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温阳益心安神法对实验性心房颤动缝隙连接蛋白的干预研究
目的:探讨温阳益心安神法对房颤中缝隙连接蛋白(Cx40,Cx43)的影响及作用机制.方法:选用昆明种小鼠,采取尾静脉注射Ach-CaCl2复制AF模型,观察该复方对Cx40,Cx43在房颤心房肌表达的影响.结果:Cx40,Cx43在中药各治疗组均呈强表达,与模型组比较差异显著(P＜0.05).结论:本研究证实温阳益心安神复方可有效减轻AF中Cx40,Cx43的重构.
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温润通脉法治疗大鼠心律失常的实验研究
目的：评价温润通脉法治疗大鼠心律失常的作用及相关机制，为其临床的进一步应用提供理论依据。方法：SD雄性大鼠32只，随机分为四组，药物干预7天后，制备乌头碱诱发大鼠心律失常模型，取心脏组织，免疫印记法（ Western bloting法）检测组织缝隙连接蛋白Cx43、Cx45以及凋亡基因Bcl－2、Bax的蛋白表达含量。结果：复方组即温润通脉法能较高程度地提高组织Cx43含量；提高组织CX45表达，差异有统计学意义（P＜0．01）；复方组能提高Bcl－2含量，且比实验前（正常组）含量水平要高。结论：温润通脉能通过提高缝隙连接蛋白的含量、抑制凋亡基因的表达来发挥抗心律失常的作用。
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缝隙连接蛋白基因突变引起听力损害的分子遗传学研究进展
耳聋是一种常见的人类感觉系统缺陷,本文系统地介绍了引起耳聋并且已被鉴定的6个缝隙连接蛋白基因的定位、功能,并列举了与遗传性耳聋相关的临床表现型,展望了缝隙连接蛋白基因的重要意义和前景.
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乌头碱致心律失常机制的研究进展
乌头类中药是中医临床常用的一类温热性中药,包括川乌、草乌和附子等,其主要成分均含有乌头碱.乌头碱的有效剂量和中毒剂量相差甚微,在饮片炮制不当、煎煮时间不够、剂量过大或误服等情况下易发生中毒.中毒后常出现全身多个系统的症状,其中以心血管系统症状尤为突出,通常表现为多种致命性心律失常的重叠出现.乌头碱致心律失常机制较复杂,目前尚不十分明确.本文结合相关研究报道,对乌头碱致心律失常毒性机制,如兴奋迷走神经,影响心肌离子通道电流,影响缝隙蛋白磷酸化状态,干扰线粒体能量代谢,促进心肌细胞凋亡,进行综述.
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急性心房颤动犬缝隙连接蛋白40和43重构及胺碘酮的干预作用
目的 采用快速心房起搏致犬急性心房颤动(简称房颤)模型,观察心房肌缝隙连接蛋白40和43(Cx40、Cx43)含量的改变以及胺碘酮干预的效果.方法 18只成年杂种犬,随机等分为三组,即正常对照组、急性房颤组、胺碘酮组.快速心房起搏,对照组不起搏,胺碘酮组先静脉注射胺碘酮负荷量3 mg/kg,10～15 min内注入,后以维持量1.5 mg/kg静脉滴注进行干预,另两组给予等容量的生理盐水.连续刺激并且房颤8 h后,取右心耳组织,用Western blot 检测Cx40和Cx43的含量,用Lucifer Yellow划痕标记荧光传输技术在荧光显微镜上观察细胞缝隙连接通讯状态.结果 急性房颤组心房肌组织Cx40和Cx43含量较对照组降低(P均<0.05),胺碘酮组Cx40、Cx43含量较正常对照组低,差异有显著性(P均<0.05),较房颤组含量差异无显著性(P>0.05),胺碘酮可以改善急性房颤时细胞缝隙连接通讯的传导.结论 急性房颤犬缝隙连接蛋白40和43发生了结构重构,从而影响细胞间通讯,胺碘酮可以改善细胞间电信号传导,但不能改善缝隙连接结构重构.
