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虎杖苷的研究进展
虎杖苷是虎杖的有效成分之一,本文综述了虎杖苷的研究进展,包括植物来源、化学结构、性质、提取分离、药理作用和含量测定等,为其进一步开发利用提供了依据.
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LC-MS/MS测定大鼠血浆中虎杖苷浓度
目的 建立测定大鼠血浆中虎杖苷浓度的LC-MS/MS方法.方法 采用LC-MS/MS测定大鼠血浆中虎杖苷的浓度,以二苯乙烯苷为内标,血浆样品用乙腈沉淀蛋白,色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18( 100 mm ×2.1 mm,3.5 μm),流动相为甲醇-乙腈-0.1％甲酸水溶液(18∶15:67),流速0.3 ml/min,柱温30℃.结果 虎杖苷的线性范围为1.0～5 000.0 ng/ml(r=0.998 4),低定量检测浓度为1.0 ng/ml(S/N＞10),提取回收率＞78％,日内和日间RSD＜15％.结论 本法操作简单,选择性好,灵敏度高,费时少,适用于虎杖苷在大鼠体内的药代动力学研究.
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HPLC唱DAD法同时测定肝八味胶囊中4种成分的含量
目的：用高效液相色谱（HPLC）法同时测定肝八味胶囊中4种成分的含量。方法采用 HPLC法，色谱柱为C18柱（250 mm ×4.6 mm ，5μm），以乙腈为流动相A ，以水为流动相B ，梯度洗脱；检测波长为240 nm ；流速1.0 ml／min。结果丹酚酸B对照品在15.026～100.17μg／ml范围内呈良好线性关系，平均加样回收率为96.6％（n＝6），RSD＝1.8％（n＝6）；芍药苷对照品在14.335～95.564μg／ml范围内呈良好线性关系，平均加样回收率为97.0％（n＝6），RSD＝1.7％（n＝6）；虎杖苷对照品在8.235～54.90μg／ml范围内呈良好线性关系，平均加样回收率为97.2％（n＝6），RSD＝1.8％（n＝6）；大黄素对照品在1.5825～10.55μg／ml范围内呈良好线性关系，平均加样回收率为98.1％（n＝6），RSD＝1.7％（n＝6）。结论此法简单准确、重现性好、专属性强、阴性对照无干扰，适用于肝八味胶囊的质量控制。
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反相高效液相色谱法测定肝力保胶囊中虎杖苷、白藜芦醇和大黄素的含量
肝力保胶囊是本院自制制剂,由茵陈、虎杖、茯苓、黄芪及苦参碱提取物组成,临床用于各种急、慢性病毒性肝炎治疗,对肝癌所致肝脾肿大、肝硬化腹水等症状有辅助疗效.虎杖是蓼科植物虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.)的干燥根和根茎,具有利湿退黄、清热解毒、散瘀止痛、止咳化痰功效,用于湿热黄疸、淋浊、带下、风湿痹痛、痈肿疮毒、水火烫伤、肺热咳嗽等[1].虎杖的有效成分包括蒽醌类、二苯乙烯类化合物、鞣酸及黄酮类等.蒽醌类化合物主要包括大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等,具有抗菌、抗炎、抗病毒、抑制血小板聚集,改善微循环及抗肿瘤等作用[2].
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反相高效液相色谱法测定肝力保胶囊中虎杖苷的含量
肝力保胶囊是我院自制制剂,由茵陈、虎杖、茯苓、黄芪及苦参碱提取物组成,用于各种急、慢性病毒性肝炎治疗,对肝癌所致肝脾肿大、肝硬化腹水等症状有辅助治疗作用.虎杖是廖科植物虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc)的干燥根和根茎,具有利湿退黄、清热解毒、散瘀止痛、止咳化痰功效,用于湿热黄疸、淋浊、带下、风湿痹痛、痈肿疮毒、水火烫伤、肺热咳嗽等[1].虎杖主要化学成分包括游离蒽醌及蒽醌苷类、白藜芦醇及虎杖苷2种芪类化合物、鞣质及黄酮类等[2].现代药理学研究表明,虎杖苷有保护心肌细胞和血管平滑肌细胞、抗血小板聚集、改善微循环等作用,能减轻多种因素造成的组织器官损伤,具有保护肝细胞、降血脂及抗脂质过氧化等作用.
