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一例H7N9禽流感感染病例病毒载量、耐药性与抗体水平变化分析
目的 通过对北京市1例人感染H7N9禽流感病例连续检测H7N9病毒及血清抗体,掌握H7N9病毒载量、抗体、耐药性在病程发展中的变化.方法 以24h为间隔,共收集病例的下呼吸道盥洗液样本25份,血清样本23份.采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)法监测病程发展中下呼吸道盥洗液样本中的H7N9病毒载量变化、神经氨酸酶(NA)基因上R294K耐药位点变化;采用血凝抑制实验监测病例病程发展中血清样本中H7 N9抗体水平变化.结果 随着病程进展和临床抗病毒治疗的进行,病例H7N9禽流感病毒载量逐渐降低,抗体水平逐渐升高.病程后期部分样本中发现少量NA基因R294K耐药突变.结论 real-time RT-PCR和血凝抑制试验可用于人感染H7N9禽流感患者的病毒载量、耐药性变化和抗体水平变化监测,为临床救治提供依据.
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运用实时荧光定量RT-PCR和ELISA方法定量检测SHIV的对比分析
目的 建立一种实时、灵敏、特异的针对人/猴免疫缺陷病毒(SHIV)的RNA载量检测方法,通过与酶联免疫吸附试验(ELISA)进行比较,成为监测SHIV病毒体外复制过程的常用方法.方法 体外转录制备RNA标准品,利用TaqMan EZ逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)试剂盒的反应体系和针对SHIV gag保守区91个碱基的TaqMan探针与引物,建立一步法实时荧光定量RT-PCR.三种SHIV感染性分子克隆体外转染293T细胞,在不同的时间点采样,通过实时荧光定量RT-PCR和ELISA两种方法监测SHIV病毒复制过程.结果 两种方法监测的病毒复制过程基本一致,转染后2～48小时病毒复制出现明显的对数生长期,之后进入平台期,p24浓度大约103pg/ml,而RNA载量大约在108拷贝/ml.两者具有很好的相关性(r2＝0.834;P0.001).实时荧光定量RT-PCR灵敏度更高,检测范围更广,费用更低.结论 所建立的一步法检测SHIV病毒载量的实时荧光定量RT-PCR方法,可以作为监测SHIV体外扩增的常用方法.
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慢性乙型肝炎肝纤维化与肝功能病毒定量的关系探讨
目的:探讨慢性乙型肝炎肝纤维化与肝功能、病毒定量之间的关系,为临床预测疾病的严重程度提供依据.方法:采用临床病例观察及实验室检测,收集2004年5月-2005年11月广东省中医院肝病门诊及住院的152例确诊慢性乙型肝炎肝炎纤维化患者的临床资料,包括病史、症状、辨证分型、辅助检查(如 ALT、AST、HBV-DNA、肝纤四项)等数据,应用SPSS13.0软件包建立数据库,进行统计分析.结果:Cl-Ⅳ值在肝功能不同损害程度的组别间比较,差异有统计学意义(P＜0.05),但PCⅢ、LN、HA3项指标在肝功能损害程度不同的组别间比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).ALT、AST与肝纤四项的相关性分析提示ALT、AST与Cl-Ⅳ水平存在低度相关,而与PCⅢ、LN、HA水平无相关关系.Cl-Ⅳ、LN、HA值在HBV-DNA不同复制程度的组间两两比较,经统计学处理,差异均无统计学意义(P＞0.05);但PCⅢ值中的HBV-DNA中度复制组(106～107 copies/mL)与HBV-DNA正常组(＜1.03 copies/mL)相比,差异有统计学意义(P＜0.05),结合HBV-DNA定量与肝纤四项的相关性分析,提示并不能认为血清中的HBV-DNA定量与肝纤四项有相关性(P＞0.05).结论:肝功能与HBV-DNA定量能在一定程度上反映肝脏的炎症活动,但并不能直接反映肝脏纤维化的程度,因此,并不能因为肝功能正常或HBV-DNA复制不活跃就否认肝纤维化的存在,同时也不能因为肝功能异常或HBV-DNA复制活跃就认为肝纤维化一定存在.
