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YB-1与EMT对肿瘤发生与治疗影响的研究进展
Y‐box结合蛋白1（Y‐box binding protein 1，YB‐1）属于冷休克结构域（cold shock domain ，CSD）家族中的一员，在原核及真核生物细胞中普遍存在，是一种与肿瘤生长、增殖及耐药性密切相关的多功能蛋白［1～3］。大量研究证实，Y B‐1在多种恶性肿瘤中过表达，如膀胱癌、宫颈癌及前列腺癌［4～6］等。上皮‐间质转化（epithelial‐mesenchymal transi‐tion ，EM T ）是上皮细胞表型丧失，而获得间充质细胞表型的一种生物学过程，与肿瘤的发生发展、侵袭转移等密切相关。基于YB‐1与EM T在肿瘤中的作用，近年来，YB‐1与 EM T成了肿瘤研究中的热点。对 YB‐1及 EM T 的不断深入研究，以YB‐1、EM T作为肿瘤疾病诊断的一种新的标志物和治疗靶点将成为可能。
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Twist基因在胃癌中表达与EMT现象的研究
目的:研究Twist、E-cadherin、N-cadherin在胃癌组织中的表达及上皮-间质转化(EMT)现象,探讨其与胃癌侵袭转移的关系.方法:分别采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化方法检测58例胃癌组织和对应癌旁组织中介导EMT发生的转录因子Twist、上皮性标记基因E-cadherin以及间质性标记基因N-cadherin的表达情况.结果:胃癌组织中Twist、E-cadherin以及N-cadherin蛋白阳性表达率分别为75.8%、36.2%、44.8%,癌旁组织分别为32.7%、91.3%、12.1%,3种蛋白在胃癌组织中及癌旁组织的表达差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05).与癌旁组织相比,Twist mRNA和N-cadherin mRNA在胃癌组织中表达明显上调,E-cadherin mRNA表达下调. 结论:Twist介导的EMT发生可能与胃癌的侵袭转移有关.
关键词： Twist E-cadherin N-cadherin 胃癌 上皮-间质转化 -
宫颈鳞状细胞癌原发灶及淋巴结转移灶中ki67及E-cadherin的表达
目的 检测宫颈鳞状细胞癌原发灶及淋巴结转移灶中细胞增殖标记ki67及上皮型黏附分子(E-cadherin)的表达差异,探讨两者在细胞增殖及迁移特性的差异.方法 60例有淋巴结转移的宫颈鳞状细胞癌,采用免疫组化检测ki67及E-cadherin在宫颈鳞状细胞癌原发灶及相应淋巴结转移灶中的表达差异.结果 原发灶及淋巴结转移灶中ki67阳性表达率均为85.0%(51/60),两者密切相关(P＜0.01).E-cadherin在原发灶及淋巴结转移灶中的阳性表达率分别为56.67%(34/60)和63.33%(38/60);两者的表达差异有统计学意义(P＜0.01).结论 宫颈鳞状细胞癌组织原发灶及淋巴结转移灶细胞增殖标记ki67高度一致,其细胞增殖能力没有异质性;而E-cadherin表达上调,提示淋巴结转移过程中在局部转移灶肿瘤细胞发生了间质-上皮转化.
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慢病毒介导核转录因子-κB诱导激酶和IκB激酶连接蛋白基因沉默对人结肠癌细胞上皮-间质转化的影响
目的 探讨慢病毒介导的核转录因子-κB诱导激酶和IκB激酶连接蛋白(NIBP)基因沉默后对人结肠癌HCT116细胞上皮-间质转化(EMT)的影响.方法 通过DNA重组技术,进行设计并构建人NIBP基因的慢病毒载体以及无关序列的Lenti-EGFP慢病毒载体,感染HCT116细胞后分别为转染组(NIBP-RNAi组)和阴性对照组(NC组),而未予转染处理的HCT116细胞则为空白对照组(CON组).将实验分为非肿瘤坏死因子-α (TNF-α)组和TNF-α组:非TNF-α组包括NIBP-RNAi组、NC组、CON组,TNF-α组包括NIBP-RNAi+TNF-α组(NIBP-RNAi+组)、NC+TNF-α组(NC+组)、CON+ TNF-α组(CON+组),其中TNF-α组均予TNF-α进行干预.检测非TNF-α组NIBP mRNA及蛋白的表达情况,以及各组上皮性钙黏附分子(E-cadherin)和神经性钙黏附分子(N-cadherin)mRNA及蛋白的表达;采用倒置相差显微镜观察各组细胞形态的变化.结果 NIBP-RNAi组NIBP的mRNA及蛋白表达均显著低于NC组及CON组(P＜0.05);与CON组比较,CON+组、NC+组的细胞发生明显的EMT,E-cadherin的mRNA和蛋白的表达均明显降低、N-cadherin的mRNA和蛋白的表达均明显上升(P＜0.05),NIBP-RNAi组及NIBP-RNAi+组的细胞由间质细胞形态转变为上皮细胞形态,E-cadherin的mRNA和蛋白的表达均明显上升、N-cadherin的mRNA和蛋白的表达均明显降低(P＜0.05);而CON组和NC组比较,以及CON+组和NC+组E-cadherin及N-cadherin的mRNA和蛋白表达比较,差异均无统计意义(P＞0.05).结论 靶向下调NIBP基因表达可抑制人结肠癌HCT116细胞EMT的发生.