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虎杖苷与白藜芦醇体外抗肠道病毒71型的初步研究
目的 检测虎杖苷与白藜芦醇体外抗肠道病毒71型(EV71)活性,分析其与NF-κB信号通路的关系.方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法检测虎杖苷与白藜芦醇对人横纹肌肉瘤(RD)细胞的毒性以及抗EV71作用;western blot分析EV71感染RD细胞后EV71/衣壳蛋白VP1、NF-κBp50、NF-κBp65蛋白表达及磷酸化水平,Luminex流式液相芯片技术检测RD细胞分泌IL-6、肿瘤坏死因子-α(TN F-α)、干扰素-α(IFN-α)和IFN-β的水平.结果 虎杖苷与白藜芦醇的50％病毒抑制细胞毒性浓度(CC50)分别为542.76 μg/mL和85.73 μg/mL,50％病毒抑制浓度(IC50)分别为979.66 μg/mL和21.36 μg/mL,治疗指数(TI)为0.55和4.01.虎杖苷对EV71的抑制作用较弱,250 μg/mL时的病毒抑制率为(23.57±3.64)％.白藜芦醇可抑制RD细胞EV71/VP1合成,作用8、12、24 h的VP1表达量差异具有统计学意义(t值分别为5.968、5.364和4.922,P均＜0.05).与EV71感染组比较,EV71+白藜芦醇组NF-κBp50磷酸化水平降低,差异有统计学意义(8、12、24 h的t值分别为11.642、12.284和28.844,P均＜0.05);NF-κBp65磷酸化水平降低,也具有统计学意义(4、8、12、24 h的t值分别为9.017、16.883、10.287和6.922,P均＜0.05).白藜芦醇可显著降低EV71感染的RD细胞分泌IL-6、TNF-α和IFN-β(t值分别为23.589、34.564和13.296,P均＜0.05).结论 白藜芦醇可通过抑制RD细胞的NF-κB信号通路干扰EV71复制.
关键词： 虎杖苷 白藜芦醇 NF-κB 肠道病毒71型/衣壳蛋白VP1 -
虎杖苷对脓毒症急性肾损伤大鼠炎症反应和氧化应激的影响
目的 观察虎杖苷在脓毒症急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)大鼠中的抗炎和抗氧化应激作用.方法 SD大鼠72只,体重180~220 g,随机分为四组: 假手术对照组(Sham组);盲肠结扎穿刺术(CLP)+生理盐水组(CN组);CLP+溶媒组(CV组);CLP+虎杖苷组(CD组),每组18只.对CN、CV和CD组大鼠施行CLP,模拟脓毒症AKI动物模型,Sham组大鼠盲肠既不被结扎也不被穿孔,余步骤则与CLP组相同,未行其他任何处理.CLP术后6、12、18 h,CN、CV和CD组经大鼠尾静脉分别注射生理盐水、溶媒、虎杖苷30 mg/kg.在CLP术后24 h记录血清肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)等肾功能指标,观察肾脏组织病理形态改变并进行肾小管损伤评分,检测血清TNF-α、IL-1β和IL-6浓度,测定肾组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)浓度.结果 与Sham组比较,CN组和CV组血清Cr、BUN、TNF-α、IL-1β和IL-6浓度、肾小管损伤评分和肾组织MDA浓度明显升高(P<0.01),肾组织SOD活性、GSH浓度明显降低(P<0.01).与CN组和CV组比较,CD组血清Cr、BUN、IL-1β和IL-6浓度、肾小管损伤评分和肾组织MDA浓度明显降低(P<0.05),肾组织SOD活性、GSH浓度明显升高(P<0.05).结论 盲肠结扎穿刺术导致的脓毒症可引起急性肾损伤,虎杖苷可通过显著的抗炎和抗氧化应激作用,减轻肾组织损伤,改善肾功能.
