首页 > 文献资料
-
微丝相关蛋白hHBRK1突变体的构建、表达及纯化
目的:构建微丝相关蛋白hHBRK1截短体和突变体原核表达载体,并表达及纯化融合蛋白.方法:采用常规PCR并结合定点突变技术,对hHBrk1基因进行缺失和点突变;利用限制性内切酶将PCR产物克隆至原核表达载体pGEX-4T;IPTG诱导融合蛋白表达,通过谷胱甘肽-琼脂糖纯化技术分离纯化GST融合蛋白.结果与结论:构建了包括氨基端缺失截短体hHBRK1-ΔN、羧基端缺失截短体hHBRK1-ΔC和点突变蛋白hHBRK1-S56G57在内的原核表达质粒,分离获得较高纯度的重组hHBRK1突变体融合蛋白,Western杂交证实纯化蛋白为GST融合蛋白.本实验为进一步研究hHBRK1的相互作用蛋白及其可能的结合位点提供了基础.
-
FHL3研究进展
4个半LIM结构域蛋白3(four and a half LIM domain protein 3,FHL3)是LIM蛋白质超家族的一个成员,主要存在于骨骼肌中.它含有4个半LIM结构域,并通过这些LIM结构域与肌分化因子MyoD、肌动蛋白、转录因子MZF-1、细胞周期调节因子CDC25B等多种蛋白质发生相互作用,从而对成肌细胞分化、细胞骨架结构、骨骼肌形成以及某些基因的表达起到重要的调控作用.目前,FHL3的功能及其作用机制尚未阐明,深入开展FHIS的研究将可能为人类治疗某些疾病提供新思路.
-
低氧对成年大鼠心脏成纤维细胞表型的影响
目的研究低氧(2%氧)对成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞表型的影响. 方法分离培养成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞,采用免疫细胞化学染色检测肌成纤维细胞的典型标记--α-平滑肌肌动蛋白,用液体闪烁计数方法检测心脏成纤维细胞胶原酶敏感的3H-脯氨酸掺入率来观察细胞胶原蛋白合成变化,并检测3H-亮氨酸掺入率观察细胞总蛋白合成的变化. 结果低氧24 h、48 h时,成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞的α-平滑肌肌动蛋白表达较常氧组显著增强;同时细胞胶原蛋白合成速率亦显著增加,在低氧第24 h、48 h胶原酶敏感的3H-脯氨酸掺入率较常氧组分别增加132%(P<0.05)和163%(P<0.01). 结论低氧能够促进成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞向肌成纤维细胞表型转换.
-
糖尿病大鼠肾皮质α平滑肌肌动蛋白表达与肾病发生的关系
目的探讨早期抑制纤维化能否阻止大鼠糖尿病肾病的发生.方法将72只SD大鼠随机分为3组:正常对照组、糖尿病组和干扰素γ(IFNγ)组.除正常对照组外,其余两组采用一次性ip链佐星70 mg·kg-1·d-1制备糖尿病模型.IFNγ组的糖尿病大鼠sc IFNγ(100 kU·kg-1·d-1)共8周.第1, 2, 4, 8周每组各取6只大鼠,分别测定血糖、肾脏肥大指数、尿白蛋白,免疫组化法测定肾组织α平滑肌肌动蛋白(αSMA)和Ⅳ型胶原的表达,同时以酶联免疫吸附法测定肾皮质αSMA的含量.结果第1, 2, 4, 8周,IFNγ组大鼠肾皮质αSMA含量分别较糖尿病组减少36.9%, 44.4%, 60.4%和40.6%(P<0.05).但IFNγ组肾脏Ⅳ型胶原表达、肾脏肥大指数均高于正常对照组(P<0.01),与糖尿病组无显著性差异(P>0.05).结论该剂量IFNγ抑制肾组织αSMA表达,但不能阻止糖尿病肾病早期病变的发生.