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人间充质干细胞对人前列腺癌细胞上皮-间质转化和侵袭能力的影响
目的：探讨间充质干细胞（ MSCs ）对人前列腺癌细胞上皮-间质转化（ EMT ）和侵袭能力的影响。方法以干扰素γ（IFNγ）预处理的间充质干细胞[MSCs（IFNγ）]的培养上清处理人前列腺癌PC-3细胞，观察PC-3细胞形态的变化，并以划痕实验、Transwell实验检测PC-3细胞的迁移、侵袭能力，使用实时定量聚合酶联反应（ qRT-PCR）法检测EMT相关的基因E-cadherin、Vimentin、N-cadherin的mRNA表达情况。结果与PBS预处理的对照组相比，实验组的PC-3细胞有从上皮的类圆形细胞向间质的梭形细胞转化的趋势；与对照组相比，实验组中E-cadherin mRNA表达下调，而Vimentin及N-cadherin mRNA表达上调（ P均＜0．05）；实验组PC-3细胞的迁移和侵袭能力均强于对照组（P＜0．05）。结论 IFNγ预处理的MSCs可促进前列腺癌细胞发生EMT，并使得前列腺癌细胞迁移、侵袭能力增强。
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肉瘤样肝细胞癌是典型的上皮-间质转化肿瘤范例
目的:探讨肝细胞癌肉瘤样转化过程中上皮-间质转化相关标记的改变.方法:采用免疫组化方法检测肉瘤样肝细胞癌中肉瘤样区域和经典型肝细胞癌区域上皮-间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)相关标记表达.结果:与经典型肝细胞癌区域比较,肉瘤样区域上皮标记E-cadherin、β-catenin表达均下调,间质标记Vimentin表达上调.结论:典型肝细胞癌转化来的肉瘤样肝细胞癌发生了上皮-间质转化样分子改变,肉瘤样肝细胞癌是肿瘤进展过程中一个典型的EMT范例.
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肉瘤样肝细胞肝癌的临床病理特点及研究进展
肉瘤样肝细胞肝癌是肝细胞肝癌的特殊亚型,主要发生于老年男性,其转移率高,预后差,大部分患者常1年内死亡,经典肝细胞肝癌治疗后发生的肉瘤样转化是其发生的主要来源.目前,关于其发病机制的研究仍不清楚,笔者就肉瘤样肝细胞肝癌的临床病理特点以及研究进展做一综述.
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食管癌组织中Slug表达量与癌细胞上皮-间质转化及侵袭特性的相关性
目的:探讨食管癌组织中Slug表达量与癌细胞上皮-间质转化及侵袭特性的相关性.方法:收集在本院接受根治性手术治疗的食管癌患者78例,取术中食管癌组织及癌旁正常组织标本.采用荧光定量PCR法测定标本组织中Slug基因及侵袭基因的mRNA表达量,采用western-blot法测定上皮-间质转化相关指标的蛋白表达量,采用Pearson检验法评估食管癌组织中Slug表达量与癌细胞上皮-间质转化、侵袭活性的相关关系.结果:食管癌组织中Slug mRNA的表达量显著高于癌旁组织(P<0.05).食管癌组织中上皮-间质转化标志物E-cadherin的蛋白表达量低于癌旁组织,Vimentin、N-cadherin的蛋白表达量高于癌旁组织,促侵袭基因Ezrin、FAT10、Survivin、MCP-1、RhoA的mRNA表达量均高于癌旁组织,侵袭抑制基因DEC1、PTEN、p53的mRNA表达量均低于癌旁组织(P均<0.05).食管癌组织中Slug mRNA的表达量与上皮-间质转化标志物E-cadherin的蛋白表达量呈负相关,与Vimentin、N-cadherin的蛋白表达量呈正相关,与促侵袭基因Ezrin、FAT10、Survivin、MCP-1、RhoA的mRNA表达量呈正相关,与侵袭抑制基因DEC1、PTEN、p53的mRNA表达量呈负相关.结论:食管癌组织中Slug表达量高于癌旁组织,且Slug表达量与癌细胞上皮-间质转化及侵袭活性直接相关.