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虎杖苷对大鼠肾缺血-再灌注损伤NF-κB、MPO表达的影响
目的 研究虎杖苷对大鼠肾缺血-再灌注损伤(RIRI)核因子-κB(NF-κB)、髓过氧化物酶(MPO)表达的影响.方法 将36只雄性SD大鼠随机均分为六组:假手术对照组(Ⅰ组)、模型对照组(Ⅱ组,腹腔注射生理盐水10 ml/kg)、预处理低剂量组(Ⅲ组,腹腔注射虎杖苷20 mg/kg)、预处理高剂量组(Ⅳ组,腹腔注射虎杖苷40 mg/kg)、缺血后处理低剂量组(Ⅴ组,腹腔注射虎杖苷20mg/kg)、缺血后处理高剂量组(Ⅵ组,腹腔注射虎杖苷40 mg/kg).采取右肾切除、左肾蒂钳夹的方法 建立损伤模型,夹闭时间为60 min,再灌注时间为24 h.在电镜下观察大鼠肾脏超微粒结构,用免疫组化方法 检测NF-κB和MPO的着色情况.结果 Ⅱ组NF-κB、MPO的表达明显高于Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ组(P<0.05),但与Ⅴ、Ⅵ组差异无统计学意义.结论 虎杖苷预处理对RIRI有一定预防作用.
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双波长HPLC法同时测定妇科Ⅳ颗粒剂中芍药苷和虎杖苷的含量
目的：建立妇科Ⅳ颗粒剂中芍药苷和虎杖苷含量的HPLC测定方法。方法：采用Phenomenex Luna C18（4.6 mm×250 mm，5μm）色谱柱；流动相为乙腈-0.1%磷酸（17∶83）；流速为1.0 mL·min-1；柱温为30℃；检测波长为230 nm、306 nm。结果：芍药苷在0.524～8.384μg、虎杖苷在0.344～5.502μg范围内，进样量与峰面积具有良好线性关系（r=0.9997，r=0.9999），平均回收率分别为99.6%（RSD=0.92%）、100.3%（RSD=1.32%）。结论：研究建立的含量测定方法可靠、准确、重现性好，可用于该制剂的质量控制。
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微透析法测定虎杖苷的体外血浆蛋白结合率及与超滤法的比较
目的 采用微透析技术研究虎杖苷的体外血浆蛋白结合率,并与超滤法比较.方法 微透析探针依次浸入含虎杖苷20,60,200 μg·mL-1的大鼠、人血浆中,灌注器以2.5 μg·min-1的流速依次灌注含虎杖苷0,10,30,100,300 μg·mL-1的生理盐水,每15 min收集1次样品,HPLC分析虎杖苷浓度.以灌注液与透析液中虎杖苷的浓度差对灌注液浓度进行线性回归,计算血浆中游离虎杖苷的浓度,进而计算虎杖苷的血浆蛋白结合率,并与超滤法进行比较.结果 微透析测定虎杖苷与大鼠、人血浆蛋白结合率平均值分别为86.15％,89.08％,超滤法分别为85.60％和87.24％,两种方法结果比较接近.结论 虎杖苷与大鼠、人血浆蛋白有较高的结合率,微透析法和超滤法结果一致.