-
结缔组织生长因子对肾小管上皮细胞转分化的调节机制
目的观察结缔组织生长因子(CTGF)对体外培养的人肾小管上皮细胞转分化的直接影响,并探讨阻断内源性CTGF表达对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞转分化的干预效果,以阐明CTGF在肾小管上皮细胞转分化中的作用.方法体外培养人近曲小管上皮细胞(HKC).在观察CTGF对HKC的直接作用时,将HKC细胞分为三组:(1)对照组;(2)小剂量CTGF组:培养液中加入重组人CTGF(rhCTGF),终浓度为2.5 μg/L;(3)大剂量CTGF组: rhCTGF终浓度为5.0 μg/L.在探讨CTGF在TGF-β1诱导HKC转分化中的作用时,将细胞分为4组:(1)正常对照组;(2)TGF-β1刺激组(培养液加入重组人TGF-β1蛋白,浓度为10.0 μg/L);(3)TGF-β1+CTGF正义寡核苷酸(ODN)组(先以CTGF正义ODN转染HKC,再加TGF-β1刺激);(4)TGF-β1+CTGF反义ODN组(先以CTGF反义ODN转染HKC,再加TGF-β1刺激).用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定HKC α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅳ型胶原(col Ⅳ) mRNA水平的变化;间接免疫荧光方法检测HKC 胞浆内α-SMA的表达;流式细胞仪检测α-SMA阳性细胞百分率; ELISA方法测定培养液上清中col Ⅳ的浓度.结果不同浓度rhCTGF作用于HKC 24 h后,α-SMA mRNA水平显著升高(P<0.01),而col Ⅳ mRNA表达水平明显下降(均P<0.01);刺激48 h后,胞浆α-SMA表达明显增强,流式细胞仪测得三组细胞α-SMA阳性百分率依次为:2.4%、38.9%、65.5% (P<0.01);ELISA结果表明,rhCTGF抑制了col Ⅳ的分泌(P<0.01).TGF-β1可诱导HKC高表达CTGF和α-SMA.转染后6 h,CTGF 反义ODN可显著抑制HKC表达CTGF和α-SMA mRNA(P<0.01).转染后48 h,CTGF反义ODN可明显抑制胞内α-SMA蛋白合成.结论 CTGF在体外能刺激肾小管上皮细胞向肌成纤维细胞(MyoF)转分化,而CTGF反义ODN的导入可有效抑制TGF-β1诱导的转分化过程.因此, CTGF可能是调节肾小管上皮细胞转分化的重要因子.
-
气道剪应力作用下黏蛋白5AC胞外极向分泌的主要介导分子
目的 探讨气道剪应力(SS)作用下黏蛋白(MUC)5 AC胞外极向分泌的主要介导分子.方法 常规培养16HBE细胞,使用Stata软件产生随机数字随机分为5组并分别进行如下处理:A组(对照组):10％胎牛血清(FBS)+DMEM高糖培养液继续培养,不再予任何刺激;B组(SS组):只给予节律性旋转装置产生的SS刺激;C组[SS+Rac-1特异性抑制剂(NSC23766)组]:给予SS刺激前30 min,加入NSC23766(10 μmol/L);D组(SS+微丝肌动蛋白解聚剂组):给予SS刺激前30 min,加入细胞松弛素D(100 μg/L);E组[SS+皮层肌动蛋白结合蛋白(Cortactin)小干扰RNA(siRNA)转染组]:用成功转染Cortactin-siRNA的细胞予以SS刺激.每个实验组设6个复孔,重复3次实验用于统计学分析.采用节律性旋转装置模拟呼吸时气流对气道产生的SS作用.用Cortactin-siRNA转染抑制Cortactin功能.酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定细胞培养上清液中MUC5AC的胞外分泌量;Westem印迹法检测Cortactin及其磷酸化(p-Cortactin)水平和转染效果;激光共聚焦显微镜观察微丝肌动蛋白的聚合情况.结果 Cortactin-siRNA转染成功.A、B、C、D、E组MUC5AC相对含量分别为0.210 ±0.013、0.631±0.025、0.473±0.112、0.330±0.067、0.272±0.019,B组均显著高于其他各组(P=0.000、0.043、0.000、0.000);B组Cortactin相对表达水平为0.670±0.048,显著高于E组的0.132±0.014(P＜0.01),但与A、C、D组的0.641 ±0.016、0.622±0.012、0.653±0.027比较差异均无统计学意义(均P＞0.05);B组p-Cortactin相对表达水平为0.582±0.067,显著高于A、C、E组的0.131 ±0.011、0.393±0.045、0.170±0.016(P =0.000、0.021、0.000),而D组(0.511 ±0.029)与B组差异无统计学意义(P =0.246).结论 Rac-1、Cortactin和微丝肌动蛋白是气道SS作用下MUC5AC胞外极向分泌的主要介导分子.
