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调经助孕胶囊对不孕大鼠卵巢FSHR、LHR的影响
目的：建立SD大鼠ASR模型，探讨调经助孕胶囊对排卵障碍性不孕模型大鼠性周期、卵巢组织形态、血清Inhibin-B（抑制素B）及卵巢FSHR（卵泡刺激素受体）、LHR（黄体生成素受体）的影响。方法给幼年雌性SD大鼠注射雄激素可导致其成年后不孕，这种雄激素致不孕的大鼠不排卵。结果调经助孕组大鼠阴道上皮细胞有明显的周期性变化；调经助孕组大鼠卵巢各级卵泡总数大于模型组（P＜0.05），调经助孕组大鼠卵巢病理性囊性卵泡个数小于模型组（P＜0.05）；调经助孕组大鼠血清抑制素B含量高于模型组（P＜0.05）；调经助孕组大鼠卵巢FSHR、LHR表达水平高于模型组（P＜0.05）。结论调经助孕胶囊有使排卵障碍性不孕症的大鼠恢复性周期趋势的作用，增加模型大鼠血清Inhibin-B含量，提升卵巢储备功能，增强模型大鼠卵巢FSHR、LHR的表达水平，促进卵泡的发育与成熟。
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去卵巢大鼠肾脏组织表达FSHR和LHR
目的 探讨肾脏是否具有和卵巢相似的内分泌功能和变化,有望为肾脏的生理功能增添新的内容.方法 制备去卵巢动物模型,采用放免法、RT-PCR半定量法检测肾脏组织中FSH受体(FSHR)和LH受体(LHR)的表达.结果 在肾脏和卵巢中,低剂量FSH和LH提高FSHR mRNA和LHR mRNA水平,而高剂量FSH和LH下调FSHR mRNA和LHR mRNA水平;高剂量的雌激素可导致FSHR mRNA水平由0.777±0.294降至0.514±0.249(P＜0.05).结论 大鼠肾脏中FSHR、LHR的表达调节特性与卵巢组织一致,肾脏可能具有和卵巢组织相似的内分泌功能和变化.
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卵巢颗粒细胞中卵泡刺激素受体基因突变与其启动子活性的关系
卵巢颗粒细胞中卵泡刺激素受体(follicle stimulating hormone receptor,FSHR)基因突变是否影响其启动子活性,不同的学者报道尚不统一~([1-2]).报告基因法常用来研究某段DNA序列是否具有转录启动功能及其转录活性,该方法已被众多实验证实是有效的.
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卵巢颗粒细胞中卵泡刺激素的受体后信号传导通路
卵泡刺激索(FSH)是下丘脑-垂体-性腺轴中的关键激素,通过与颗粒细胞的FSH受体(FSHR)结合,发挥卵泡募集、促卵泡生长和卵母细胞成熟的作用,并与黄体生成素(LH)一起,介导排卵过程,促进和维持正常的性腺发育和生殖功能.研究颗粒细胞中FSH与FSHR结合后的信号传导通路(即受体后信号传导通路)机制,对了解颗粒细胞在卵泡发育过程中的作用以及对治疗不孕、不育药物的研制具有重要意义.本文将对颗粒细胞中FSH的受体后信号传导及功能调节的分子学机制的研究进展做一综述.
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壬基酚对大鼠子代睾丸卵泡刺激素受体表达的影响
目的:研究壬基酚(nonylphenol,NP)对大鼠子代睾丸卵泡刺激素受体(FSHR)mRNA表达的影响.方法:将40只雌性SD大鼠随机分为5组,NP低、中、高剂量组、阴性对照组和阳性对照组.NP各剂量组在妊娠第14～19天给予20、40、80 mg/(kg·d)壬基酚灌胃,阴性对照组给予同体积的花生油,阳性对照组给予30 μg/(kg·d)雌二醇,孕第19天取胎鼠睾丸,用实时荧光定量PCR检测睾丸中FSHR mRNA的表达.结果:与阴性对照组比较,低剂量组表达升高,但随着剂量的增加,FSHR mRNA表达下降,差异有统计学意义.结论:壬基酚可致大鼠子代生殖毒性,影响FSHR的转录水平,导致生精障碍.
