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比较三种免疫分析法检测微囊藻毒素-LR
目的 评估微囊藻毒素-LR(MC-LR)的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)、纳米均相时间分辨荧光免疫分析(NH-TRFIA)和酶联免疫分析(ELISA)三种免疫检测方法.方法 通过比较包被板、反应步骤、信号系统和试剂用量,分析反应条件的差异;通过分析灵敏度、精密度和准确性,比较上述方法的性能指标;通过检测实际样品,评估方法的可靠性.结果 NH-TRFIA反应时间短,试剂消耗量少,灵敏度高,量程宽;TRFIA信号强,稳定性佳;三种方法精密度高,相对标准差均小于15％.三种方法检测实际样品与高效液相色谱法的分析结果差异无统计学意义,认为可靠.结论 TRFIA和NH-TRFIA,技术优势明显,应用前景广阔.
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用双标记时间分辨荧光免疫法同时检测黄曲霉毒素B_1和赭曲霉毒素A
目的 采用双标记时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立同时检测黄曲霉毒素B_1(AFB_1)和赭曲霉毒素A(OTA)的高灵敏分析方法.方法 将AFB_1-HRP、OTA-BSA包被96孔板为固相抗原,与游离AFB_1、OTA共同竞争有限的抗AFB_1多克隆抗体或抗OTA单克隆抗体,以稀土离子Eu~(3+)标记的羊抗兔抗体、Sm~(3+)标记羊抗鼠抗体进行示踪,采用间接竞争免疫分析方法在解离增强荧光免疫分析体系中建立AFB_1/OTA-TRFIA.结果 该方法检测AFB_1的灵敏度为0.02μg/L,测量范围为0.02～100μg/L,批内和批间变异系数(CV)分别为3.2%和7.3%,平均回收率为88.1%;检测OTA的灵敏度为0.05μg/L,测量范围为0.05～5μg/L,批内和批阅CV分别为2.9%和7.9%,平均回收率为89.9%,AFB_1/OTA-TRFIA检测时,AFB_1与OTA不相互干扰.样品经双标记AFB_1/OTA-TRFIA与单标记AFB_1-TRFIA、OTA-TRFIA同时检测,与AFB_1-TRFIA两者检测AFB_1结果的相关系数为0.972,与OTA-TRFIA两者检测OTA结果的相关系数为0.981,说明结果相符.结论 AFB_1/OTA-TRFIA灵敏度高,可测范围宽,稳定性好,一次操作可以同时得到AFB_1、OTA的两个结果.是一种简便、快速、经济的可进行大批量样品筛查的方法.
关键词： 黄曲霉毒素B_1 赭曲霉毒素A 时间分辨荧光免疫分析 抗体食品检测 -
盐酸克伦特罗的高灵敏时间分辨荧光免疫分析
目的 采用时间分辨荧光技术建立高灵敏的盐酸克伦特罗(CBL)间接竞争免疫分析法(CBL-TRFIA).方法 以CBL-BSA为免疫原免疫新西兰大白兔制备抗CBL抗体;CBL与卵清蛋白的联结物(CBL-OVA)包被96孔板为固相抗原,与游离CBL共同竞争有限的抗CBL抗体;用稀土离子Eu3+标记的羊抗兔抗体进行示踪.结果 该方法的灵敏度为0.01μg/L,测量范围为0.01～25μg/L,平均回收率为99.7%,RSD 3.9%,与盐酸异丙肾上腺素的交叉反应率为0.01%,与沙丁胺醇、盐酸肾上腺素、重酒石酸去甲肾上腺素无交叉反应.8条不同时间进行的CBL-TRFIA的效应点值ED80、ED50、ED20分别为(0.07±0.01)μg/L、(1.47±0.11)μg/L和(23.6±0.56)μg/L.尿样经TRFIA和ELISA试剂盒同时检测CBL,两者的相关系数为0.932,结果相符.结论 CBL-TRFIA分析方法稳定性好,可测范围宽,具有很好的应用前景.