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Twist表达情况与乳腺癌细胞株多药耐药性的相关性研究
目的:研究Twist表达情况与乳腺癌细胞株多药耐药性的相关性.方法:培养人乳腺癌细胞株MCF-7、人乳腺癌顺铂耐药性细胞MCF-7/DDP、人乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7/Adr、人乳腺癌紫杉类耐药细胞株MCF/PTX,过表达人乳腺癌细胞株MCF-7中的Twist并用阿霉素进行处理,测定细胞活力、EMT标志分子以及相关信号通路分子的表达量.结果:乳腺癌耐药细胞株MCF-7/DDP、MCF-7/Adr、MCF/PTX中Twist的mRNA含量和蛋白含量均高于MCF-7细胞株;阿霉素处理后,MCF-7细胞株的细胞活力抑制率均高于MCF-7/Adr、MCF-7/Twist细胞株;MCF-7/Adr细胞株、MCF-7/Twist细胞株中E-cadherin的表达量低于MCF-7细胞株,N-cadherin、Vimentin、TGF-β、Smad、Wnt、β-catenin、TNF-α、NF-kB的mRNA含量和蛋白含量高于MCF-7细胞株.结论:Twist表达增加与乳腺癌细胞耐药性的产生有关.
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肺癌组织中转录因子Klf8的表达及下调肺癌细胞株中Klf8表达的生物学效应
目的:研究肺癌组织中转录因子Klf8的表达及下调肺癌细胞株中Klf8表达的生物学效应.方法:收集癌组织和癌旁正常肺组织,检测Klf8的mRNA含量;培养肺癌A549细胞株,转染Klf8的siR-NA后测定细胞周期、细胞侵袭以及上皮-间质转化.结果:肺癌组织中Klf8的mRNA含量高于癌旁正常肺组织;转染Klf8的siRNA后,Klf8 mRNA的抑制率为74.31％;Klf8 siRNA组细胞中G0/G1期比例高于阴性对照siRNA组,S期细胞和G2/M期细胞比例、Cyclin D1的mRNA含量、侵袭至transwell微孔膜外侧面的细胞数目低于阴性对照siRNA组;Klf8 siRNA组细胞中CDH1、CK18以及Snail、Slug的mRNA含量高于阴性对照siRNA组,VIM、N-cadherin的mRNA含量低于阴性对照siRNA组.结论:肺癌组织中Klf8表达量异常升高;下调肺癌细胞株中Klf8表达能够抑制细胞的恶性生物学效应,表现为细胞周期停滞、细胞侵袭过程和上皮-间质转化过程抑制.
关键词： 肺癌 Krüppel样转录因子 细胞周期 细胞侵袭 上皮-间质转化 -
槲皮素抑制胃癌上皮-间质转化的研究
目的:研究槲皮素对TGFβ-1诱导的人胃癌BGC-803细胞上皮间质转化的影响及机制.方法:将胃癌BGC-803细胞分为3组,分别为正常对照组、TGFβ-1组、TGFβ-1+槲皮素组,分别在第12、24、48和72 h后,采用MTT法检测各组细胞增殖能力,划痕修复实验检测各组细胞迁移能力;并采用Western blot实验检测上皮间质转化因子,E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达情况.同时对PI3K/AKT信号转导通路的活性进行评价.结果:与TGFβ-1组相比,槲皮素降低了人胃癌BGC-803细胞的增值能力、迁移能力;TGFβ-1+槲皮素组E-cadherin表达水平上调,N-cadherin、Vimentin的表达下调.TGFβ-1+槲皮素组的AKT、p-AKT表达水平下调,PI3K/AKT信号转导通路活性降低.结论:槲皮素能够抑制TGFB-1诱导的胃癌细胞系的EMT过程,其发生机制可能与调控PI3K/AKT信号转导通路活性有关.
