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"益肾调督"电针法对阿尔茨海默病小鼠大脑海马老年斑形成的影响
目的:观察"益肾调督"电针法对APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(AD)小鼠海马区老年斑(SP)及其相关蛋白表达的影响,探讨电针改善AD的机制.方法:APP/PS1双转基因AD小鼠随机分为模型组、电针两疗程组和电针三疗程组,每组6只;6只雄性野生型小鼠为对照组.给予各电针组小鼠"百会"和双侧"肾俞"电针治疗,每天1次,7 d为1个疗程,分别进行2个或3个疗程.Morris水迷宫实验观察各组小鼠记忆和空间探索能力,免疫组化法检测海马区SP的表达情况,Western blot法检测海马区淀粉样前体蛋白(APP)、β-分泌酶1(BACE 1)和胰岛素降解酶(IDE)的表达水平.结果:与对照组相比,模型组小鼠的逃避潜伏期和搜索路径均明显增加(P<0.01,P<0.05),穿越原平台的次数明显减少(P<0.01);与模型组相比,两治疗组小鼠的第5天逃避潜伏期和第4天、第5天搜索路径均明显缩短(P<0.01),穿越原平台的次数明显增加(P<0.01);与电针两疗程组相比,电针三疗程组的第5天逃避潜伏期和第4天、第5天搜索路径也明显缩短(P<0.05,P<0.01),穿越原平台的次数明显增加(P<0.05).对照组小鼠海马区无SP阳性斑块;模型组SP数目较对照组明显增加(P<0.01);与模型组相比,两治疗组海马区的SP数目均明显减少(P<0.01);与电针两疗程组相比,电针三疗程组SP数目明显减少(P<0.01).模型组小鼠海马区APP、BACE 1表达水平明显高于对照组(P<0.01),IDE表达水平明显低于对照组(P<0.01);两治疗组海马区APP、BACE 1表达水平明显低于模型组(P<0.01),IDE表达水平明显高于模型组(P<0.01);电针三疗程组海马区APP、BACE 1表达水平明显低于电针两疗程组(P<0.01,P<0.05),IDE表达水平明显高于电针两疗程组(P<0.05).结论:"益肾调督"电针法可降低AD小鼠海马区APP、BACE 1表达,提高IDE的表达,从而减少海马区SP的沉积,改善其学习记忆和空间探索能力.
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黄芪总苷防治地塞米松诱导小鼠记忆障碍和对APP及β-分泌酶mRNA表达的研究
目的:探讨黄芪总苷(AST)对地塞米松(DEX)诱导小鼠记忆障碍的保护作用及对脑内淀粉样前体蛋白(APP)及其mRNA,α-分泌酶和β-分泌酶mRNA表达的影响.方法:将小鼠随机分成6组:正常对照组、模型组、AST(10,20,40 mg·kg~(-1))组和阳性药(人参皂苷Rg_1,6.5 mg·kg~(-1))组.用DEX(5 mg·kg~(-1),ig,21 d)建立小鼠学习记忆损伤模型,各用药组于造模同时ig给予相应药物,模型组和对照组ig等容积蒸馏水.用Morris水迷宫方法测定小鼠学习记忆功能;用RT-PCR方法检测脑组织中APP、α-分泌酶和β-分泌酶mRNA表达;用免疫组织化学方法观察大脑皮质,海马CA1,CA3区APP表达.结果:与模型组比较,AST(20,40 mg·kg~(-1))能明显改善小鼠记忆功能(P＜0.05,P＜0.01);降低脑组织内APP,β-分泌酶mRNA的表达(P＜0.05),升高脑组织内α-分泌酶mRNA的表达(P＜0.05);减少APP在大脑皮质及海马CA1区的表达(P＜0.05).结论:AST能改善DEX诱导的小鼠记忆障碍,其机制可能与抑制脑内APP及其mRNA、β-分泌酶mRNA表达,促进α-分泌酶mRNA表达有关.