关键词： 盐酸克伦特罗 时间分辨荧光免疫分析 抗体 -
时间分辨荧光免疫分析技术的临床应用
20世纪80年代以来,随着基础医学的迅速发展,我国的标记免疫学的实验医学技术取得了前所未有的发展.体现在理论水平逐渐提高,技术方法日臻完善,临床应用更加广泛,实践经验不断丰富.任何一门自然学科的发展,都依赖于方法学的创新,临床医学作为实践性学科更是如此.标记免疫分析方法的创立和发展,特别是与分子生物学、细胞生物学这些医学前沿学科的互相交叉,互相渗透,促进了标记免疫学的多样性发展,并广泛用于临床医学各个领域,有力推动了临床各专科的发展,使其成为疾病诊断、疗效观察和医学科研的重要途径和手段.
关键词： 时间分辨荧光免疫分析 标记免疫 镧系元素 -
TRFIA法检测血清FA和VitB12及其临床应用
TRFIA法检测血清叶酸(FA)、维生素B12(VitB12)的含量,探讨其与各种疾病的关系.结果表明:68名对照组血清FA和VitB12分别为20.13±5.72nmol/L和240.45±58.23pmol/L.6例巨幼红细胞贫血组患者、26例中晚期妊娠妇女组和7例肝硬化组患者的FA和VitB12均明显低于对照组;24例恶性血液病组患者FA明显低于对照组,而VitB12极明显高于对照组;31例缺铁性贫血组和12例慢性再障组患者FA和VitB12含量与对照组无显著性差异;9例慢性萎缩性胃炎组患者FA无明显变化,而VitB12明显低于对照组;10例胃溃疡组患者、31例脑梗死组患者的FA和VitB12均明显低于对照组;57例恶性肿瘤组患者FA明显低于对照组,而VitB12明显高于对照组;42名献血员组FA无明显变化,而VitB12明显低于对照组.本文认为血清FA和VitB12的检测对疾病的诊断、治疗及预后判断具有重要意义;同时各实验室应建立本地区人群的正常参考值.
关键词： 时间分辨荧光免疫分析 叶酸 维生素B12 -
体检人群胃蛋白酶原水平分析及异常结果处理对策
目的 分析健康体检人群的血清胃蛋白酶原(PG)水平及其影响因素,并对PG异常者的处理对策进行初步探讨.方法 选择太湖干部疗养院健康体检人员531名为对象,用时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)检测血清PG值,使用13C尿素呼气试验(13 C-UBT)检测该人群的幽门螺杆菌(HP)感染率,并调查分析影响PG水平的相关因素及该人群血清PG异常的检出情况.结果 男性血清PGⅠ水平显著高于女性,而PG Ⅰ＜60μg/L与PG Ⅰ/PGⅡ＜6检出率女性显著高于男性；在20 ～70岁年龄段,随着年龄增长,PGⅠ、PGⅡ水平上升而PG Ⅰ/PGⅡ比值则下降；HP阳性组的血清PG Ⅰ、PGⅡ水平显著高于HP阴性组,而PG Ⅰ/PGⅡ比值则显著低于HP阴性组.结论 健康体检人群中,血清PG水平与年龄、性别、HP感染相关,联合测定血清PGⅠ、PGⅡ,计算PG Ⅰ/PGⅡ比值在健康人群胃病的普查和筛查中具有重要意义.血清PG水平异常较为常见,对该群体的PG异常状况应予重视,应积极对体检人群PG异常者进行分层健康管理.