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高糖状态下人视网膜色素上皮细胞氧化应激损伤情况以及上皮-间质转化情况评估
目的：：研究高糖环境对人视网膜色素上皮(RPE)细胞氧化应激损伤情况以及上皮-间质转化的影响.方法：培养人 RPE 细胞,并分为低糖对照组、高渗对照组、高糖干预组,分别用葡萄糖浓度为5．5 mmol/L 的 DMEM 培养基、渗透浓度为60．0 mmol/L 且葡萄糖浓度为5．5 mmol/L 的 DMEM 培养基、葡萄糖浓度为60．0 mmol/L 的 DMEM 培养基处理,24 h 后测定细胞中氧化应激分子、细胞凋亡分子以及间质细胞标志分子的含量.结果：高糖干预组细胞中 ROS、MDA、3-NT、Nrf2、ARE、Caspase-3、Bax、JNK、c-JUN、α-SMA、Vimentin、N-cadherin 的含量均显著高于低糖对照组和高渗对照组,GST、HO-1的含量均显著低于低糖对照组和高渗对照组；低糖对照组和高渗对照组细胞中 ROS、MDA、3-NT、Nrf2、ARE、Caspase-3、Bax、JNK、c-JUN、α-SMA、Vimentin、N-cadherin、GST、HO-1的含量无显著性差异.结论：高糖环境能够通过增强 RPE 细胞的氧化应激反应来启动细胞的凋亡过程以及上皮间质转化过程.
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乳腺癌中转录因子Twist表达及生物学效应的研究进展
Twist基因所编码的蛋白是一种碱性螺旋-环-螺旋(basic helix-loop-helix)类型的转录因子,不仅在胚胎发育过程中发挥了重要作用,还参与了恶性肿瘤的发生和发展.乳腺癌是女性发病率高的恶性肿瘤,临床上主要进行手术切除、放疗、靶向治疗、内分泌治疗等综合治疗,对患者的预后具有显著的改善效果.但是,乳腺癌的发病机制尚未阐明,在乳腺癌发生和发展过程中发挥关键作用的分子也尚未阐明.这也直接导致乳腺癌缺乏特效性的靶向药物.近年来越来越多的研究证实,Twist基因表达异常与乳腺癌的发生发展以及多种生物学行为的调控相关[1-3].本文对乳腺癌中转录因子Twist表达及生物学效应的研究进行了综述.
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P120ctn基因沉默促进舌癌细胞上皮-间质转化
目的 探索P120-连环蛋白(P120ctn)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)上皮-间质转化(EMT)中的作用.方法 采用质粒pGFP-V-RS-P120ctn shRNA转染人舌鳞癌细胞(TSCCA),采用实时荧光定量聚合酶链反应、Western blot检测细胞中P120ctn、E-钙黏蛋白(E-cad)、N-钙黏蛋白(N-cad)和波形蛋白(Vim)的mRNA和蛋白表达的变化,通过Transwell细胞侵袭及细胞迁移试验检测转染前、后细胞迁移和侵袭能力的变化.结果 用质粒pGFP-V-RS-P120ctn shRNA转染TSCCA后发现,随着P120ctn表达的明显降低,E-cad的mRNA和蛋白表达水平明显降低,N-cad和Vim的mRNA和蛋白表达水平明显升高,细胞迁移和侵袭能力明显提高,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 在OSCC中P120ctn可能通过调控EMT标记物E-cad的表达参与EMT的发生,调节肿瘤的侵袭和转移.
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渐尖毛蕨二氢黄酮苷对糖尿病肾病大鼠肾上皮-间质转化的影响
目的:考察渐尖毛蕨二氢黄酮苷(CAF)对糖尿病肾病(DKD)大鼠肾上皮-间质转化(EMT)的影响.方法:将大鼠随机分为正常组(生理盐水)、模型组(生理盐水)、阳性组[罗格列酮,0.4 mg/(kg·d)]和CAF高、低剂量组[12.5、25 mg/(kg·d)],每组10只.除正常组的其余大鼠均采用ip链脲霉素(60 mg/kg)+高脂饮食诱导DKD的发生,并于实验第13~16周同时ig相应药物.实验结束后,检测大鼠空腹血糖值和血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)含量,观察肾组织胶原沉积及基底膜增厚情况,免疫组化法检测肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(fibronectin)和上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)表达,Western blot法检测肾组织中糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)和β-链蛋白(β-catenin)的表达.结果:与正常组比较,模型组大鼠空腹血糖值和Scr、BUN含量均显著升高(P<0.01);肾组织有明显胶原沉积、基底膜增厚;肾组织中α-SMA、fibronectin、β-catenin表达水平和GSK-3β磷酸化程度均显著升高(P<0.01),E-cadherin表达水平显著降低(P<0.01).与模型组比较,各给药组大鼠空腹血糖值和Scr、BUN含量均显著降低(P<0.05或P<0.01);肾组织胶原沉积和基底膜增厚情况显著改善;肾组织中α-SMA、fibro-nectin、β-catenin表达水平和GSK-3β磷酸化程度均显著降低(P<0.05或P<0.01),阳性组和CAF高剂量组大鼠肾组织中E-cad-herin表达水平显著升高(P<0.01).结论:CAF能抑制DKD大鼠的肾EMT,其作用的分子机制可能与下调肾组织中β-catenin表达和抑制GSK-3β磷酸化失活有关.