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虎杖苷及其衍生物抑制SGLT2降血糖活性研究
目的 揭示虎杖苷及其衍生物抑制钠-葡萄糖协同转运体2(sodium-glucose cotransporter 2,SGLT2)活性的构效关系.方法 以虎杖苷为起始物,经SN2取代反应、催化氢化获得5个衍生物,以1H-NMR和HR-ESI-MS进行结构表征.采用荧光标记的1-脱氧葡萄糖[1-[N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino]-1-deoxy-D-glucose,1-NBDG]作为底物对虎杖苷及其衍生物进行体外抑制SGLT2活性测试,对衍生物1b进行体内活性测试,大鼠口服糖耐量实验及促尿糖实验.结果 获得5个虎杖苷衍生物,1H-NMR和HR-ESI-MS表征结构正确,体外实验显示虎杖苷及其衍生物能较好地抑制SGLT2活性,且化合物1b在10-5 mol·L-1时对SGLT2的抑制率达98.6％,但是大鼠体内实验显示1b在120 mg·kg-1时抑糖率只有11％,尿糖量只有122 mg每200 g,其活性远远低于阳性对照药达格列净.结论 虎杖苷及其衍生物作为O-芳基糖苷化合物具有较弱的抑制SGLT2降血糖活性,其分子结构对后续设计新的C-芳基糖苷SGLT2抑制剂具有一定的指导意义.
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虎杖苷对去卵巢骨质疏松大鼠β-Catenin及GSK-3β蛋白表达的影响
目的 研究虎杖苷对卵巢摘除骨质疏松大鼠β-Catenin及GSK-3β蛋白表达的影响,探索其对卵巢摘除骨质疏松大鼠的保护作用及可能的作用机制.方法 SPF级♀大鼠60只,随机分为假手术组、模型组、虎杖苷低(5 mg·kg-1.d-1)、中(15mg·kg-1.d-1)、高剂量组(45 mg.kg-1 ·d-1),每组12只,灌胃给药.除假手术组外,其余各组采用摘除大鼠双侧卵巢的方法模拟骨质疏松模型.12周后,用双能X线吸收法测量骨密度(bone mineral density,BMD),ELISA法检测E2、ALP、TRAP等生化指标的水平;Western blotting法检测β-Catenin和GSK-3β蛋白的表达,qRTPCR法检测β-Catenin和GSK-3βmRNA的表达.结果 与模型组比较,虎杖苷各组BMD,E2显著升高(P＜0.01)、血清ALP、TRAP显著降低(P＜0.01);β-Catenin蛋白的表达升高(P＜0.01),GSK-3β表达降低(P＜0.01);β-Catenin mRNA表达显著升高(P＜0.01),GSK-3β mRNA表达显著降低(P＜0.01).结论 虎杖苷对去卵巢骨质疏松有一定的治疗作用,其机制可能与增加β-Catenin表达,减少GSK-3β表达有关.
关键词： 虎杖苷 骨质疏松 β-catenin GSK-3β Wnt/β-catenin -
护肝宁丸中虎杖苷、槲皮素和丹参酮Ⅱ A的测定
目的:建立护肝宁丸中虎杖苷、槲皮素和丹参酮ⅡA的测定方法.方法:采用Phenomenex Luna C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相为甲醇-0.1％磷酸溶液,梯度洗脱;体积流量1.0mL·min-1;柱温30℃;检测波长306nm (0～20min),360nm (20～59min),270nm(59～69min).结果:虎杖苷、槲皮素、丹参酮ⅡA分别在0.146～1.46μg (r=0.9993)、0.03504 ～ 0.3504μg(r=0.9995)、0.03004～0.3004μg(r=0.9996)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为95.9％、96.9％、96.2％,RSD分别为0.87％、1.32％、0.60％.结论:检测3种成分的HPLC法优于只测定虎杖苷的护肝宁丸现执行标准.
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HPLC法同步测定行智前列敷脐散中王不留行黄酮苷和虎杖苷的含量
目的 建立HPLC法同时测定行智前列敷脐散中王不留行黄酮苷和虎杖苷2种成分的含量.方法 采用HPLC法,Diamonsil-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);以甲醇(A)-水(含0.3％磷酸,B)为流动相梯度洗脱:0～10 min 5％～35％A;10～25 min 35％A.流速1.0 ml/min,检测波长260 nm,柱温30℃.结果 在优选色谱条件下,行智前列敷脐散中王不留行黄酮苷和虎杖苷分离良好,2种成分在选定浓度范围内线性关系良好(r≥0.999 2),精密度、重复性和稳定性良好(RSD≤2.65％),加样回收率分别为99.71％和99.31％,并对10个批号的行智前列敷脐散中的2种指标成分进行了含量测定.研究建立的方法精密度、稳定性和加样回收率均符合含量测定要求.结论 建立了行智前列敷脐散HPLC质量控制方法,此法简便快速,稳定可靠.