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hPygo2在宫颈癌中表达及其与HR-HPV感染的相关性研究
目的:探讨hPygo2蛋白及HR-HPV病毒定量在宫颈疾病发生发展中的作用.方法:免疫组化法检测正常宫颈组织(44例)、LSIL(49例)、HSIL(89例)及宫颈癌(109例)组织中hPygo2表达,HC-2法检测宫颈组织中HR-HPV定量,分析hPygo2蛋白表达、HR-HPV病毒定量在不同宫颈病变及宫颈癌中有无差异以及hPygo2蛋白表达强度与HR-HPV病毒定量的相关性分析.结果:hPygo2在正常宫颈、LSIL、HSIL、宫颈癌中的表达逐渐升高.hPygo2表达强度与HR-HPV病毒定量,HPV病毒定量与宫颈组织病变程度之间均呈正相关性.结论:hPygo2蛋白表达与宫颈病变程度及HR-HPV病毒定量密切相关,hPygo2蛋白表达强度随病变程度增加而增加.
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慢性丙型肝炎患者中医证型与ALT、AST、HCV-RNA之间的关系
目的:观察慢性丙型肝炎病毒(HCV)感染者各中医证型与ALT、AST、HCV-RNA水平之间的关系.方法:采用流行病学调查方法收集病例,进行统计学处理.结果:ALT与中医证型关系为:脾肾阳虚型＞瘀血阻络型＞正虚邪恋型＞肝肾阴虚型＞肝郁脾虚型＞湿热内蕴型；AST水平与中医证型关系为:瘀血阻络型＞正虚邪恋型＞脾肾阳虚型＞肝肾阴虚型＞肝郁脾虚型＞湿热内蕴型；HCV-RNA水平呈一定规律性,即正虚邪恋型＞肝郁脾虚型＞肝肾阴虚型＞湿热内蕴型＞瘀血阻络型.结论:慢性丙型肝炎中医证型与肝功能异常、丙型肝炎病毒定量异常关系密切.
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超敏系统检测低拷贝 HBV DNA 定量的临床意义
目的：探讨超敏 HBV DNA 定量检测的低拷贝结果与 HBV 标志物和肝功能主要指标的相关性。方法同时检测283例 HBV DNA ≤1000 IU ／mL 低拷贝的乙型肝炎患者的5项肝功能指标，并进行组间比较。结果乙型肝炎病毒定量低拷贝的患者 HBV 标志物中 HBV e 抗原（HBeAg）差异有统计学意义（χ2＝5．310，P＝0．021）；HBV e 抗体（HBeAb）差异无统计学意义（χ2＝1．266，P＞0．05）；126例小三阳患者中，HBV DNA 定量结果在20及20～103 IU ／mL 55．56％；117例大三阳患者中，HBV DNA 定量检测结果阴性21．37％；肝功能指标谷氨酸氨基转移酶（AST ）、丙氨酸氨基转移酶（ALT ）、碱性磷酸酶（ALP）异常率分别为15．90％、8．13％、13．78％。结论乙型肝炎5项定量结果低或经抗病毒治疗后的患者，临床应采用超敏系统检测 HBV DNA 定量，同时结合乙型肝炎5项定量与肝功能，更好地了解病毒复制情况和肝细胞损害程度，为治疗提供可靠的临床依据。
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第二代基因杂交捕获法检测高危型人乳头瘤病毒在宫颈癌及癌前病变中的临床研究
宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤之一,其发病率较高,位居女性恶性肿瘤第二位 [1].研究[2]证实持续高危型人乳头瘤病毒(HPV-DNA)感染是宫颈癌前病变和宫颈癌主要病因,多数妇女仅为HPV短暂感染,一般8~10个月左右消失,仅有少数会持续感染终发展成为子宫颈癌.早期诊断和治疗癌前病变可有效预防和控制宫颈癌发生,进行合理有效的宫颈癌筛查可降低宫颈癌的发病率.第二代基因杂交捕获(HC2)是目前唯一通过FDA认证的检测HPV方法,其灵敏度高、重复性强,还可测定病毒载量[3].HC2进行HPV-DNA检测,可以大限度地筛选出高危人群,降低宫颈癌的发病率、病死率,为宫颈癌的防治提供科学依据.
关键词： 第二代基因杂交捕获法 高危人乳头状病毒 宫颈癌筛查 病毒定量 宫颈癌及癌前病变