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桔皮素对人肝癌HepG2细胞体外增殖和侵袭的影响及机制研究
目的：考察桔皮素对人肝癌HepG2细胞体外增殖和侵袭的影响，并探讨其作用机制。方法：以0（空白对照组）、10、20、40、60、80μmol/L桔皮素分别作用于细胞24、48 h后，采用CCK-8法检测细胞增殖率，并计算其半数抑制浓度（IC50）。以0、20、30μmol/L桔皮素作用细胞48 h后，采用Transwell侵袭实验考察其对细胞侵袭的影响；并分别采用实时荧光定量聚合酶链式反应法和Western blot法考察其对细胞中E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、Notch-1、免疫细胞表面抗原44（CD44）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）mRNA及其蛋白表达的影响；采用Western blot法考察蛋白激酶B（Akt）、糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）的磷酸化水平。结果：10～80μmol/L桔皮素对人肝癌HepG2细胞的体外增殖均具有明显的抑制作用，且呈时间和剂量依赖性，增殖率较空白对照组显著降低（P＜0.05），作用24、48 h后的IC50分别为55.7、23.4μmol/L。20、30μmol/L桔皮素作用48 h后，细胞侵袭能力明显受到抑制；细胞中N-cadherin、Vimentin、Notch-1、CD44和MMP-9 mRNA及其蛋白水平表达明显降低，E-cadherin mRNA及其蛋白表达水平明显升高，且Akt、GSK-3β磷酸化水平升高，较空白对照组差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：桔皮素可抑制人肝癌HepG2细胞的体外增殖和侵袭；其机制可能与下调细胞中Notch-1表达、抑制细胞的上皮-间质转化而抑制CD44和MMP-9的表达，以及抑制其上游Akt-GSK-3β信号途径有关。
关键词： 桔皮素 人肝癌HepG2细胞 增殖 侵袭 上皮-间质转化 -
黄酮哌酯对前列腺增生模型大鼠的保护作用机制研究
目的：研究黄酮哌酯对前列腺增生（BPH）模型大鼠的保护作用机制。方法：将大鼠随机分为假手术组、模型组和黄酮哌酯高、低剂量组（80、40 mg/kg），每组8只。除假手术组外，其余各组大鼠通过去势和注射丙酸睾酮复制BPH模型，丙酸睾酮注射1 h后每组大鼠ig相应药物，每日1次，连续4周。末次给药后，考察前列腺指数；采用天狼星红和Masson染色检测前列腺胶原沉积；免疫组化检测前列腺Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白（FN）和上皮钙黏着蛋白（E-cadherin）的表达；酶联免疫吸附法检测前列腺组织中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化酶（GPx）、丙二醛（MDA）、表皮生长因子（EGF）和血管内皮生长因子（VEGF）的水平；实时荧光定量聚合酶链反应法检测微小RNA21（miR-21）和转化生长因子β1（TGF-β1）水平。结果：与假手术组比较，模型组大鼠前列腺胶原沉积增多，前列腺指数、FN表达、MDA含量和VEGF、EGF、miR-21、TGF-β1水平均升高（P＜0.05），E-cadherin表达、SOD和GPx活力均降低（P＜0.05）。与模型组比较，黄酮哌酯高、低剂量组大鼠前列腺胶原沉积减少，前列腺指数、FN表达、MDA含量和VEGF、EGF、miR-21、TGF-β1水平均降低（P＜0.05），E-cadherin表达、SOD和GPx活力均升高（P＜0.05）。结论：黄酮哌酯抗BPH的机制可能与下调miR-21和TGF-β1表达，抑制氧化应激和血管生成，改善上皮-间质转化有关。
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迷走神经递质P物质对人类肝癌细胞侵袭转移能力的影响及其分子机制