-
不同牵伸载荷对体外培养人肌腱细胞纤维型肌动蛋白的影响
目的 探讨不同牵伸载荷条件对体外人肌腱细胞纤维型肌动蛋白(F-actln)的影响,分析不同载荷条件与人肌腱细胞F-actin的变化关系.方法 取5～7代人肌腱细胞加载不同牵伸载荷,其中牵伸强度分别为4%、8%、12%;时间:2、4、8、12、24 h;频率:0.5 H、1.0 Hz.采用罗丹明标记的鬼笔环肽(rhodamine-phalloidin)及DAPI免疫荧光染色,激光扫描共聚焦显微镜观察F-actin的变化、细胞核固缩及凋亡小体形成;图像分析软件测定单个细胞平均荧光强度并进行单因素方差分析.结果 设定牵伸频率为0 5 Hz、牵伸强度4%,牵伸时间2 h时,人肌腱细胞微丝排列紊乱、模糊;牵伸时间4 h时,微丝增粗、减少,出现断裂呈细颗粒状.设定牵伸频率为0 5 Hz、牵伸时间4 h时,牵伸强度8%微丝解聚、断裂明显,F-actin总体分布减少;牵伸强度12%胞质微丝全部断裂,仅有部分胞膜微丝完整.设定牵伸频率为1.0 Hz,牵伸强度为12%,加载时间分别为2…4 8 12、24 h时,微丝断裂呈递增趋势,牵伸24 h肌动蛋白微丝全部断裂.空白对照组细胞微丝完整荧光强度整体水平高.牵伸频率固定时,随着牵伸强度递增,微丝的荧光强度呈梯度降低(P＜0.05),且差异有统计学意义;牵伸时间为8 h时,各实验组微丝荧光强度增加,但低于对照组,随着时间的延长,F-actin表达量逐渐降低,24 h时低,其中,牵伸频率为0 5l-Iz、牵伸强度4%、牵伸时间4 h时,细胞核固缩明显,凋亡小体形成.结论 不同牵伸载荷条件可引起体外培养的人肌腱细胞F-aetin发生断裂、解聚,F-actin的断裂、解聚与载荷时问及应力强度呈正相关,F-aetin的断裂、解聚诱导了人肌腱细胞生物学行为的改变.
-
人支气管平滑肌细胞内mRNA结合蛋白人抗原R对α-平滑肌肌动蛋白表达的影响
目的 观察人支气管平滑肌细胞(HBSMC)内mRNA结合蛋白人抗原R(HuR)对α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响.方法 体外培养HBSMC,根据血小板源性生长因子(PDGF)对其刺激时间分别记为0、6、12、24 h组.采用实时荧光定量PCR法检测各组HuR与α-SMA mRNA的表达、Western印迹法检测各组HuR与α-SMA蛋白的表达.干扰RNA法观察抑制HuR蛋白表达后PDGF刺激下对细胞α-SMA蛋白表达的影响.结果 PDGF时间依懒性增强HuR的表达,0、6、12、24 h组全细胞HuR蛋白及mRNA相对表达量分别为0.23 ±0.09、0.42 ±0.11、0.93 ±0.21、1.37±0.28及1.00±0.00、1.09±0.03、1.16 ±0.03、1.27±0.02(均P＜0.05);各组α-SMA蛋白及mRNA相对表达量也呈时间依赖性增强(1.03±0.08、1.20±0.09、1.39±0.11、1.58±0.10及1.00±0.00、1.17 ±0.02、1.23±0.02、1.45±0.03,均P＜0.05).HuR特异地干扰RNA转染细胞后,HuR表达下调,PDGF诱导的α-SMA表达相应减弱.结论 PDGF可增加HBSMC中HuR及α-SMA的表达,HuR参与PDGF诱导的α-SMA表达过程.