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Pannexin-1在癫痫大鼠皮层的表达
目的 观察缝隙连接蛋白pannexin-1在癫痫大鼠脑内的表达情况.方法 将健康雄性SD大鼠,随机分为正常对照组和癫痫组.采用腹腔注射戊四氮建立癫痫模型,大鼠点燃后的惊厥行为按照Racine标准进行观察评分,通过免疫组织化学和Western blot的方法,比较癫痫组和对照组皮层pannexin-1的表达差异.结果 免疫组织化学染色发现癫痫组大鼠皮层内表达pannexin-1的阳性细胞数明显增多为(36.24±6.64)个,对照组为(21.36±5.48)个,两组比较差异有统计学意义(P＜0.01)；Western blot实验结果显示癫痫组大鼠皮层表达pannexin-1明显高于对照组,两者比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 癫痫发作将上调大鼠皮层内缝隙连接蛋白pannexin-1的表达,后者可能通过影响离子通道的开放以及神经递质的释放,参与癫痫异常放电的产生和扩布.
关键词： 癫痫 缝隙连接蛋白 pannexin-1 -
HCN2转染MSCs异体移植治疗完全性房室传导阻滞的实验研究
目的 构建HCN2重组载体并转染大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)以构建起搏细胞,将起搏细胞移植至完全性房室传导阻滞动物模型的左束支,从而改善心脏的传导功能.方法 体外分离并培养大鼠骨髓间充质干细胞,将体外构建的HCN2重组载体用罗氏非脂质体转染试剂转染到骨髓间充质干细胞内.采用射频消融的方法制犬的完全性房室传导阻滞模型,同时置入临时起搏器,调节起搏心率60次/分予以保护.将体外构建起搏细胞原位植入动物模型.起搏细胞移植成功后28天将动物处死,进行组织学研究.结果 体外分离培养的MSCs在含10％胎牛血清的DMEM培养基中生长良好,能够满足细胞转染及转染后细胞移植的需求.MSCs转染质粒后20 h荧光显微镜下观察,可见绿色荧光蛋白的表达,测定转染效率约为30％.组织学研究显示,干细胞可以在宿主体内存活,并表达缝隙连接蛋白CX43、CX45.结论 MSCs转染HCN2后可以有效表达HCN2通道蛋白,MSCs重组细胞心脏移植后能够存活并表达缝隙连接蛋白CX43、CX45.
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缝隙连接蛋白家族在消化道肿瘤中的研究进展
缝隙连接介导相邻细胞间的信息、能量和物质的交换,它主要由缝隙连接蛋白(connexin)构成.Connexins表达异常与消化道肿瘤的发生、发展关系密切.上调connexin蛋白的表达,恢复细胞间缝隙连接通讯可抑制肿瘤的生长和转移.因此,改善肿瘤细胞间缝隙连接可为肿瘤治疗开拓新思路.键词:消化道肿瘤;缝隙连接蛋白;GJIC
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心房肌缝隙连接蛋白40、43表达改变与心房颤动的关系
目的:研究心房颤动患者心房肌缝隙连接蛋白(Cx)40、43表达的改变,探讨Cx在房颤发生与维持中的作用.方法:39例接受开胸手术者分为房颤组和窦性心律组,手术时取右心耳及左心房各约100mg,采用Western blot与免疫组织化学技术,检测心房肌Cx40、Cx43表达量与分布的改变.结果:房颤组Cx40表达量在左心房、右心耳较窦性心律组高,Cx43表达量在左心房较窦性心律组高,在右心耳无差异.免疫组化显示房颤组Cx40、Cx43均分布紊乱,聚集于胞浆或核周.结论:房颤患者心房肌Cx40、Cx43表达增高,且分布异常,提示心房肌Cx40、Cx43表达改变与心房颤动的发生与维持有关.
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冠状动脉支架术后再狭窄中血管平滑肌细胞表型转换的研究
目的:通过制作猪冠状动脉支架术后再狭窄模型,研究冠状动脉支架内再狭窄时平滑肌细胞表型的变化. 方法:将12只家猪随机分为正常对照组和支架组,每组各6只.正常对照组进行假手术,不做其他处理.支架组家猪于冠状动脉前降支和回旋支各置入裸支架1枚(微创Firebird).取30 d后经冠状动脉造影确定发生再狭窄的血管段,HE染色观察组织形态;取中层平滑肌细胞培养,电镜观察细胞形态与结构;Western blot测定缝隙连接蛋白(connexin,Cx)43、Cx40、a-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、S100钙结合蛋白A4 (S100A4)的表达. 结果:支架组血管内膜显著增厚,中层平滑肌细胞以长菱形平滑肌细胞(R-SMC)为主,而对照组以纺锤形平滑肌细胞(S-SMC)为主;支架组Cx43、S100A4表达较对照组增强,Cx40、α-SMA表达较对照组降低(P＜0.01).结论:经皮冠状动脉介入术后S-SMC向R-SMC的转换可能参与了再狭窄过程.