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虎杖苷通过p38 MAPK/Nrf2/HO-1通路减轻小鼠哮喘模型气道炎症
目的 研究虎杖苷能否减轻小鼠哮喘模型气道炎症,并探究其作用是否与p38 MAPK/Nrf2/HO-1通路有关.方法 建立OVA诱导的小鼠哮喘模型,腹腔注射30、45 mg·kg-1的虎杖苷进行治疗,对照组用生理盐水代替.HE、PAS、Masson染色观察肺组织病理学变化;Diff-Quick染色分类及计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中的炎性细胞总数;ELISA法检测小鼠BALF中IgE的表达水平;双氢罗丹明(DHR)-123方法检测小鼠BALF细胞中ROS含量;试剂盒检测小鼠BALF中抗氧化酶SOD、CAT活性及MDA含量;免疫组化检测肺组织中HO-1的表达;Western blot法检测小鼠肺组织中p-p38 MAPK的表达;Western blot及real-time PCR检测小鼠肺组织中Nrf2、HO-1的蛋白和mRNA表达.结果 虎杖苷治疗明显降低小鼠肺组织中的炎性细胞浸润、黏液分泌和杯状细胞的增生以及胶原沉积;减少BALF中炎症细胞数量,降低BALF中总IgE及ROS的表达水平;提高SOD、CAT等抗氧化酶的水平,并降低MDA水平;虎杖苷降低小鼠肺组织中p38 MAPK的磷酸化,提高Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白的表达,并促进Nrf2的核转移.结论 在OVA诱导的哮喘小鼠模型中,虎杖苷通过抗氧化途径发挥抗炎作用,其作用机制可能是通过p38 MAPK/Nrf2/HO-1通路实现的.
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虎杖苷对缺血缺氧下心肌细胞蛋白激酶C的影响
目的 探讨虎杖苷对缺血缺氧作用下心肌细胞蛋白激酶C(PKC)活性的影响及其抗休克的机制.方法 取大鼠乳鼠心室肌培养心肌细胞,用Koyama方法复制心肌细胞缺血缺氧模型.用γ-闪烁计数仪测定PKC的活性.结果 正常状态下心肌细胞胞质PKC经虎杖苷(PD)刺激后活性下降(vs正常组P＜0.05),但胞膜的PKC活性上升(vs 正常组P＜0.05).缺血缺氧后胞质和胞膜PKC的活性均下降(vs正常组P＜0.05),再经PD处理后胞质胞膜的PKC活性均上升(vs缺血缺氧组P＜0.05,vs正常组P＞0.05).结论 PD对缺血缺氧作用下的心肌有保护作用,可能是通过调节PKC的活性来发挥作用的,这可能是PD抗休克的分子机制之一.
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虎杖苷对缺血缺氧下平滑肌细胞蛋白激酶C的影响
目的观察虎杖苷对缺血缺氧作用下血管平滑肌细胞(VSMC)蛋白激酶C(PKC)活性的影响以探讨其抗休克作用的机制.方法取大鼠胸主动脉培养VSMC,用Koyama方法复制VSMC缺血缺氧模型.用液体闪烁计数仪测定PKC的活性.结果缺血缺氧状态下VSMC胞浆PKC的活性上升(vs正常组 P<0.05),但胞膜的PKC活性下降(vs正常组P<0.05),经PD治疗后胞浆PKC的活性下降(vs缺血缺氧组、治疗对照组P<0.05,vs正常组P>0.05),胞膜的PKC活性上升(vs缺血缺氧组、治疗对照组P<0.05,vs正常组P>0.05).结论 PD对缺血缺氧作用下的VSMC PKC的活性有调节作用,这可能是PD抗休克作用的分子机制之一.
