细胞凋亡的比率也增加.TFP还可有效诱导DNA修复蛋白DNA依赖蛋白激酶催化亚单位(DNA-PKcs)被切割,且可抑制辐射诱发的P38的磷酸化.结论 TFP可抑制肿瘤细胞的生长,对DNA-PKcs的表达和P38的磷酸化都有抑制作用.
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黄芩素对2,4,6-三硝基苯磺酸诱导的小鼠实验性肠炎的作用和机制
目的 探讨黄芩素对2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的小鼠肠炎实验模型的作用及机制.方法 将BALB/c小鼠随机分成3组(n=10):正常对照组、模型组(TNBS)和黄芩素组(TNBS+黄芩素20 mg·kg-1).黄芩素组于造模前2dig给予黄芩素,每天1次,共9d.测量结肠长度,并取结肠组织进行HE染色,进行组织损伤和炎症细胞浸润评分;ELISA测定结肠组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量.体外制备细菌脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7炎症细胞模型,黄芩素(10,25和50 mmol·L-1)给药干预,Griess 试剂法测定上清中一氧化氮(NO)含量;荧光定量PCR检测炎症介质TNF-α、白细胞介素6(IL-6)、IL-1β、诱导型NO合酶(iNOS)、环氧合酶2(COX-2)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)mRNA表达;Western蛋白印迹法检测磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/NF-κB (PI3K/AKT/N F-κB)通路磷酸化蛋白(p-PI3K,p-AKT,p-p65和p-IκBa)表达.结果 与正常对照组相比,模型组小鼠结肠缩短,组织病理损伤,炎症细胞浸润,组织TNF-α含量增高;黄芩素给药组上述症状得到显著改善(P＜0.05).与细胞对照组相比,LPS模型组细胞NO分泌、炎症介质(TNF-α,IL-6,IL-1β,iNOS,COX-2和MCP-1)mRNA表达及PI3K/AKT/NF-κB通路磷酸化蛋白表达均增高(P＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,黄芩素给药组上述指标均降低(P＜0.05,P＜0.01).结论 黄芩素可减轻TNBS诱导的小鼠实验性肠炎的症状,作用机制可能与抑制PI3K/AKT/NF-κB通路的激活从而抑制炎症介质的表达和减少炎症因子释放有关.
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间歇性低氧在大鼠心肌缺血/再灌注损伤中的保护机制
目的 研究磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、低氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮生长因子2(VEGF-2)在间歇性低氧对大鼠心肌缺血/再灌注(I/R)损伤中的表达及保护机制.方法 选取72只大鼠随机分为假手术组(n=18)、I/R+间歇性低氧(I/R+IH)组(n=18)、I/R组(n=18)、I/R+IH+磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂组(I/R+IH+PI3K抑制剂组)(n=18),将大鼠暴露于低氧循环制作间隙性低氧动物模型,采用球囊结扎冠脉方法制作心肌缺血/再灌注动物模型.通过试剂盒检测心肌组织丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)含量,通过超声心动图监测大鼠舒张末期容积、收缩末期容积、左心室射血分数,通过Western blot法检测蛋白激酶B(AKt)、HIF-1α、VEGF-2表达.结果 与假手术组比较,I/R组的MDA、CK-MB高于假手术组,GSH低于假手术组,左心室舒张末期容积及收缩期末期容积高于假手术组,左心室射血分数低于假手术组,AKt蛋白及HIF-1α、VEGF-2表达低于假手术组,差异有统计学意义(P＜0.05).I/R+IH组反映氧化损伤的MDA、CK-MB低于I/R组,GSH高于I/R组;左心室舒张末期容积及收缩期末期容积低于I/R组,左心室射血分数高于I/R组,AKt蛋白及HIF-1α、VEGF-2表达高于I/R组,差异有统计学意义(P＜0.05).I/R+IH+PI3K抑制剂组的MDA、CK-MB高于I/R+IH组,GSH低于I/R+IH组;左心室舒张末期容积及收缩期末期容积高于I/R+IH组,左心室射血分数低于I/R+IH组,AKt、HIF-1α、VEGF-2蛋白表达低于I/R+IH组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 IH在心肌缺血损伤中具有心脏保护作用,其保护机制与激活磷脂酰肌醇酯3-激酶信号通路及促进HIF-1α、VEGF-2表达有关.