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泛素-蛋白酶体系统对 Aβ生成与代谢调控作用的研究进展
阿尔茨海默症（AD）是中枢神经系统退行性疾病，目前其确切发病机制未明，也无有效的治疗手段。淀粉样蛋白级联假说认为，β淀粉样蛋白（Aβ）是 AD 形成的关键因素。泛素-蛋白酶体系统（UPS）是胞内主要蛋白质质量控制系统，近研究发现其可调控 Aβ的生成和代谢，进而参与AD 的发生。UPS 可通过调控泛素化 APP、β-分泌酶及γ-分泌酶各成分的代谢参与 Aβ生成；同时UPS 也是 Aβ主要降解途径之一；而 Aβ也可抑制 UPS 系统蛋白酶体活性。本文对此进行了综述。
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淫羊藿黄酮对APP695基因转染神经细胞β-淀粉样肽及β-分泌酶的影响
目的 观察淫羊藿黄酮(EF)对APP695基因转染SH-SY5Y细胞中β-淀粉样肽(Aβ)水平的影响.方法 利用免疫沉淀+Western印迹法、放射免疫法分别检测细胞培养上清液和细胞裂解液中的Aβ水平.通过测定β-分泌酶(BACE1)切割荧光底物所得的荧光值检测BACE1活性.结果 EF 2.5～25 g/ml与APP695基因转染SH-SY5Y细胞模型共孵育24 h能明显降低模型细胞培养液中的Aβ含量( P<0.05, P<0.01).体外试验中EF 50 g/ml对BACE1活性的抑制率为95.0%.结论 EF能降低APP695基因转染细胞生成和分泌Aβ.
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救脑益智胶囊对D-半乳糖老化小鼠海马神经元Aβ及其相关蛋白表达的影响
目的观察中药救脑益智胶囊对D-半乳糖老化小鼠(DGAM)海马神经元β-淀粉样肽(β-amyloid,Aβ)及其相关蛋白表达的影响.方法采用免疫组织化学染色和免疫印记方法,检测DGAM模型海马神经元Aβ、β-分泌酶、内质网Aβ结合蛋白和早老蛋白-1的表达水平,并观察中药救脑益智胶囊对DGAM的保护作用.结果对照组小鼠海马CA1区神经元有少量Aβ及其相关蛋白表达,而DGAM海马CA1区神经元Aβ及其相关蛋白表达水平明显增加,与对照组相比差异有显著性(P<0.01),中药组上述各种蛋白的表达与对照组相比差异无显著性.结论 DGAM海马神经元存在Aβ及其相关蛋白表达的上调,中药救脑益智胶囊可明显改善模型动物中上述蛋白的异常表达,对神经元具有一定的营养和保护作用.
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亚低温对颅脑创伤大鼠脑组织中β-分泌酶表达的影响
目的 研究亚低温对大鼠颅脑创伤(TBI)后β-分泌酶(BACE)的影响.方法 应用液压冲击装置制作大鼠颅脑创伤模型,实验分为假手术组、创伤常温组(37℃)和创伤亚低温组(32℃),每组12只大鼠.采用免疫组织化学和免疫荧光法检测BACE表达部位,采用RT - PCR和免疫印迹法研究BACE mRNA和蛋白表达水平.结果 与假手术组比较,创伤常温组大鼠脑组织BACE免疫阳性细胞数明显增多,BACE mRNA和蛋白表达上升(P＜0.05).但是,可以看出BACE在给予亚低温处理后的免疫阳性细胞数量以及蛋白水平显著低于常温处理组(P＜0.05),与假手术组比较差异无统计学意义.结论 亚低温可以通过降低颅脑创伤后BACE表达水平来减轻继发性脑损伤程度,起到神经保护作用.