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虎杖苷对LPS作用下心肌细胞β-肾上腺素能受体的调节作用
目的探讨LPS对心肌细胞β肾上腺素能受体(β-AR)功能的影响以及虎杖苷(PD)的防治效果.方法体外培养心肌细胞,利用放射配体竞争结合法检测β-AR数量和亲和力,同时应用流式细胞术检测β-AR数量.结果正常心肌细胞膜上的β-AR大结合容量(Bmax)为(4.14±1.41)fmol·1×105cells-1,解离常数Kd值为(4.02±0.59)nmol·L-1;LPS刺激后,受体Bmax减小为1.78±0.12 fmol·(1×105cells)-1,亲和力下降为(23.88±2.34)nmol·L-1;当用PD处理后,大结合容量和亲和常数都恢复至接近正常,分别为(3.37±0.36)fmol·(1×105cells)-1和(3.44±0.44)nmol·L-1;单纯用PD处理细胞Bmax和Kd都与正常组差异无显著性,分别为(2.76±0.32)fmol·1×105cells)-1和(4.63±1.54)nmol·L-1.流式细胞术检测β-AR数量变化与放射配体结合法检测结果一致.结论 LPS可直接引起心肌细胞β-AR数量下调、亲和力降低,虎杖苷可调节β-AR的功能,使其维持正常水平.
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PPARβ在虎杖苷抗高糖高胰岛素诱导心肌肥大中的作用
目的：观察虎杖苷（polydatin，PD）对高糖高胰岛素[（high glucose and insulin，HGI）葡萄糖25．5 mmol·L －1＋胰岛素0.1μmol·L －1]诱导心肌肥大的影响，并探讨过氧化物酶体增殖物激活受体β（peroxisome proliferator activated receptors-β，PPARβ）、核转录因子κB （nuclear transcription factor-κB，NF-κB）及一氧化氮（nitric oxide，NO）相关信号通路在其中可能存在的作用。方法体外培养乳鼠心肌细胞，以细胞表面积、蛋白含量和心房利钠因子（atrial natriuretic factor，ANF）mRNA 表达作为心肌细胞肥大反应指标；利用qRT-PCR、Western blot 法分别检测 PPARβ、NF-κB p65及诱导型一氧化氮合酶（induced nitric oxide synthase，iNOS）mR-NA 及蛋白表达，硝酸还原酶法和分光光度法分别检测 NO含量和 NOS 活性。结果HGI 作用下，细胞表面积增大、总蛋白含量增加、ANF mRNA 表达升高（P ＜0.01），出现明显的心肌肥大；同时，PPARβ表达降低，而 NF-κB p65、iNOS 表达明显升高；总 NOS 活性及 NO 含量亦增加（P ＜0.01）。PD （0.1、1、10μmol·L －1）明显抑制 HGI 诱导的心肌细胞肥大（P ＜0.01）；并逆转 HGI 对 PPARβ及 NF-κB p65、iNOS 表达和总 NOS 活性、NO 含量的影响。PPARβ选择性阻断剂GSK0660可阻断 PD 对心肌肥大的保护，取消其上述作用（P＜0.05）。结论PD 对 HGI 诱导的心肌肥大具有保护作用，其机制可能与其上调 PPARβ表达，抑制 NF-κB-iNOS-NO信号通路激活有关。
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高效液相色谱法测定虎梅含片中虎杖苷的含量
目的采用高效液相色谱法测定虎梅含片中虎杖苷的含量,以控制该制剂的质量.方法采用Shim-pack CLC-ODS柱,以乙腈-水(18∶ 82)为流动相,检测波长为303 nm,流速1.0 ml·min-1.结果虎杖苷进样量线性范围36.04～360.40 μg,r=0.9999;平均加样回收率为99.83 %,RSD=1.16%(n=6).结论该方法简便、快速、准确.