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PI3K信号通路在LPS诱导RAW264.7细胞表达sTREM-1中的作用
目的：探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信号通路在脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞表达可溶性髓样细胞触发受体-1(sTREM-1)中的作用。方法培养小鼠巨噬细胞株RAW264.7,采用相同浓度的LPS在不同时间诱导RAW264.7细胞,应用Western blot法分别检测PI3K蛋白表达水平,RT-PCR法检测PI3K mRNA表达水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞培养血清中sTREM-1表达水平。用不同浓度PI3K特异性抑制剂LY294002处理细胞,观察上述指标变化。结果 LPS可时间依赖性地诱导RAW264.7细胞PI3K蛋白、PI3K mRNA的表达；LY294002可浓度依赖性地抑制PI3K蛋白、PI3K mRNA的表达；LY294002阻断PI3K信号转导通路后,LPS对sTREM-1表达的诱导作用受到显著抑制,并且具有剂量依赖性。结论 LPS通过PI3K信号通路诱导RAW264.7细胞表达sTREM-1。
关键词： 磷脂酰肌醇3-激酶 脂多糖 可溶性髓样细胞触发受体-1 -
PI3K/AKT/Bcl-2凋亡信号传导通路的研究进展
细胞信号传导通路与疾病的相关性是近年来的研究热点，磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路是其中的一条重要通路，具有促进细胞增殖、抑制凋亡、促进细胞迁移以及血管生成和影响疾病预后等功能。当PI3K/AKT信号通路被激活后，其通过影响下游的多种效应分子，影响细胞凋亡，进而导致疾病的发生、发展。 B细胞淋巴瘤-2蛋白(Bcl-2)是AKT的底物之一，能够抑制细胞的凋亡，导致多种疾病如肿瘤或瘢痕等发生。本文就PI3K/AKT/Bcl-2信号通路的组成、调节以及与疾病的关系展开综述。
关键词： 磷脂酰肌醇3-激酶 蛋白激酶B B细胞淋巴瘤-2蛋白 信号传导通路 -
磷脂酰肌醇3-激酶在间歇性低氧对抗大鼠心肌缺血/再灌注损伤中的保护机制
目的 研究磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)在间歇性低氧(IH)对抗大鼠心肌缺血/再灌注(I/R)损伤中的作用机制.方法 将60只大鼠随机分为四组,分别为假手术组(n=15)、I/R组(n=15)、IH+I/R组(n=15)、IH+I/R+PI3K抑制剂组(n=15).将大鼠暴露在低氧循环制作IH动物模型,通过球囊结扎冠脉方法制作心肌I/R动物模型,通过TTC染色确定梗死面积.采用Western blot法检测蛋白激酶B(AKt)表达.结果 与I/R组比较,IH+I/R组的心肌梗死面积下降(P＜0.05),Akt蛋白表达升高(P＜0.05).与IH+I/R组比较,IH+I/R+PI3K抑制剂组心肌梗死面积增加(P＜0.05),Akt蛋白表达下降(P＜0.05).结论 IH在大鼠心肌缺血损伤中具有心脏保护作用,其保护机制与激PI3K信号通路有关.
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NOTCH1／PI3 K信号通路在T-ALL治疗中的研究进展
急性T淋巴细胞白血病（ T-ALL）是进行性的血液系统恶性疾病，以 T细胞克隆增生、积聚和组织浸润为特点，好发于儿童和青少年，占儿童急性淋巴细胞白血病的10％～15％。 NOTCH1和磷脂酰肌醇3-激酶／丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶（PI3K-Akt）信号通路及两者之间通过下游靶基因和靶蛋白实现的交互作用在T-ALL发生和发展中扮演重要角色。随着对这两条信号通路的认识逐渐深入， NOTCH1和PI3K-Akt信号通路成为治疗T-ALL的新靶点。
关键词： 急性T淋巴细胞白血病 磷脂酰肌醇3-激酶 Notch1 γ分泌酶抑制剂 -
蛋白激酶B与糖原合成激酶3
蛋白激酶B(PKB)通过依赖或不依赖磷脂酰肌醇3-激酶(PI3-K)信号途径参与多种维持机体正常生命活动的调节机制,糖原合成-激酶3(GSK-3)影响PI3-K/PKB许多下游事件,包括胰岛素诱导的糖原和蛋白质合成调控、细胞生长分化、抗凋亡过程等,还与许多疾病有直接关系如糖尿病、癌症、Alzheimer病等.
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PI3K/Akt信号通路及神经损伤的研究进展
磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路是一系列的级联反应过程,是一条经典的调节细胞存活、分化及凋亡信号转导通路,在生理和病理过程中起关键作用,并通过调节下游相关蛋白的活化过程发挥重要的生物学效应.由于神经细胞凋亡与一些老年性记忆减退或丧失之间有紧密联系,因此人们开始关注PI3K/Akt信号转导在神经系统发育和学习记忆中的作用机制.通过人们不断深入的研究,该信号通路在神经损伤性病变中的作用及机制被不断的发掘.总结PI3K/Akt的结构、作用机制与神经损伤性疾病中的关系,可为临床治疗神经损伤/退化性疾病提供理论指导.