关键词： 健康体检 胃蛋白酶原 时间分辨荧光免疫分析 13C尿素呼气试验 -
铁蛋白时间分辨荧光免疫分析法的建立
用夹心法建立铁蛋白(FER)时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA),测定血清FER的含量.以FER单克隆抗体(McAb)806#包被板,双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合Eu3+及标记FERMcAb803#,发光增强系统为以β-二酮体为主的增强液.采用双对数函数数据处理程序,方法的批内和批间CV分别为2.2%和3.7%,平均回收率为118%,灵敏度为0.5μg/L,可测范围为0.5-1000μg/L.ED20、ED50和ED80分别为27.8μg/L、88.5μg/L和247μg/L.Eu3+FERMcAb于-30℃保存至少4个月,免疫反应性基本无损失,同批试剂连续分析4个月结果稳定.本法与PE公司的FER-TRFIA试剂盒所得样品的测定值的相关系数为0.98.本文建立的FER-TRFIA法,是一种适用于人群贫血普查和各种肝脏疾病及肿瘤的联合诊断的良好方法,分析范围、灵敏度和稳定性均较理想,值得推广应用.
关键词： 时间分辨荧光免疫分析 铁蛋白 -
新型时间分辨荧光免疫分析螯合剂中间体的合成
为研制新型时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)螯合剂,以2-氨基-6-甲基吡啶为原料两步合成基础化合物6,6'-二甲基-2,2'-二联吡啶,考察了温度,反应时间,pH值和催化剂等因素的影响.结果表明,第一步反应过程必须严格控制反应温度,产率可达82%;第二步反应的pH值应控制在10～11之间,控制反应物的摩尔比,产率可达42.7%.产物经DSC,元素分析,红外光谱和核磁共振谱表征加以确证.
关键词： 时间分辨荧光免疫分析 6 6'-二甲基-2 2'二联吡啶 -
稀土配合物荧光探针的合成
目的 研制可用于时间分辨荧光免疫分析中的稀土配合物荧光探针.方法 以6,6’-二溴二甲基-2,2’-联吡啶-4-甲酸甲酯和1,4,10,13-四氧-7,16-二氮环十八烷为反应原料,合成了Na+-6,6-(二氮杂-18-冠醚-6)-二胺甲基-2,2’-联吡啶-4-甲酸甲酯,并通过核磁氢谱、质谱等分析手段确认了化合物的结构.结果 对该化合物与Eu3+连接形成的稀土配合物荧光探针的荧光性质进行研究,结果表明其激发光谱波长范围较宽,大激发波长为363 nm,特征发射波长为583 nm与621 nm,归属于5D0-7Fj=1,2跃迁,Stokes位移为258 nm,荧光寿命为1456 μs.结论 该稀土配合物荧光探针符合时间分辨荧光分析技术所需要求,具有广泛的应用前景.
关键词： 时间分辨荧光免疫分析 稀土配合物 荧光探针 -
层粘连蛋白时间分辨免疫分析方法的建立
采用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立高灵敏的层粘连蛋白(LN)的快速的全自动检测方法.以羊抗鼠IgG抗体包被板,采用抗人LN单克隆抗体(McAb)、Eu3+标记人LN和以β-二酮体为主的增强液建立竞争LN-TRFIA,数据采用双对数函数处理程序处理.结果表明LN的标记率为11.5 Eu3+/LN,方法的批内和批间CV分别为3.9%和6.7%,平均回收率为91.2%,灵敏度为5μg/L,可测范围为5～1000μg/L,ED20、ED50和ED80分别为723.1μg/L、183.4μg/L和56.95μg/L.临床结果与RIA结果相符.本文建立的LN-TRFIA灵敏、稳定,可全自动操作,有很好的应用前景.
关键词： 时间分辨荧光免疫分析 层粘连蛋白 -
乙肝病毒表面抗体TRFIA方法的建立及其应用
建立乙型肝炎病毒表面抗体(抗-HBs)的时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA).检测体系由纯化的HBsAg包被的微孔板、Eu3+标记的HBsAg、抗-HBs系列标准品和增强液组成,采用双抗原夹心法定量检测人血清或血浆抗HBs.测定药检所2、5、10 mIU/mL SAb血清盘均可准确检出,阴性血清(20/20)符合率为100%,CV为2.5%.测定范围为5～2000 mIU/mL,正常参考值小于10 mIU/mL.用本法与固相RIA、ELISA和ECLIA对1189份临床血样进行考核,并与参比试剂盒临床符合率一致,具有同等的临床诊断价值.