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天麻素抑制小鼠大脑内Aβ斑块形成及其作用机制
观察天麻素对5×FAD阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型小鼠脑内Aβ纤维斑块的影响,并利用117模型细胞(过表达Aβ和β-分泌酶)研究其可能的作用机制.5×FAD小鼠随机分为天麻素(gastrodin,GAS)高剂量(200 mg·kg-1·d-1)、中剂量(100 mg·kg-1·d-1)及低剂量(50 mg·kg-1·d-1),并设置5×FAD阳性小鼠对照组及5×FAD阴性小鼠对照组.用药3个月后,用Morris水迷宫检测小鼠行为学变化,ELISA法检测小鼠脑匀浆中Aβ含量,免疫组化观察5×FAD小鼠脑内海马区及皮层区Aβ斑块.天麻素以不同的浓度(10～100 μmol·L-1)作用于117细胞,分别检测细胞内外Aβ含量变化,分析细胞内β-分泌酶转录水平和蛋白水平的变化,以及细胞凋亡、细胞活力的变化情况.结果显示:与5×FAD阳性对照组相比,天麻素高剂量组(GAS-H)平台寻找时间缩短50.60％,在目标象限逗留时间延长2.25倍;脑匀浆中Aβ含量下降55.74％;脑内Aβ斑块在海马区减少93.28％,在皮质区减少88.88％;117细胞实验结果表明,天麻素在100 μmol·L-1时细胞内外Aβ含量分别降低63.1％和49.1％,且降低的效果呈浓度依赖性;天麻素在100μmol·L-1时细胞β-分泌酶转录水平降低32.9％;50μmol·L-1时细胞β-分泌酶蛋白表达水平降低47.9％.结果提示:天麻素可抑制5×FAD鼠脑内Aβ纤维斑块,同时可明显改善其学习记忆及认知能力.初步研究其机制,发现可能与抑制β-分泌酶的表达进而抑制Aβ及其纤维斑块的形成有关.
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黄芩苷对β-淀粉样蛋白25-35引起新生大鼠原代海马神经细胞损伤的保护作用
目的 研究黄芩苷(BCL)对β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)引起新生大鼠原代海马神经细胞损伤的保护作用.方法 分离新生大鼠海马神经细胞并进行原代培养后,将25μmol·L-1 Aβ25-35加入到低、中、高3个质量浓度BCL(25,50,100 mg·mL-1)预处理2h的细胞培养液中,培养24h后,以四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率;用试剂盒测定培养液中丙二醛(MDA)的含量和乳酸脱氢酶(LDH)的释放量及细胞内β-分泌酶的活性.结果 模型组的细胞存活率(73.51％)与空白组细胞存活率(100％)比较显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05);低、中、高3个质量浓度实验组的细胞存活率分别为97.88％,96.94％,94.04％,与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05).与模型组的MDA含量(3.94±0.63) μmol·L-,高质量浓度实验组MDA含量显著降低为(3.02±0.57)μmol·L-1,差异有统计学意义(P＜0.05);与模型组的LDH的释放量(409.67±93.78)U·L-1比较,中、高2个质量浓度实验组的LDH的释放量分别为(334.41±91.43),(307.65±82.67)U·L-1,差异有统计学意义(P＜0.05);与模型组的β-分泌酶活性(2.32×104±119.47)u比较,中、高2个质量浓度实验组的β-分泌酶活性分别为(2.31×104±114.78),(2.29×104±99.62)u,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 BCL对Aβ25-35引起的新生大鼠原代海马神经细胞的损伤具有一定的保护作用.
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戊二酰亚胺类抗生素S-632A对D-半乳糖老化小鼠海马神经元Aβ及其相关蛋白表达的影响
目的:观察戊二酰亚胺类抗生素S-632A对D-半乳糖老化小鼠模型(DGAM)海马神经元β-淀粉样肽(β-amyloid,Aβ)及其相关蛋白表达的影响.方法:采用免疫组织化学染色和免疫印记方法,检测DGAM海马神经元Aβ、β-分泌酶(Beta-site APP cleaving enzyme,BACE)、内质网Aβ结合蛋白(Endoplasmicreticulum amyloid β peptide binding protein,ERAB)和早老蛋白1(Presenilin-1,PS-1)的表达水平,并观察应用戊二酰亚胺类抗生素S-632A对DGAM海马神经元的保护作用.结果:对照组小鼠海马神经元Aβ及其相关蛋白BACE,ERAB和PS-1表达量少,而DGAM小鼠海马神经元Aβ及其相关蛋白表达水平明显增加,与对照组比较差异具有高度显著性(P<0.01),S-632A组上述各种蛋白的表达结果与对照组接近.结论:DGAM小鼠海马神经元存在着Aβ及其相关蛋白BACE,ERAB和PS-1表达的上调,S-632A可明显改善模型动物中上述蛋白的异常表达,对小鼠神经元具有营养和保护作用.