-
IgA肾病患者肾组织中丝裂素活化蛋白活化与肾小管上皮细胞转分化的关系
目的检测IgA肾病患者肾小管上皮细胞中丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)不同亚类蛋白质表达及磷酸化水平的变化,初步探讨MAPK各亚类在体内对肾小管上皮细胞转分化的调控作用.方法 36例住院IgA肾病患者的肾活检标本,分为轻度系膜增生组、局灶增生组和增生硬化组.采用普通病理染色和免疫组织化学技术,观察各组肾组织中肾小管和间质的病理改变、肾小管间质损伤指数、增殖细胞核抗原(PCNA)和纤连蛋白(FN)在肾小管、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在肾小管和间质表达的变化,并应用非磷酸化和磷酸化激酶的特异抗体检测肾组织内MAPK(包括ERK、JNK和p38)的表达及活化情况.结果随着肾小球病变程度的加重,肾小管间质损伤指数增加.肾小管上皮细胞的PCNA阳性率逐渐增高;其中增生硬化组的PCNA阳性率是正常对照组的2.38倍(P<0.01),α-SMA表达阳性的肾小管上皮细胞明显增多,局灶增生组和增生硬化组的肾小管α-SMA 表达阳性率均显著增高(P<0.05).FN在肾间质的表达增加,α-SMA表达阳性率与FN表达阳性率和肾间质纤维化程度呈正相关.正常人肾组织中MAPK各亚类均有基础表达,IgA肾病患者肾组织中MAPK各亚类的表达部位与正常人相似,肾小管ERK和JNK活化程度随肾小球病变程度的加重而逐渐增加,以增生硬化组的变化为显著(与对照组相比P<0.01).p38蛋白及其磷酸化形式在IgA肾病各病变组无明显变化.肾小管P-JNK表达阳性率与α-SMA表达及FN表达均呈正相关,P-ERK表达阳性率与α-SMA表达无相关性但与FN表达呈正相关.结论 IgA肾病患者的肾小管上皮细胞(RTEC)可发生表型转化并参与肾间质纤维化病变的进展.在MAPK各亚类中,JNK激活可能是调控RTEC转分化的关键细胞内信号,而ERK活化可能是通过介导RTEC增殖而间接影响FN表达.
-
103钯放射性支架对平滑肌肌动蛋白在犬胆管损伤愈合过程中的表达影响及意义
目的观察胆管内放射对平滑肌肌动蛋白(SMA)在犬胆管损伤愈合过程中的表达影响,探讨103钯(103Pd)放射性支架抑制胆管损伤后狭窄的作用及意义.方法通过犬肝外胆管损伤模型将103Pd放射性支架和普通支架分别植入犬肝外胆管内,分别于手术后30 d取材行SMA免疫组织化学SP染色观察.结果 103Pd放射性支架组犬胆管SMA表达较弱,而普通支架组却较强,但是103Pd放射性支架组犬胆管腔狭窄程度比普通支架组轻.结论 103Pd放射性支架犬胆管内放射可以减弱SMA在胆管愈合过程中的表达,从而可以抑制胆管损伤后因胆管瘢痕性挛缩导致的胆管狭窄.