关键词： 乙型肝炎病毒表面抗体 时间分辨荧光免疫分析 -
用ROC曲线比较TRFIA和RIA检测AFP在HCC诊断中的价值
分别用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)和RIA法检测血清AFP浓度,比较两种检测方法对原发性肝细胞癌(HCC)诊断的临床应用价值.选择门诊和住院期间得到确诊的原发性肝癌患者118例和肝良性病变患者123例,分别用TRFIA和RIA法检测受试者血清AFP浓度,并行工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析.以正常对照组95%区间为医学正常值范围,TRFIA法和RIA法诊断肝癌的临床界限值分别为7.2ng/mL和23.2ng/mL.TRFIA诊断肝癌的灵敏度为45.8%,特异性为92.4%,诊断准确率为75.9%.RIA法的灵敏度为40.7%,特异性为91.4%,诊断准确率为67.6%.两种检测方法ROC曲线下面积分别为0.759(TRFIA)和0.676(RIA).TRFIA和RIA法都可以满足临床AFP检测需要,但TRFIA法明显优于RIA法.
关键词： ROC曲线 时间分辨荧光免疫分析 放射免疫分析 肝癌 -
时间分辨荧光免疫法测定血清AFP的方法学评价
对时间分辨荧光免疫法(TRFIA)测定血清AFP的方法学予以评价.评价TRFIA法测定AFP的线性范围、灵敏度、精密度、回收率及与ELISA法和RIA法的相关性.结果显示:AFP线性范围1～1000U/mL,检测下限≤0.1 U/mL,批内及批间变异系数分别为2.3%、5.3%,回收率97.85%,与ELISA法及RIA法高度相关,r值分别为0.982与0.991.正常血清AFP参考值0.8～10.5 U/mL.结论:TRFIA测定AFP线性范围宽,稳定性好,灵敏度与准确度高,无放射性污染,是当前免疫分析中有发展前途的一项超微量检测技术.
关键词： 时间分辨荧光免疫分析 铕标记物 甲胎蛋白 -
固相时间分辨荧光免疫分析的标记技术及标记过程中的蛋白质测定
利用新型双功能螯合剂-4,7-二氯磺酰基苯基-1,10-菲啰啉-2,9-二羧酸(BCPDA)进行固相时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)标记技术研究,结合标记牛血清白蛋白(BSA)实验,研究测定蛋白质方法,监测标记过程,计算回收率、标记比.确定考马斯亮蓝染色法为该体系标记研究中测定蛋白质含量方法.
关键词： 时间分辨荧光免疫分析 BCPDA 蛋白质测定 考马斯亮蓝染色法 -
血清胰岛素TRFIA的建立
目的 建立血清胰岛素( Ins)时间分辨荧光免疫分析法(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA).方法 采用一株Ins-MAb包被于固相微孔板上,另一株Ins-MAb用DTTA- Eu3+标记作为示踪剂采用Victor 1420荧光仪测定,.并对本法进行评价.结果 本法的标准曲线范围为5～ 160 mU/L.灵敏度为0.35mU/L.检测3个浓度的Ins样品,批内CV为0.90％ ～4.10％,批间CV为4.55％～4.96％.平均回收率为97.7％～102.9％.用本法与DSL酶免分析方法同时测定80份血清样品,相关系数为0.982.结论 本文建立的Ins-TRFIA具有特异性强、灵敏度高及操作简单等优点,适用于临床血清Ins的检测.