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合并发作性脑部症状的遗传性运动感觉性神经病3例临床报道及文献复习
目的 总结合并发作性脑部症状的遗传性运动感觉性神经病又称Charcot-Marie-Tooth病(CMT1X)的临床特征,结合文献复习探讨其出现发作性脑部症状的可能病因.方法 回顾分析3例经基因确诊为CMT1X患者的临床和影像资料,结合中国类似的5例报道进行总结分析.结果 共计8例CMT1X患者起病年龄在9～23岁,均伴有发作性脑部症状,同时合并有周围神经系统受累的临床症状体征或电生理表现,发作期6例患者头颅MRI提示双侧对称性脑白质病变.8例患者均存在缝隙连接蛋白β1(GJB1)基因突变.结论 合并发作性脑部症状及周围神经病变患者临床需考虑CMT1X可能,出现发作性脑部症状的原因可能与缝隙连接通道关闭导致水弥散障碍有关.
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高压氧对家兔随意皮瓣血管内皮生长因子和缝隙连接蛋白的影响
目的 探讨高压氧对家兔随意皮瓣毛细血管增殖作用的机制.方法 建立家兔背部随意皮瓣模型,予高压氧治疗,观察第3天和第7天时对照组和高压氧组皮瓣中毛细血管密度及血管内皮细胞生长因子(VEGF)、缝隙连接蛋白(CX43)的含量变化情况.结果 高乐氧组皮瓣毛细血管密度(第3天11.63±2.94,第7天13.84±3.49)明显高于对照组(第3天9.13±2.00.第7天10.51±3.01)(第3天时P<0.05,第7天时P<0.01);第3天和第7天时高压氧组皮瓣VEGF(第3天5.50±1.68,第7天5.81±1.64)表达明显高于对照组(第3天4.55±1.06,第7天4.63±1.24)(分别为P<0.01);高压氧组皮瓣CX43(第3天4.08±0.88,第7天4.60±0.97)表达明显高于对照组(第3天3.28±0.68,第7天3.60±1.01)(第3天时P<0.01,第7天时P<0.05).结论 高压氧治疗促进家兔随意皮瓣毛细血管增殖的作用机制之一可能是通过增加皮瓣组织中VEGF、CX43的表达而促进新生毛细血管形成.
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高压氧对急性脊髓损伤大鼠脊髓组织血管内皮生长因子及缝隙连接蛋白表达的影响
目的：通过观察高压氧（ hyperbaric oxygen ， HBO ）对急性脊髓损伤（ spinal cord injury ， SCI）大鼠的受损脊髓组织血管内皮生长因子（ vascular endothelial growth factor ， VEGF）及缝隙连接蛋白（connexin43， CX43）表达的影响，探讨HBO促进脊髓损伤神经功能恢复的作用机制。方法健康成年SD大鼠160只，按数字表法随机分为4组，每组40只。 SCI组：采用改良Allen＇s方法，使用MASCIS脊髓损伤专用撞击器建立 SCI 模型；SCI ＋HBO 组：SCI 造模后辅助以 HBO 处理；假手术对照组（ sham surgery， SH组）：仅行椎板切除术，不造成SCI；SH＋HBO组：椎板切除术后辅助以HBO处理。每组再随机均分为1、3、7和14 d 4个亚组，每亚组10只。损伤后不同时间点，采用运动功能评分（ Basso， Beattie and Bresnassian locomotors rating scale ，BBB）评价后肢运动功能；手术取出受损节段脊髓组织，采用免疫组化法检测VEGF及CX43的表达。结果术后各时间点， SCI组和SCI＋HBO组BBB评分明显低于SH组和SH＋HBO组（P＜0．01）；术后7 d和14 d，SCI ＋HBO组BBB 评分（7 d：4．67±1．97，14 d：10．83±2．23）明显高于SCI组（7 d：1．83±0．75，14 d：6．67±2．16），差异有统计学意义（P＜0．05）。相对于SH组和SH＋HBO组，SCI组和SCI＋HBO组在各时间点脊髓组织中VEGF和CX43表达明显增加（P＜0．01）。 SCI＋HBO组在3、7、14 d脊髓组织中VEGF表达（3 d：81．16±10．37，7 d：96．