-
SNC19/ST14表达对大肠癌细胞生物学行为的影响
目的探讨SNC19/ST14表达对大肠癌细胞生物学行为的影响.方法定向克隆法构建SNC19/ST14基因全长阅读开放框(ORF)的真核表达载体;脂质体转染RKO结肠癌细胞株,筛选阳性克隆;用实时荧光定量聚合酶链反应、Western 印迹和免疫组织化学法检测SNC19/ST14蛋白的表达;MTT法测定细胞的群体倍增时间(TD);流式细胞仪测定细胞周期;罗丹明-鬼笔环肽标记细胞的骨架蛋白F-肌动蛋白,用激光共聚焦显微镜观察F-肌动蛋白的变化;并测定细胞对细胞外基质(ECM)的黏附能力.结果成功构建了真核细胞表达载体pSecTag2a-SNC19/ST14(ORF),并筛选到稳定表达SNC19/ST14蛋白的RKO-SNC19/ST14细胞;观察到SNC19/ST14使细胞骨架蛋白F-肌动蛋白的排列发生改变,并使细胞对细胞外基质的黏附能力下降,但SNC19/ST14的表达对细胞增殖、凋亡和细胞周期影响不明显.结论成功地使SNC19/ST14基因在真核细胞中稳定表达,并发现SNC19/ST14可能与细胞骨架蛋白F-肌动蛋白的聚集和极化有关,并可能通过此种作用影响到细胞对细胞外基质的黏附能力,但对细胞的增殖、凋亡及细胞周期影响不大.
-
关于老化卵母细胞减数分裂不对称性丧失的研究进展
哺乳动物卵母细胞进行减数分裂时进行两次连续的不对称性分裂,终形成一个体积较大的卵子和两个体积较小的极体.这种不对称性分裂对卵母细胞以及胚胎发育有很重要的作用.各种与纺锤体移位及锚定和收缩环的形成、极体排出有关的因子,例如肌动蛋白相关蛋白2/3(Arp2/3)复合物、JMY、小三磷酸鸟苷(GTP)酶即激活肌动蛋白成核因子等之间相互作用形成一个调节卵母细胞不对称性分裂的信号通路.然而老化的卵母细胞中皮质极化消失,成核促进因子及相关调控因子的水平和活性下降,终导致老化卵母细胞的受精率及受精后的卵裂率等明显下降.综述老化卵母细胞减数分裂时不对称性丧失的研究进展.
-
地龙对矽肺模型大鼠α-平滑肌肌动蛋白和高迁移率族蛋白B1表达的影响
目的 观察地龙对矽肺模型大鼠α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达的影响.方法 45只大鼠随机分为空白组、模型组和地龙干预组.建立大鼠矽肺模型,地龙干预组用地龙煎液4 ml/kg灌胃,空白组和模型组用等量生理盐水灌胃.每组在第7、14、28天处死5只大鼠.将肺组织行HE染色及天狼星红染色,用RT-PCR、Western blot法检测α-SMA和HMGB1mRNA和蛋白的表达.结果 与空白组比较,模型组大鼠肺组织中α-SMA和HMGB1 mRNA及蛋白表达水平第7、14、28天时上调,差异有统计学意义(P＜0.01),与模型组比较,地龙干预组大鼠肺组织中α-SMA和HMGB1mRNA及蛋白表达水平在第7、14、28天时下调,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 地龙抑制矽肺胶原沉积,肺纤维化形成,可能与抑制肺组织HMGB1表达及α-SMA的活化相关.
-
甲胺磷对鸡坐骨神经中微管和微丝蛋白水平的影响
目的研究甲胺磷诱发迟发性神经病动物的坐骨神经中微管蛋白和微丝中β-肌动蛋白水平随时间变化的趋势.方法母鸡以30 mg/kg甲胺磷连续15 d经皮下注射染毒,出现迟发性神经病症状后的第2、10和23天,分别取其坐骨神经匀浆,用Western blotting法检测鸡坐骨神经中α-微管蛋白、β-微管蛋白和β-肌动蛋白的水平.结果鸡坐骨神经上清液中α-微管蛋白水平随时间延长逐渐下降,出现迟发性神经病症状后的第2、10和23天分别降低了6%、15%和25%,沉淀中变化不明显;β-微管蛋白水平在各时间点均降低:在第2、10和23天,沉淀中的水平分别下降了27%、6%和19%,上清液则分别降低了1%、21%和22%;沉淀中β-肌动蛋白水平升高:第2、10和23天分别升高了24%、48%和17%;上清液中β-肌动蛋白水平的变化不明显.结论甲胺磷可导致母鸡坐骨神经α-微管蛋白、β-微管蛋白和β-肌动蛋白改变,可能是甲胺磷诱发动物迟发性神经病的机制之一.