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黄芪皂苷抑制HEK293sw细胞Aβ生成的机制研究
目的:探讨黄芪皂苷(AST)抑制HEK293sw细胞一淀粉样肽(Aβ)生成的作用机制.方法:采用HEK293sw细胞,常规培养后加入不同浓度(0,0.1,1和10μmol·L,'-1>)AST处理,荧光法测定β-分泌酶活力,并用Western blot和RT-PCR技术检测淀粉样前体蛋白(APP)和β-位点APP切割酶1(BACE1)的表达.结果:在HEK293sw细胞模型上,AST终浓度1和10 μmol·L-1显著降低β-分泌酶活力.1和10 μmol·L-1 AST对APP的蛋白和mRNA表达无影响,但对BACE1的蛋白水平都有降低作用,同时也显著降低mRNA的水平.结论:AST可能通过抑制β-分泌酶而降低AB的产生.
关键词： 黄芪皂苷 β-淀粉样肽 淀粉样前体蛋白 β-分泌酶 β-位点APP切割酶1 -
β-分泌酶抑制剂抗阿尔茨海默病研究进展
阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD),又称老年痴呆症,是一种神经系统退行性疾病,在老年人中发病率越来越高,是痴呆病中常见的一类.其临床主要表现为记忆力减退、认知功能障碍,同时影响日常生活.对AD的发病原因并未有明确解释,其中β-淀粉样蛋白聚集被认为是导致AD的重要因素.β-分泌酶(β-site APP cleaving enzyme,BACE)在β位点裂解β淀粉样蛋白前体蛋白(β-amyloid precurgor pro-tein,APP)产生β-淀粉样蛋白(Amyloid protein,Aβ),β-分泌酶影响Aβ的产生.因此,抑制BACE或减少Aβ的产生已经成为防治AD的主要研究方向.目前,对于AD的治疗存在多种假说,是以AD治疗靶点为主,对AD治疗的方法和药物进行研究.
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基于羟基亚乙基的β-分泌酶抑制剂的合成
目的深入探讨基于羟基亚乙基二肽的β-分泌酶抑制剂的合成方法.方法综合使用多种有机合成反应来合成拟肽类β-分泌酶抑制剂,包括亲核性加成反应、有机金属试剂协助的取代反应、催化氢化反应、传统多肽偶联反应等.结果以目标化合物之一化合物13作为模型物,通过成功合成化合物13建立了反应条件优化的合成方法.结论本文建立的合成方法可用于构建β-分泌酶抑制剂化学库,发现新的有效化合物.