关键词： 胰岛素 铕 时间分辨荧光免疫分析 单克隆抗体 血清 -
CA19-9时间分辨荧光免疫分析方法建立及EDTA处理血浆对其测定结果的影响
建立双抗体夹心法CA19-9时间分辨荧光免疫分析(TRFIA),探讨抗凝剂EDTA对其检测结果的影响,并对本法的稳定性和与Abbort Axsym测定结果的相关性等指标进行评价.分别按一步法和二步法对CA19-9进行测定,并比较血清标本和用EDTA处理的血浆标本对CA19-9结果的影响.结果表明本试剂盒的线性范围为0.19～600U/mL,灵敏度为0.19U/mL,批内和批间CV(%)分别为1.1%～5.4%,1.2%～5.6%.对3230份标本用本试剂盒检测与Abbort Axsym试剂盒检测结果相关系数为0.931.一步法中EDTA处理血浆标本的检测结果明显低于血清标本,二步法中两者无显著性差异.本试剂盒各项指标达到规定的要求,可用于临床血清CA19-9检测.使用中采用血清或血浆标本时要用二步法进行测定,以减少EDTA对结果的影响.
关键词： 时间分辨荧光免疫分析 CA19-9 EDTA -
昆明地区正常人甲状腺相关激素时间分辨荧光免疫分析
为确定本地区甲状腺相关激素时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)的正常参考值范围,对本地区96名正常成人血清T3、T4、TSH、FT3和FT4作TRFIA测定.测量结果批间CV＜5%,批内CV＜2%;本地区正常参考值范围为:T4:66-171nmol/L;T3:1.0-2.5nmol/L;TSH:0.3-4.5mIU/L;FT3:3.1-7.02pmol/L;FT4:6.4-22.0pmol/L.
关键词： 时间分辨荧光免疫分析 正常值 甲状腺相关激素 -
促甲状腺激素生物素-链亲和素TRFIA定量检测法的建立
用Eu3+标记链亲和素(SA),分别用两株识别人促甲状腺素(human thyroid stimulating hormone,hTSH)的单克隆抗体包被96微孔板并生物素化,建立了高灵敏的hTSH生物素-链亲和素(BAS)时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)检测法.本法的灵敏度为0.02mIU/L;批内CV为2.7%～3.5%,批间CV为3.2%～3.8%;平均回收率为100.26%;与电化学发光免疫分析技术(ECLIA)比对,相关系数达0.9544, 线性方程为Y=1.3133X-32.297;与ECLIA临床测定值也呈明显相关;正常值范围为0.33～3.09mIU/L.本文建立的hTSH-BAS-TRFIA具有灵敏度高,特异性强,稳定性好,测定范围宽,检测时间短和非放射性等优点,具有良好的应用价值.
关键词： 促甲状腺激素 时间分辨荧光免疫分析 生物素-链亲和素 -
弓形虫IgG时间分辨免疫荧光分析法的建立
建立了高灵敏弓形虫-IgG的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)检测方法.样品或参考标准加入到由弓形虫抗原包被的96孔微孔板上,用Eu3+标记羊抗人IgG,建立间接弓形虫-IgG TRFIA检测法.本法检测范围为0.7～200 U/mL, 灵敏度为0.7U/mL;方法的平均批内和批间CV分别为4.5%和5.6%;标准曲线可测范围为0.7～14U/mL. 本文建立的弓形虫-IgG的TRFIA法灵敏度高、稳定性好,具有良好的应用前景.
关键词： 弓形虫 弓形虫-IgG 抗人IgG 时间分辨荧光免疫分析 -
CEA时间分辨荧光免疫分析
以CEA单克隆抗体C50包被微孔板,异硫氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合Eu3+标记C17单抗.采用平衡法建立CEA时间分辨荧光免疫分析,数据采用Log-Logit函数和四参数logit函数数据处理程序处理.方法的批内和批间CV分别为2.97%和1.60%,平均回收率为101.98%,灵敏度为0.20μg/L,可测范围为2.39～508.9μg/L,ED50为60.91±0.56μg/L.本方法与AFP和CA125和CA153无交叉,与CA199有3.22%的交叉反应.Eus+标记抗体于-30℃保存一年多,免疫反应性基本无损失,同批试剂连续5个月分析结果稳定.与wallac同类产品比较,结果吻合.
关键词： 时间分辨荧光免疫分析 癌胚抗原
