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HPLC-DAD法同时测定更年安片中6个活性成分的含量
目的:建立同时分析测定更年安片中6个活性成分(2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2 -O-β-D-葡萄糖苷、毛蕊花糖苷、仙茅苷、丹皮酚、哈巴俄苷、五味子醇甲)的方法.方法:采用HPLC-DAD法,色谱柱为奥泰Alltima ODS( 250 mm×4.6mm,5μm),以乙腈为流动相A,0.05％磷酸溶液为流动相B,梯度洗脱,流速1.0mL·min-1,检测波长为254 nm(测定五味子醇甲)、284 nm(测定仙茅苷、丹皮酚、哈巴俄苷)、330 nm(测定2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2 -O-β-D-葡萄糖苷、毛蕊花糖苷).结果:2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、毛蕊花糖苷、仙茅苷、丹皮酚、哈巴俄苷、五味子醇甲线性范围分别为0.0404～1.616 μg(r =0.9999),0.0194～0.774 μg(r =0.9998),0.0202 ～0.810μg(r =0.9997),0.0201～0.804μg(r=0.9999),0.0206～0.826μg(r=0.9998),0.0398～1.592 μg(r=0.9999).平均加样回收率(n=6)分别为97.8％,98.2％,97.9％,98.3％,101.2％,97.5％；RSD分别为1.2％,1.1％,0.95％,1.1％,0.97％,1.1％.结论:该方法操作简单,重复性好,为评价和监控更年安片的质量提供可靠的方法.
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HPLC法同时测定抗骨增生丸中毛蕊花糖苷、柚皮苷和淫羊藿苷的含量
目的:建立同时测定抗骨增生丸中毛蕊花糖苷、柚皮苷和淫羊藿苷3种成分含量的高效液相色谱法.方法:应用HPLC-梯度洗脱法,采用C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以水为流动相A,甲醇为流动相B,乙腈为流动相C进行梯度洗脱,流速1.0 mL· min-1,检测波长270 nm,柱温25℃.结果:毛蕊花糖苷、柚皮苷和淫羊藿苷测定浓度的线性范围分别为5.08～101.6、7.56～151.2和5.13～102.6 μg· mL-1,r均大于0.999;平均加样回收率分别为100.5％、99.5％和99.3％,RSD均小于1.0％.样品中毛蕊花糖苷、柚皮苷、淫羊藿苷含量分别为1.06～1.17、1.75～1.88、1.32～1.53 mg·丸-1.结论:该实验方法可有效地控制抗骨增生丸的质量.
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瑶药旱田草的定性定量定法研究
目的:建立旱田草药材的定性定量方法,考察广西不同产地、不同采收时节的药材质量.方法:采用TLC法对旱田草进行定性鉴别,展开剂为乙酸丁酯-甲醇-甲酸-水(6:1.5:1.5:1);采用HPLC法对旱田草中的毛蕊花糖苷进行含量测定,使用Waters SunFire C18色谱柱(4.6 mm 250mm,5 μm),柱温35℃,以甲醇-0.4％磷酸溶液(32: 68)为流动相,流速1.0 mL· min-1,检测波长334 nm;参照中国药典2010年版一部测定水分、灰分和浸出物.结果:薄层色谱中斑点清晰,分离度好;毛蕊花糖苷质量浓度在2.002～40.04 μg ·mL-1(r=1.000 0)范围内线性关系良好,加样回收率为98.61％(RSD=1.7％,n=6);所测的12批样品含量在0.196～ 16.76 mg·g-1之间.结论:本文建立的方法可用于瑶药旱田草的质量控制.
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HPLC法测定紫珠叶中毛蕊花糖苷的含量
目的:采用反相高效液相色谱法测定紫珠叶中毛蕊花糖苷的含量.方法:采用Agilent Eclipse XDB-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.5%磷酸(17:83)为流动相,流速1.0 mL·min~(-1),检测波长332 nm,柱温30℃.结果:毛蕊花糖苷进样浓度在11.36～227.2μg·mL~(-1)范围内,与峰而积呈良好线性关系;平均回收率(n=6)为96.8%,RSD为1.4%.结论:该方法简便、准确,重复性好,可作为紫珠叶的质量控制方法.
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HPLC法测定不同产地桂花中红景天苷和毛蕊花糖苷的含量
目的:建立HPLC法测定不同产地桂花中红景天苷和毛蕊花糖苷的含量.方法:采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.1％磷酸水为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长220 nm,柱温为室温,进样量10 μL.结果:红景天苷和毛蕊花糖苷的质量浓度分别在1.06 ～ 3.89 μg·mL-1(r=0.9995,n=6)、8.84 ～ 32.4 μg·mL-1(r=0.9997,n=6)内与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率分别为98.3％和98.4％,RSD分别为1.1％和0.65％.通过比较不同产地桂花样品的测定结果,可知不同产地桂花中红景天苷和毛蕊花糖苷的含量有着较大差别.结论:该方法为各产地桂花药材进一步开发利用提供质量控制依据.
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更年安片质量分析
目的:通过对更年安片119批次样品进行标准检验及探索性研究,对该品种的质量及标准状况作出总体分析及评价.方法:标准检验依据中国药典2005年版增补本,包括TLC鉴别及HPLC含量测定.探索性研究采用显微鉴别法以检查处方中原粉投料药材；对何首乌及五味子的薄层色谱鉴别进行再研究；建立了在同一色谱条件下测定更年安片中6个化学成分(2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷、毛蕊花糖苷、仙茅苷、丹皮酚、哈巴俄苷、五味子醇甲)已明确)的HPLC方法.结果:按现行质量标准检验,合格率100％；按探索性研究检验,提高了方法的可控性.结论:探索性研究增加了标准的专属性、可控性及安全性,为进一步修订药品标准、控制药品质量提供参考.