关键词： β-分泌酶 拟肽类 羟乙基二肽电子等排体 合成 -
铅对小鼠海马β-位点-淀粉样前体蛋白剪切酶-1和Bax及β淀粉样蛋白42蛋白表达以及学习记忆能力的影响
目的 探讨乙酸铅对小鼠海马β-位点-淀粉样前体蛋白剪切酶-1(β-site-APP cleavage enzyme-1,BACE-1)、Bax、β淀粉样蛋白42( β-amyloid protein,Aβ42)蛋白表达以及学习记忆能力的影响.方法 将44只6月龄SPF级雄性C57BL/6小鼠随机分成4组,分别为对照(生理盐水)组和低(10 mg/kg)、中(30 mg/kg)、高(60 mg/kg)剂量乙酸铅染毒组,每组11只.采用腹腔注射方式进行染毒,染毒容量为20 ml/kg,隔日染毒1次,共注射7次.采用Western blot法检测小鼠海马组织内BACE1、sAPPβ和Bax蛋白的表达情况;采用ELISA法检测Aβ42蛋白的表达情况;采用免疫组化双标染色观察BACE1和Neuronal ClassⅢβ-Tubulin(Tuj1)阳性定位情况;末次染毒后,采用Morris水迷宫实验检测小鼠的学习记忆能力变化.结果 与对照组相比,30和60 mg/kg乙酸铅染毒组小鼠海马内BACE1、sAPPβ、Bax和Aβ42蛋白的表达水平均显著升高,差异有统计学意义(P＜0.01);而10 mg/kg乙酸铅染毒组小鼠海马内BACE1、sAPPβ、Bax蛋白的表达水平无显著改变.且随着乙酸铅染毒剂量的升高,小鼠海马内BACE1、sAPPβ、Bax和Aβ42蛋白的表达水平均呈上升趋势.BACE1阳性和Tuj1阳性存在共定位现象.与对照组比较,30、60 mg/kg乙酸铅染毒组小鼠的逃避潜伏期显著延长,穿越平台次数显著减少,差异有统计学意义(P＜0.05),10 mg/kg乙酸铅染毒组与对照组差异无统计学意义.结论 铅暴露可引起海马BACE1和Bax及Aβ42蛋白表达上调,并可引起小鼠学习记忆能力降低.
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铁过载对神经元功能的调控作用研究
铁离子是维持正常生命活动所必须的微量元素,参与了机体多项基础生理过程,新近的研究发现中枢神经系统铁离子紊乱与多种神经退行性疾病包括阿尔茨海默病和帕金森病的发生发展密切相关.传统观点认为,铁离子主要通过氧化应激或铁响应元件调节神经元生理和病理功能,然而目前关于铁过载所致神经功能改变的其他调控机制研究仍然相当缺乏.本研究首先应用铁过载诱发体内外神经损伤模型证实铁过载可以诱发神经细胞突触断裂,线粒体功能下降以及认知功能障碍.其次,结合应用非标记质谱定量蛋白组学在离体原代皮层神经元铁过载模型中深入进行机制探讨.质谱共检出的差异表达蛋白中82个差异蛋白参与神经系统发育和功能维持,112个差异蛋白为神经疾病相关蛋白,并证实包括 β-淀粉样蛋白前体蛋白(Amyloid precursor protein,APP)、转铁蛋白受体1等七个铁代谢相关蛋白受到铁过载调控.我们进一步对铁过载神经元APP的调控作用进行了系统研究,证实铁过载促进APP非淀粉样剪切,具体表现为铁处理组CTFα显著增加,但sAPPα分泌受阻,表现为sAPPα分泌减少而细胞分布增加;同时,铁过载抑制神经元APP淀粉样剪切,表现为CTFβ水平明显减少,sAPPβ和Aβ分泌亦显著减少.研究进一步揭示铁过载通过直接和间接方式抑制神经元β-分泌酶活性,三价铁剂柠檬酸铁铵可直接抑制β位分解酶1(beta-secretase 1,BACE1)酶活,也可通过促进sAPPα与BACE1的相互作用间接抑制淀粉样剪切.鉴于分泌形式sAPPα和Aβ的重要生理和病理功能,且铁过载减少这二者的分泌,提示sAPPα和Aβ的功能障碍有可能是铁过载所致神经损伤的机制之一.本研究系统证实了铁过载对神经元功能的影响,采用组学手段揭示了铁过载对神经元多个重要功能蛋白的影响,拓展了对铁过载相关神经损伤的认识,为铁代谢紊乱参与中枢神经系统疾病发生发展的这一理论提供支持.