00±8．50，14 d：84．67±8．39）较SCI组（3 d：71．68±8．45，7 d：81．92±9．63，14 d：73．30±7．96）显著增加，差异有统计学意义（P＜0．05）；SCI＋HBO组在3、7 d脊髓组织中CX43表达（3 d：72．46±7．52，7 d：67．10±8．06）较SCI组（3 d：83．65±8．70，7 d：77．64±7．78）显著减少，差异有统计学意义（P＜0．05），而术后14 d，SCI＋HBO组脊髓组织中CX43表达（74．81±10．05）明显高于SCI组（66．74±8．30）（P＜0．05）。结论 HBO通过改变受损脊髓组织中VEGF和CX43的表达水平而促进SCI后的神经功能恢复。 HBO治疗可明显促进SCI大鼠后肢运动功能的恢复。
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脊髓缝隙连接蛋白-30在大鼠吗啡耐受形成中的作用
目的 观察鞘内注射针对脊髓缝隙连接蛋白-30(CX30)的小干扰RNA(siRNA)对大鼠吗啡耐受形成的影响及其相关的分子机制.方法 雄性SD大鼠48只,随机分为空白对照组(Ⅰ组)、吗啡耐受组(Ⅱ组)、错配siRNA对照组(Ⅲ组)、CX30 siRNA处理组(Ⅳ组),所有大鼠鞘内置管,手术后确定导管位置并记为第0天.第1天上午测定大鼠热刺激缩足反应基础潜伏期(PWTL)(P1)及背部皮下注射吗啡5 mg/kg后30 min的PWTL(P2),计算30 min的大可能镇痛效应比值MPE.第2～8天上午8:30,Ⅰ、Ⅱ组鞘内注射DPEC溶剂15μl,Ⅲ组鞘内注射错配siRNA 15μl,Ⅳ组鞘内注射CX30 siRNA 15μl;9:00及17:00Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各组背部皮下注射吗啡10 mg/kg,Ⅰ组注射等量生理盐水.第9天行为学测试计算MPE,方法同第1天.随后处死大鼠取腰段脊髓采用West-ern blot检测CX30、ERK及p-ERK蛋白的表达,免疫荧光分析星型胶质细胞标记物GFAP的表达.结果 第9天,与Ⅰ组比较,其余各组P2及MPE值明显降低(P＜0.05);与Ⅱ组比较,Ⅳ组P2及MPE值明显升高(P＜0.05).与Ⅰ组比较,其余各组p-ERK及CX30表达明显升高(P＜0.05);与Ⅱ组比较,Ⅳ组p-ERK及CX30表达明显降低(P＜0.05).与Ⅰ组比较,其余各组GFAP的表达明显增多(P＜0.05),其中Ⅱ组与Ⅲ组GFAP表达多;与Ⅱ组比较,Ⅳ组GFAP表达明显降低(P＜0.05).结论 鞘内注射CX30 siRNA可以部分缓解大鼠吗啡耐受的形成,其机制可能与抑制脊髓CX30的表达,ERK磷酸化的下调,减少星型胶质细胞的活化有关.
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癫痫大鼠脑组织缝隙连接蛋白32的表达及甘珀酸对其的影响
目的 探讨癫痫大鼠脑组织缝隙连接蛋白32 (Cx32)的表达及缝隙连接阻断剂甘珀酸(CBX)对其的影响.方法 72只SD大鼠随机分为正常对照组、癫痫组、癫痫+CBX组及癫痫+生理盐水(NS)组.癫痫组又分为(癫痫后)1h、1d、3d、7d亚组,癫痫+CBX组和癫痫+NS组分别分为3d、7d亚组.用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射制作癫痫大鼠模型.癫痫造模成功后,癫痫+CBX组给予CBX 10 mg/(kg·d)腹腔注射,癫痫+ NS组给予等量NS.采用免疫组化染色和实时荧光定量逆转录-PCR分别检测大鼠海马区、皮质区Cx32蛋白及mRNA的表达水平.结果 与正常对照组比较,癫痫组、癫痫+NS组各时间点亚组海马区和皮质区Cx32蛋白、mRNA表达水平及癫痫+CBX组3d亚组海马区Cx32蛋白的表达水平均显著增高(均P＜0.05)；以癫痫组1d亚组高(P＜0.05).与癫痫+NS组比较,癫痫+CBX组3d亚组皮质区、7d亚组海马区和皮质区Cx32蛋白及mRNA的表达水平均显著降低(均P＜0.05).结论 癫痫大鼠脑组织Cx32的表达增高,CBX干预能明显抑制其表达.Cx32可能参与了癫痫的发生和发展过程.