-
PI3K/Akt信号通路对二氧化硅诱导人胚支气管上皮细胞α-平滑肌肌动蛋白表达的影响
目的 探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路在二氧化硅(SiO2)粉尘诱导的人胚胎支气管上皮细胞(HBE)表达转化生长因子(TGF)-β和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)中的作用.方法 将体外培养的HBE细胞分成5组:(1)空白对照组；(2)SiO2处理组；(3)Akt磷酸化抑制剂组；(4)同时用Akt磷酸化抑制剂和SiO2处理组；(5)Akt磷酸化抑制剂处理细胞24 h再用SiO2处理组；SiO2暴露浓度为100 μg/ml,磷酸化抑制剂Ly294002浓度为10 μmol/L;用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、TGF-β 、α-SMA表达水平.用免疫荧光技术检测上述处理过程中α-SMA蛋白在细胞中的定位和表达情况.结果 SiO2可以明显促使Akt磷酸化,48 h p-Akt表达增加了近l倍,72 h表达高；TGF-β在12h明显增高,48 h达高峰；α-SMA表达在24 h开始增高,72h表达上调了1倍.Akt磷酸化抑制剂Ly294002可以有效抑制Akt的磷酸化,明显降低α-SMA的表达,尤其是先加抑制剂与细胞作用24 h后再加SiO2,p-Akt和α-SMA表达均明显下调,分别下调了1.5倍和7.6倍,对TGF-p表达则无明显影响.免疫荧光结果显示,SiO2可明显诱导HBE细胞内α-SMA的表达,而Akt磷酸化抑制剂Ly294002可以使HBE细胞内α-SMA蛋白的荧光强度明显减弱.结论 SiO2诱导HBE细胞表达α-SMA可能是通过PI3K/Akt信号通路实现的,Akt磷酸化抑制剂Ly294002可以有效抑制SiO2诱导的α-SMA表达.
关键词： 1-磷脂酰肌醇3-激酶 信号通路 二氯化硅 肌动蛋白类 -
α-平滑肌肌动蛋白在创伤性神经瘤中的表达及其意义
目的观察α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)在创伤性神经瘤中的表达与分布,探讨其与创伤性神经瘤的形成及其临床表现的关系和意义.方法 42例创伤性神经瘤组织标本,分为创伤性神经瘤无疼痛症状组(无症状组,31例)、创伤性神经瘤有疼痛症状组(有症状组,11例),与15例正常神经组织标本对照(对照组,15例),采用免疫组化方法辅以计算机图像定量分析技术,对α-SMA的表达进行观察和检测.结果α-SMA在对照组和无症状组中未见明显表达,两者间差异无显著性意义(q=0.36,P>0.05);在有症状组可见明显阳性反应,与无症状组及对照组间差异均有非常显著性意义(q=6.87,P<0.01;q=7.44,P<0.01).有症状组α-SMA的表达水平与疼痛程度呈高度正相关(rs=0.980,P<0.001).结论肌成纤维细胞及α-SMA是导致创伤性神经瘤疼痛的重要原因.
-
周期性压力下椎间盘细胞中肌动蛋白的变化及其意义
目的探讨在周期性压力下,体外培养的椎间盘细胞中的肌动蛋白的变化及其意义.方法采用10只5～6周龄、体重为25～30kg的猪的椎间盘进行体外细胞的分离和培养,对细胞施加周期谮性液压,通过对细胞的形态学观察及Western免疫印迹和免疫荧光实验,检测在周期性压力下椎间盘细胞中的肌动蛋白的变化.结果纤维环细胞和髓核细胞经1 MPa、1 Hz,持续每天3 h加压,3 d后髓核细胞的存活率大于90%,纤维环细胞的存活率大于85%,加压后的纤维环细胞和髓核细胞体积均缩小,由多角形转变为细长形.Western免疫印迹结果显示,肌动蛋白在纤维环细胞和髓核细胞中的表达均明显减少,以髓核细胞为著.免疫荧光结果显示,肌动蛋白由正常纤维环细胞和髓核细胞内的疏松排列转变为受压细胞内的紧密排列,髓核细胞的体积明显缩小,其中的肌动蛋白在细胞膜周围紧密排列.结论体外培养的单层椎间盘细胞在受力状态下,肌动蛋白的表达减少,细胞的体积缩小,并且肌动蛋白在细胞内重排列.这可能是激发细胞内或细胞表面信号传导的重要机制.
