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固相时间分辨荧光免疫分析的标记技术及标记过程中的蛋白质测定
利用新型双功能螯合剂-4,7-二氯磺酰基苯基-1,10-菲啰啉-2,9-二羧酸(BCPDA)进行固相时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)标记技术研究,结合标记牛血清白蛋白(BSA)实验,研究测定蛋白质方法,监测标记过程,计算回收率、标记比.确定考马斯亮蓝染色法为该体系标记研究中测定蛋白质含量方法.
关键词： 时间分辨荧光免疫分析 BCPDA 蛋白质测定 考马斯亮蓝染色法 -
几种双向凝胶电泳蛋白质检测方法的比较
本研究对蛋白质染色法进行比较和分析,以求获得满足蛋白质组研究所需的适宜的蛋白质检测法.实验采用2-D电泳分离急性早幼粒白血病细胞株NB4的全蛋白及1-D电泳分离蛋白质分子量标准物,从蛋白质检测的灵敏性、质谱兼容性、操作的简便性等角度,比较了传统考马斯亮蓝染色法、胶体考马斯亮蓝染色法、改良考马斯亮蓝染色法和银染法4种蛋白质着色法对凝胶分离蛋白质的检测影响,探讨了影响蛋白质染色与鉴定的影响因素.结果显示,银染检测灵敏度高,但质谱鉴定相容性差,鉴定率近10%;改良考马斯亮蓝染色法检测灵敏度也高,可达4 ng/spot,质谱鉴定率可接近55%.结论:改良考马斯亮蓝染色法的蛋白质检测灵敏度高,与质谱兼容好,能满足蛋白质组研究需要.
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人精子顶体反应3种检测方法的比较与评价
目的:寻找简便和准确的精子顶体反应检测方法.方法:正常人精液标本液化后混合,分成6组,分别用金霉素染色法、考马斯亮蓝染色法和酸性磷酸酶检测法对孕酮诱导顶体反应前后的人精子进行形态学观察并且对顶体反应率进行数据统计.结果:经考马斯亮蓝和金霉素染色后,发生顶体反应的精子和没有发生顶体反应的精子均有明显的形态差异;经考马斯亮蓝染色、金霉素荧光染色和酸性磷酸酶测试法检验,孕酮诱导组与阴性对照组的精子顶体反应率均有明显差异(P＜0.05).结论:3种方法均可作为顶体反应的检测手段,但考马斯亮蓝染色更为简便和稳定.
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丹参药材蛋白质提取工艺的优选研究
目的：优选丹参药材可溶性蛋白质的佳提取工艺，为探讨丹参寒热药性与蛋白质含量的相关性提供实验依据。方法：对丹参药材蛋白质提取条件进行单因素考察，并采用L9（34）正交试验设计法，采用考马斯亮蓝染色法，以丹参药材可溶性蛋白质含量为指标，考察料液比、pH值、提取温度、提取时间四个因素对可溶性蛋白质提取率的影响，从而确定丹参药材蛋白质的佳提取工艺。结果：建立了丹参药材蛋白质的佳提取工艺：药材粉末中加入30倍量pH值为10的蒸馏水，在60℃条件下超声提取50 min。结论：优化的提取工艺稳定、合理、可行，能正确反映丹参药材中的蛋白质含量。