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ILK/PI3K/PKB转导通路与肿瘤
整合素连接激酶(ILK)以依赖于磷酯酰肌醇3-激酶(PDK)方武激活,通过磷酸化下游底物蛋白激酶B(PKB)等使细胞外信号向下游传递,对细胞的生长、分化及细胞凋亡、细胞周期、细胞黏附等进行调控,在肿瘤的发生、发展中发挥着重要的作用.本文综述ILK/PI3K/PKB传导通路中一些酶类或基因在肿瘤中的表达及其与肿瘤发生、发展及治疗的研究进展.
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子宫内膜样癌中CXCR4和PI3K的表达及其对血管生成作用的研究
目的 检测子宫内膜样癌中趋化生长因子受体4(CXCR4)和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)的表达及对CD34阳性的微血管密度(MVD)的作用,探讨其关系及临床意义.方法 选择单县中心医院2000年1月至2011年12月行子宫内膜样癌术后留取的蜡块及临床资料作为观察组,共89例,选择54例正常的子宫内膜组织作为对照组,应用免疫组织化学技术检测两组中CXCR4、PI3K和CD34蛋白的表达,探讨CXCR4、PI3K和MVD在不同临床病理特征的表达差别.结果 观察组中CXCR4、PI3K蛋白表达的阳性率和MVD显著高于对照组,观察组中CXCR4、PI3K蛋白表达的阳性率和MVD的表达均与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移、分化程度、脉管浸润及Ki67的表达密切相关;观察组中CXCR4和PI3K、CXCR4和MVD、PI3K和MVD的表达具有正相关性.结论 子宫内膜样癌组织中CXCR4及PI3K高表达参与肿瘤的进展,两者对CD34阳性的血管生成可能有一定促进作用.CXCR4及PI3K对病变的进展具有重要促进作用.
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脂多糖诱导膀胱癌细胞释放HMGB1及其机制研究
目的 研究脂多糖(LPS)对膀胱癌细胞高迁移率族蛋白B1(HMGB1)释放的诱导作用,并探讨其可能的机制.方法 采用人膀胱癌细胞株T24,观察100 μg/L LPS诱导不同时间对培养上清液中HMGB1含量和细胞HMGB1 mRNA表达水平的变化,及不同浓度的磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)通路抑制剂LY294002对HMGB1释放的作用.分别使用酶联免疫吸附试验、荧光定量PCR法检测HMGB1含量和HMGB1mRNA表达水平.结果 培养上清液中HMGB1含量和细胞HMGB1 mRNA表达水平均于LPS诱导12 h后升高,并随诱导时间延长而进一步升高.LY294002对LPS诱导HMGB1释放有不完全的抑制作用.结论 LPS诱导膀胱癌细胞释放HMGB1,其机制可能与PI3K/AKT信号通路有关.
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骨桥蛋白与表皮生长因子受体、PI3 K蛋白在食管鳞癌中的表达及临床意义
目的：研究骨桥蛋白( osteopontin,OPN)及表皮生长因子受体( epidermal growth factor receptor,EG-FR)、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)蛋白在食管鳞癌中的表达及与其临床意义。方法应用S-P免疫组化技术检测70例食管鳞癌及其相应的癌旁正常组织中OPN和EGFR、PI3K蛋白的表达。结果70例食管鳞癌组织中OPN、EGFR、PI3K蛋白的阳性表达率72.9%(51/70)、67.1%(47/70)、81.4%(57/70)均高于癌旁正常组织5.7%(4/70)、18.6%(13/70)、15.7%(11/70),差异具统有显著性(P<0.05)；OPN的表达与淋巴结转移、临床分期相关,差异有显著性(P<0.05)；EGFR蛋白的表达与浸润深度、淋巴结转移、临床分期相关差异有显著性(P<0.05)；PI3K蛋白的表达与浸润深度、淋巴结转移、临床分期、分化程度相关差异有显著性(P<0.05)。 OPN与EGFR、PI3K蛋白在食管鳞癌组织中的表达呈正相关关系(rs=0.325、0.287,P<0.05),EGFR与 PI3K蛋白在食管鳞癌组织中的表达呈正相关关系(rs=0.292,P<0.05)。结论 OPN可能通过激活EGFR、PI3K、Akt信号系统在肿瘤的发生发展中发挥重要作用。