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卵泡刺激素受体(FSHR)胞外区B细胞表位的优化筛选
目的:采用生物信息学技术,对前期研究获得的卵泡刺激素受体(FSHR)的B细胞表位肽段进一步筛选、优化,以获得理想的FSHR靶标抗原.方法:①利用InsightⅡ分子模拟软件寻找FSHR与FSH相互作用的区域.②应用DNA STAR 软件中的Protein模块对优化后抗原进行综合分析.③肽结合实验对优化后抗原进行免疫原性检测.结果:≥5个氨基酸片段的柔性区域位于FSHR第30 - 44、52 - 65、112 - 121、174 - 182、190 - 210、223 - 245区段.当FSHR胞外区第37位缬氨酸被赖氨酸或谷氨酸替代时,具有较好的亲水性及抗原性.而肽结合实验证实肽32 - 44具有更好的免疫原性.结论:FSHR胞外区肽段32-44有可能成为避孕疫苗的理想抗原.
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阿拉瑞林免疫影响FSHR表达及FSHR生物信息学分析
目的：探讨阿拉瑞林主动免疫绵羊对垂体和卵巢FSHR表达的作用，分析绵羊FSHR的生物信息学特点。方法：42只5～6月龄母绵羊随机分为6组（n＝7），EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ分别于0 d和14 d皮下注射阿拉瑞林抗原200μg、300μg和400μg；EG-Ⅳ和EG-Ⅴ分别皮下注射阿拉瑞林抗原200μg、300μg，0、7、14、21 d各一次，共4次；对照组在0 d和14 d皮下注射抗原溶媒2.0ml。于70 d（实验结束时）屠宰动物，无菌采集垂体和卵巢。从绵羊垂体中提取FSH，进行PCR扩增、克隆和测序，荧光定量PCR分析，将得到的序列运用生物信息学软件行分析，用Western blot检测卵巢FSHR蛋白表达。结果：实验组垂体FSHR mRNA的2-ΔΔCt均低于对照组， EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ的2-ΔΔCt值逐渐下降；而且EG-Ⅳ低于EG-Ⅰ，EG-Ⅴ低于EG-Ⅱ，即注射阿拉瑞林4次后FSHR mRNA的2-ΔΔCt值分别低于注射2次后的值。各实验组卵巢FSHR蛋白表达量随阿拉瑞林注射剂量的增加而逐渐增加，EG-IV和EG-V卵巢FSHR蛋白显著高于对照组相比（P＜0.01）。 FSHR序列为1091 bp，开放阅读框（0RF）780 bp，位于41～820位点，其半衰期、理论等电点、不稳定指数、疏水性平均值和脂肪指数分别为1.2 h、5.05、47.75、0.836和30.61。结论：阿拉瑞林免疫可抑制垂体FSHR mRNA的表达，但是增加卵巢FSHR蛋白表达；FSHR蛋白为不稳定的疏水性蛋白。
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大蒜素对D-半乳糖致衰老小鼠卵巢FSHR、LHR和active Caspase-3蛋白表达的影响
目的 观察大蒜素对D-半乳糖所致的雌性衰老小鼠促卵泡素受体(FSHR)与促黄体素受体(LHR)表达水平的影响,结合凋亡相关蛋白active Caspase-3表达变化初步探讨原因.方法 SPF级雌性昆明小鼠40只,随机分为对照组、模型组、大蒜素组和维生素C组,每组10只.模型组、大蒜素组和维生素C组小鼠以100 mg/kg体重剂量皮下注射D-半乳糖生理盐水溶液,对照组小鼠注射同体积生理盐水,每日1次,同期大蒜素组以20 mg/kg剂量腹腔注射大蒜素注射液,维生素C组以50 mg/kg剂量腹腔注射维生素C,对照组及模型组腹腔注射同体积生理盐水,共持续6周.给药结束后采集标本,Western blot法检测卵巢组织FSHR与LHR表达水平,免疫荧光法观察active Caspase-3表达变化.结果 与对照组相比,模型组FSHR与LHR表达水平明显升高(P＜0.05),active Caspase-3表达增强,大蒜素组FSHR与LHR表达水平(与β-actin比较)分别为0.63±0.07和0.82±0.06,较模型组明显下降(P＜0.05),active Caspase-3表达亦有减弱趋势.结论 大蒜素能下调FSHR与LHR表达水平,提示其一定程度上延缓了D-半乳糖所致小鼠卵巢的衰老,该作用可能与其减少卵巢细胞凋亡有关.
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FSHR、LHR基因突变与多态对女性生殖的影响
卵泡刺激素(FSH)与黄体生成素(LH)促进性腺的发育和成熟、调节人类配子的产生,在生殖方面起着关键的作用.两受体(FSHR与LHR)的突变会导致生殖能力的改变,出现一系列临床症状,引起组织学,分子水平等多方面的变化,同时FSHR的多态性与卵巢反应性、女性的月经周期等许多方面相关.本文从多方面阐述FSHR与LHR时女性生殖的影响.