-
与雪旺细胞联合培养的成肌细胞生物学特性研究
目的 探讨体外联合培养条件下雪旺细胞对成肌细胞生物学特性的影响,为神经化人工肌肉的构建提供理论依据.方法碘酒、酒精消毒后,剥离并获取新生SD乳鼠的臂丛、坐骨神经及小腿三头肌,手术显微镜下彻底剥除其外膜、血管和脂肪,充分剪碎神经和肌肉组织,胰酶、胶原酶混合消化分离,DMEM培养基联合培养雪旺细胞与成肌细胞.倒置相差显微镜观察联合培养状态下两种细胞的形态及生长情况;3HTdR同位素标记掺入及液闪计数,每分钟射线绝对衰变数(DPM)判断雪旺细胞分
-
TGF-β、Smad信号通路蛋白及α-SMA在糖尿病肾病患者肾组织中的表达和意义
目的：检测转化生长因子（TGF）-β、Smad信号通路蛋白和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）在糖尿病肾病（DN）患者肾活检组织中的表达，探讨DN的发病机制。方法收集DN肾组织标本28例（DN组）；非DM行肾切除的正常肾组织10例为对照组。应用免疫组化方法检测TGF-β1、TGF-β受体（R）Ⅰ、TGF-βRⅡ、Smad2/3、α-SMA在肾组织中的表达。结果（1）TGF-β1、TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、Smad2/3在DN组和对照组中均有表达，前者高于后者， DN组早期光镜下肾组织未见明显异常时即有明显的高表达，而随着疾病的进展未见表达增高的现象。肾小球、肾小管出现纤维化后并不表达上述因子。（2）对照组的α-SMA仅表达于肾血管、肾小球和肾小管，而肾间质未见α-SMA表达，而DN组α-SMA在上述组织中均有表达。结论 TGF-β及Smad信号转导通路参与了DN的发病，DN可能与免疫复合物性肾小球肾炎具有相似的发病机制。
-
Akt1和Akt2基因转染对人胃黏膜上皮细胞GES-1侵袭和迁移的影响
目的:观察蛋白激酶B1(Akt1)和蛋白激酶B2(Akt2)基因转染人胃黏膜上皮细胞系GES-1后对其侵袭和迁移的影响.方法:采用脂质体法将分别含Akt1和Akt2基因全长eDNA序列的p-LXSN-Akt1(Akt1组)和p-LXSN-Akt2(Akt2组)质粒转染到GES-1细胞,以转染P-LXSN空载质粒的细胞为空载组,以正常未转染细胞为对照组,并经抗生素G418筛选抗性克隆,蛋白印迹(Westernblot)鉴定各组细胞Akt1、Akt2及基质金属蛋白酶(MMP)-2的蛋白表达水平;Transwell法分析转染后细胞的侵袭能力;用免疫荧光法观察转染后GES-1细胞丝状肌动蛋白(F-actin)的变化.结果:Akt1组和Akt2组均获得了稳定表达Akt1和Akt2基因的GES-1细胞模型;2组MMP-2蛋白表达均高于空载组和对照组(P<0.01).Transwell法显示Akt1和Akt2组GES-1细胞侵袭能力均明显增加(P<0.01).免疫荧光发现Akt1和Akt2组F-actin的聚集均增加.结论:Akt1、Akt2基因均可以通过增加细胞侵袭力和迁移力,导致GES-1细胞恶性转化.