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构建电子转移通道阻抑法筛选车前子中黄嘌呤氧化酶抑制剂成分
目的:构建黄嘌呤氧化酶(XOD)电子转移通道阻抑方法筛选车前子中XOD抑制剂成分.方法:将双壁碳纳米管(DWNTS)固定于玻碳电极表面,并在其上修饰XOD,构建XOD催化反应电子转移通道.应用循环伏安法监测通道中的电子转移信号,当抑制剂成分存在阻止XOD催化黄嘌呤(XAN)反应时,通道电子转移信号下降,藉此筛选XOD抑制剂.结果:循环伏安法可灵敏监测XOD催化反应通道中电子转移阻抑信号,利用该法对车前子中的4个代表性单体成分进行筛选,共筛选出2个XOD抑制剂,分别为毛蕊花糖苷(IC50为8.4 μg·mL-1)、乙基己基-苯羧酸酯(IC50为75.0μg·mL-1),其中乙基己基-苯羧酸酯为新筛选出的XOD抑制剂.结论:电子转移通道阻抑筛选方法简单快捷,灵敏度与选择性高,筛选化合物用量低,在天然产物XOD抑制剂的筛选中具有很好的应用前景.
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脂质体平衡透析-液质联用色谱法筛选四物汤药效物质的研究
目的:探讨四物汤有效成分与脂质体模拟生物膜的相互作用,以了解其有效成分体内吸收的情况.方法:采用平衡透析与高效液相色谱-质谱联用技术,对四物汤有效成分与脂质体模拟生物膜相互作用进行分析;同时考察了透析时间、脂质体溶液的浓度和缓冲溶液pH对四物汤有效成分与模拟生物膜相互作用的影响.结果:四物汤中有9个成分与脂质体相互作用明显,通过对照品对照及LC-MS方法鉴定了其中6个成分,分别是香草酸、芍药内酯苷、毛蕊花糖苷、芍药苷、洋川芎内酯Ⅰ、肉桂酸;模拟生物膜的浓度对四物汤有效成分与模拟生物膜相互作用影响较大,随着浓度增加,色谱峰面积明显减小,符合被动吸收规律;pH对其中4个成分有明显影响.结论:脂质体平衡透析液质联用色谱法可作为快速筛选中药潜在的活性成分的有效方法,为药效物质基础的进一步研究提供参考.
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毛蕊花糖苷对血小板衍生生长因子BB处理后大鼠肝星状细胞的影响
目的:探讨毛蕊花糖苷对血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)诱导的大鼠肝星状细胞(HSC)活化、迁移、胶原沉积、纤维化作用的影响,并进一步探讨其对ERK1/2、Akt信号通路表达的影响.方法:HSC细胞分为毛蕊花糖苷(1.5、3.0、6.0 mg/L)组[重组大鼠PDGF-BB(rrPDGF-BB)预处理24h后,不同浓度的毛蕊花糖苷干预],PDGF-BB组(rrPDGF-BB预处理24h,无毛蕊花糖苷干预),对照组(无rrPDGF-BB预处理,无毛蕊花糖苷干预);分别采用划痕实验检测细胞迁移能力,ELISA法检测Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)含量,Western blot检测纤维化HSC活化标志物α-SMA蛋白、凋亡效应分子caspase-3,及ERK1/2、Akt信号通路相关蛋白的表达水平.结果:与对照组比较,PDGF-BB组能促进HSC的迁移(P＜0.01),毛蕊花糖苷(1.5、3.0、6.0 mg/L)组能明显抑制HSC的迁移(P＜0.01),且毛蕊花糖苷抑制HSC的迁移有明显的剂量依赖性(r=0.894,P=0.038);随着受试物浓度的增加,Col-Ⅰ分泌呈现降低趋势,其中毛蕊花糖苷6 mg/L组抑制胶原产生的作用效果明显(P＜0.01);毛蕊花糖苷(1.5,3.0,6.0 mg/L)组能够抑制α-SMA蛋白的表达、激活caspase-3的活性,使ERK1/2、P-ERK1/2、Akt、P-Akt蛋白表达明显降低,且测定蛋白的表达在毛蕊花糖苷各剂量组间也呈现一定的剂量-效应关系(0.826＜r＜0.997,P＜0.01).结论:毛蕊花糖苷可抑制rrPDGF-BB诱导的HSC的活化、迁移和纤维化作用,其机制可能与毛蕊花糖苷激活caspase-3,阻断ERK1/2、Akt信号通路,抑制HSC中细胞外基质过度沉积及胶原形成有关.
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双波长UFLC法同时测定地黄中梓醇 和毛蕊花糖苷的含量
目的:建立超快速液相色谱法同时测定地黄中梓醇和毛蕊花糖苷的含量.方法:采用Shim-Pack XR-ODS柱(75mm×3.0mm,2.2μm);有机相为乙腈(B),水相为0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱;采用的流速为0.4mL·min-1,检测波长为210n m(梓醇)、334n m(毛蕊花糖苷),柱温为30℃,进样量5μL.结果:梓醇与毛蕊花糖苷分别在40~240μg·mL-1(r=0.9995)和8~48μg·mL-1(r=0.9997)浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率(n=9)分别为98.9%和98.5%.结论:该方法简便、快速、具有良好的重现性,可用于地黄中梓醇及毛蕊花糖苷的质量控制.