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以FSH受体的配体结合部位作为抗原进行主动免疫对大鼠生殖的影响
目的 重组表达FSHR抗原主动免疫SD大鼠,探讨FSHR免疫抑制对大鼠卵巢功能的影响,以构建免疫异常导致的卵巢早衰(POF)大鼠模型.方法 以FSHR分子N端配体受体结合区片段为靶位,制备重组抗原,同时针对免疫原性预测位点人工合成3段肽,以佐剂为对照,免疫大鼠,免疫后检测血清中的FSHR抗体滴度.在体外利用免疫荧光技术检测抗血清对卵丘复合体中FSHR的识别能力；并且研究FSHR主动免疫后卵巢对PMSG反应性的变化；检测血清FSH和雌激素水平,并与雄鼠交配,观察FSHR主动免疫对窝仔数的影响.结果 主动免疫后血液中产生高滴度水平的抗体,在免疫周期后持续6周无明显下降.主动免疫产生的抗体可以与颗粒细胞特异性结合；同时,卵巢对促性腺激素的反应性降低.重组蛋白免疫组的大鼠动情周期紊乱,发情期缩短,血液FSH水平上升,而雌激素水平降低,与正常雄性交配窝仔数下降.结论 人工制备大鼠的FSHR免疫原,主动免疫大鼠,导致大鼠血液出现高水平的FSHR抗体,可以与卵巢颗粒细胞上的FSHR特异结合,导致其对促性腺激素的反应性降低,进而引发大鼠出现卵巢早衰的症状.
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FSHR部分基因的真核表达质粒构建和生物信息学分析
目的 克隆FSHR基因部分片段(145～330 bp)(FSHRn),构建真核表达重组质粒,预测其编码蛋白作为候选避孕疫苗的可行性.方法 提取小鼠睾丸组织的总RNA,利用RT-PCR技术反转录成cDNA,按照GenBank中小鼠FSHR N-端序列设计引物,扩增基因片段并插入pcDNA3.1/myc-His(-)B载体,重组质粒经PCR、双酶切和测序鉴定后用Vector NT19.0软件作生物信息学分析.结果 扩增片段长度为186 bp,测序结果 与已知序列吻合,重组真核表达质粒经PCR和双酶切鉴定获得正确重组子.生物信息学分析其编码蛋白抗原性肽段主要集中在15～20aa、22～27aa、32～36aa、42～48aa、58～67aa,与人的基因同源性为90%.结论 成功克隆了FSHRn基因片段并构建了pcDNA3.1/FHSRn真核表达重组质粒;FSHRn具有良好的抗原性,FSHRn蛋白可作为良好的动物候选疫苗,为此段蛋白的深入研究和人类男性避孕疫苗的研制打下基础.
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男性避孕纳米粒的制备与体外实验研究
目的 构建聚乳酸-羟乙酸共聚物(polylactic acid-glycolic acid,PLGA)包载促卵泡生成素受体表位肽(FSHR32-44)的纳米粒,探讨PLGA材料作为避孕疫苗载体的可行性.方法 使用PLGA为载体,制备出包载促卵泡生成素受体的B细胞表位(FSHR32-44)的纳米粒,透射电镜(TEM)观察表观形态,粒径仪检测粒径分布范围和Zeta电位,体外释放试验检测其理化特性.激光共聚焦显微镜观察小鼠骨髓来源树突状细胞(DCs)吞噬FSHR可溶性多肽和FSHR/PLGA NP的能力,流式细胞仪检测FSHR、PLGA NP和FSHR/PLGA NP促骨髓来源DCs成熟能力.结果 单乳-溶剂挥发法制备的FSHR/PLGA NP大小粒径分布均匀、表面规整,粒径(296.3±3.5)nm,Zeta电位(-16.1±0.4)mV,FSHR包封率(62.71±2.83)％,并具有缓慢释放抗原的能力;体外细胞水平实验结果显示FSHR表位肽纳米粒易于被DCs摄取,有剂量和时间依赖性,能显著上调DCs表面CD40、CD86、CD83和MHC-Ⅱ功能分子的表达.结论 PLGA包载FSHR多肽有良好的包封率,易被DCs吞噬,并有强的促进DCs成熟作用,可以作为FSHR32-44避孕疫苗的载体.