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缝隙连接蛋白:肿瘤治疗的新视角
缝隙连接蛋白(Connexin,Cx)能够形成缝隙连接通道进行细胞间通讯,这是细胞之间直接进行信息交换的重要通道.而对于缝隙连接蛋白本身,在细胞的生长、分化、凋亡甚至肿瘤的形成和发展过程中也有着重要的调节作用.缝隙连接蛋白在多种肿瘤发展的不同阶段会出现表达水平的差异,并能与体内多种和细胞周期或肿瘤形成相关的蛋白发生相互作用,其自身也涉及多种调节与被调节机制.本文主要从缝隙连接蛋白与肿瘤形成和发展的关系,缝隙连接蛋白的基本作用机制以及其在抗肿瘤药物筛选及肿瘤治疗应用等方面进行论述.
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尼莫地平对阿尔茨海默病大鼠认知功能的影响
目的 探讨缝隙连接(GJ)在阿尔茨海默病(AD)发病中的作用,研究尼莫地平对于认知功能的影响及对脑内缝隙连接蛋白(Cx)的调节作用.方法 采用脑室内注射Aβ25-35制备的大鼠阿尔茨海默病模型,利用Y迷宫检测大鼠的学习记忆功能,研究尼莫地平对于认知功能的影响,采用免疫印迹方法检测大鼠海马Cx43的表达水平.结果 同AD组相比,尼莫地平治疗大鼠Y迷宫中正确反应次数增多,说明尼莫地平可改善AD大鼠的学习记忆功能.与对照组相比,AD大鼠海马Cx43蛋白表达增高,而尼莫地平可以降低AD大鼠海马Cx43表达水平.结论 钙通道阻滞剂尼莫地平可以改善AD大鼠的学习记忆功能,这可能与其影响海马Cx43表达水平有关.
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缝隙连接蛋白与中枢系统疾病研究进展
缝隙连接作为电突触的结构基础,相邻细胞的通讯通道,近年来倍受关注.缝隙连接蛋白参与了多种疾病的发生发展过程.文章就近十年的文献,对缝隙连接蛋白与中枢系统疾病之间的研究进行回顾及总结.
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C-kit、SCF、Cx43在先天性巨结肠中的表达及作用
目的:探讨酪氨酸激酶膜受体基因(C-kit)、干细胞因子(SCF)与缝隙连接蛋白(Cx43)在先天性巨结肠发病机制中的作用.方法:收集68例先天性巨结肠(HD)患儿手术切除标本的存档蜡块,根据HE染色结果,将神经节细胞正常的扩张段标本设为扩张组,无神经节细胞的狭窄段标本设为狭窄组.并收集8例无消化道畸形新生儿尸检结肠组织作为对照.用免疫组织化学EliVision法检测C-kit、SCF及Cx43蛋白的表达,原位杂交法检测 C-kit mRNA的表达.结果:与对照组比较,HD扩张组中C-kit、SCF、Cx43的表达差异无统计学意义(P＞0.05),狭窄组中C-kit、SCF、Cx43的表达差异有统计学意义(P＜0.05).结论:先天性巨结肠的发生与C-kit、SCF及Cx43表达减少有关.
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晚期糖基化终产物对内皮细胞Connexin40基因表达的影响
目的 研究晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)对体外培养的人脐静脉内皮细胞缝隙连接蛋白Connexin40 基因表达的影响.方法 D- 葡萄糖孵育牛血清白蛋白制备糖基化牛血清白蛋白作为晚期糖基化终产物.体外常规培养的人脐静脉内皮细胞分为4组,分别为对照组、100mg/L AGEs 干预组、200mg/L AGEs 干预组和400mg/L AGEs 干预组,干预24h 后通过RT-PCR 方法检测各组Connexin40 基因mRNA 的表达有无差异;通过免疫细胞荧光方法检测对照组和200mg/LAGEs 干预组之间Connexin40 基因蛋白的表达水平有无差异.结果 不同浓度(100、200、400mg/L)的AGEs 干预24h 均能引起人脐静脉内皮细胞Connexin40 基因mRNA 的表达减少(均P＜0.01);200mg/L 的AGEs 干预24h 引起人脐静脉内皮细胞Connexin40基因的蛋白表达减少(P＜0.01).结论 AGEs 体外短期干预可引起人脐静脉内皮细胞Connexin40 基因的mRNA 和蛋白表达水平减少.
关键词： 缝隙连接蛋白 Connexin40 晚期糖基化终产物 人脐静脉内皮细胞 基因表达