关键词： 阿尔茨海默病 铁过载 蛋白组学 β-淀粉样蛋白前体蛋白 β-分泌酶 -
N-甲基异噻唑酮取代的间苯二甲酸衍生物的设计、合成及其抑制β-分泌酶活性
目的 发现新结构的β-分泌酶抑制剂.方法 基于β-分泌酶抑制剂的构效关系,设计合成了含羟乙胺结构片段的间位1,1-二氧代-N-甲基-2,3-(2H)-异噻唑酮取代的间苯二甲酸衍生物；采用时间分辨荧光法检测化合物对β-分泌酶的抑制活性.结果 合成了8个目标化合物,利用MS和1H-NMR对化合物的结构进行了确证,利用HPLC对化合物的纯度进行了测定,利用旋光仪测定了化合物的比旋光度；活性数据显示有2个化合物对β-分泌酶有较强的抑制作用,其中化合物2c的IC50值为3.7 nmol-L-1.结论 发现了新的β-分泌酶抑制剂,分析了其初步的构效关系,为进一步进行结构优化进而发现活性更好的化合物奠定了基础.
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β-分泌酶抑制剂的研究进展
β-分泌酶是近年来发现的治疗老年痴呆症的新靶点.抑制β-分泌酶的活性能从上游控制关键致病因素β-淀粉样多肽的生成,从而达到治疗老年痴呆症的目的.该文对β-分泌酶抑制剂的研究进展进行了综述.指出以后的工作重点是进行系统深入的生物体内评价,解决药物透过血脑屏障和生物利用度等问题.
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以分泌酶为靶点的老年痴呆防治药物研究进展
以α-分泌酶、β-分泌酶和γ-分泌酶为靶点是发现新型老年痴呆症防治药物的重要策略.该文对近年来α-分泌酶激动剂、β-分泌酶抑制剂和γ-分泌酶抑制剂/调控剂的研究进展进行综述.
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基于分子片段药物发现技术的β-分泌酶抑制剂研究进展
β-分泌酶抑制剂是开发新型阿尔茨海默病治疗药物的重要研究方向,基于分子片段的药物发现技术是近年来发展的一种基于靶标的药物研究策略.本文综述了近年来利用这一技术发现β-分泌酶抑制剂的研究进展.
关键词： 基于分子片段的药物发现 β-分泌酶 抑制剂 -
TO901317对海马神经元β-分泌酶表达及β-淀粉样肽生成的影响
目的 研究肝X受体(LXR)配体TO901317对海马神经元淀粉样前体蛋白(APP)、α-分泌酶(ADAM10)和β-分泌酶(BACE1)mRNA表达的影响及与β-淀粉样肽(Aβ)生成的关系.方法 大鼠海马神经元培养至第7天,在饲养液中加入2.0μmol/LTO901317,继续培养48h.应用RT-PCR方法研究海马神经元APP、ADAM10和BACE1等基因的mRNA的表达,放免法检测培养液Aβ含量的变化.结果 TO901317降低海马神经元APP和BACE1 mRNA表达(P＜0.01),减少培养液Aβ含量(P＜0.01),但不影响ADAM10 mRNA表达(P＞0.05).结论 TO901317激活LXR,能通过降低APP和BACE1的表达来减少海马神经元Aβ分泌.
关键词： 肝X受体 TO901317 β-淀粉样肽前体蛋白 β-分泌酶 β-淀粉样肽 -
APP17肽对半乳糖老化小鼠海马神经元Aβ及其相关蛋白表达的影响
目的观察D-半乳糖老化小鼠海马神经元β-淀粉样肽(Aβ)及其相关蛋白表达水平的变化以及APP17肽对其改变的影响.方法采用免疫组织化学染色和免疫印迹方法,检测D-半乳糖老化小鼠模型海马神经元Aβ、β-分泌酶、内质网Aβ结合蛋白和早老蛋白-1的表达水平,并观察应用APP17肽的保护作用.结果对照组小鼠海马神经元Aβ及其相关蛋白表达量少,而D-半乳糖老化小鼠海马神经元Aβ及其相关蛋白表达水平明显增加,与对照组比较差异有高度显著性(P＜0.01),APP17肽组上述各种蛋白的表达结果与对照组接近.结论D-半乳糖老化小鼠海马神经元存在着Aβ及其相关蛋白表达的上调,APP17肽可使之恢复正常水平,对神经元具有营养和保护作用.