目的 探讨迷走神经递质P物质对肝癌细胞侵袭转移能力的影响及其相关分子机制.方法 实时荧光定量PCR及琼脂糖凝胶电泳检测并分析两种人肝癌细胞株HepG2和SMMC-7721中神经肽-1(NK-1)受体表达;CellTiter Blue检测不同浓度P物质(0、100、250、500nmol/L)在不同时间点(0、24、48、72、96、120 h)对肝癌细胞增殖能力的影响;肝癌细胞均经不同浓度的(0 nmol/L,对照组;100 nmol/L,实验组)P物质处理48 h,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭功能,Western blot检测细胞中上皮-间质转化蛋白质标志表达变化,实时荧光定量PCR及Western blot检测NK-1受体表达变化.结果 HepG2和SMMC-7721两种人肝癌细胞中均有NK-1受体表达;不同浓度P物质(0、100、250、500 nmol/L)在96 h内不影响两种细胞的增殖能力(P＞0.05),而在120 h 250 nmol/L和500nmol/L P物质可抑制两种细胞增殖(P＜ 0.05);100 nmol/L P物质明显促进两种细胞迁移和侵袭能力(P＜0.05);与对照组相比,实验组细胞NK-1受体表达明显上调(P＜0.05),同时,细胞中上皮-间质转化蛋白质标志E-Cadherin表达下调,N-Cadherin和Slug表达上调(P＜0.05).结论 迷走神经递质P物质与人肝癌细胞中表达的NK-1受体相互作用并使其表达上调,促进细胞发生上皮-间质转化,进而提高其侵袭转移能力.
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Trps1调控胆管上皮细胞上皮-间质转化的实验研究
目的 探讨毛发鼻指(趾)综合征1型相关基因(tricho-rhino-pharyngeal syndrome type 1,Trps1)在冷保存再灌注损伤(cold preservation reperfusion injury,CPRI)诱导人肝内胆管上皮细胞(human intrahepatic biliary epithelial cells,HIBECs)上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用.方法 体外模拟CPRI处理HIBECs检测上皮标志物E-cadherin、CK19,间质标志物Vimentin、α-SMA及目标基因Trps1的表达.用Trps1腺病毒或Trps1 siRNA载体转染HIBECs后,重复CPRI诱导实验,探讨Trps1对HIBECs EMT的调控作用.结果 随着冷保存时间的延长,上皮标志物E-cadherin、CK19 mRNA和蛋白表达持续减少(P=0.018,0.011;P=0.039,0.044),间质标志物Vimentin、α-SMA表达持续增加(P=0.002,0.026;P=0.035,0.016);冷保存12 h,细胞内Trps1 mRNA和蛋白表达增加(P=0.018,0.031),其后随冷保存时间延长持续减少(P=0.026,0.009).相关分析显示在该过程中,Trps1与上皮标志物表达正相关(r=0.981,0.913;P =0.000,0.002),而与间质标志物表达负相关(r=-0.711,-0.847;P=0.009,0.005).Trps1腺病毒转染HIBEC后,重复上述CPRI诱导实验,E-cadherin表达增加(P =0.002,0.000),Vimentin表达减少(P=0.000,0.017),CPRI诱导HIBECs EMT效应受到抑制;Trps1 siRNA转染HIBECs后,重复上述CPRI诱导实验,E-cadherin表达减少(P=0.032,0.044),Vimentin表达增加(P =0.047,0.031),加强CPRI诱导HIBECs EMT效应.结论 体外模拟CPRI可诱导HIBECs发生EMT,Trps1参与调控HIBECs EMT,发挥重要的拮抗作用并可能逆转该过程.
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人乳腺癌MCF-7他莫昔芬耐受细胞株EMT表型的鉴定及其机制的初步研究
目的 观察乳腺癌细胞MCF-7发生他莫昔芬耐受后细胞形态的变化及上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)现象,并初步研究其机制.方法 免疫荧光染色观察乳腺癌细胞MCF-7及其他莫昔芬耐药株MCF-7R细胞的形态;qRT-PCR、Western blot检测两种细胞EMT相关标志蛋白的表达;Transwell法检测两种细胞的迁移能力;分别抑制PI3 K-Akt及MAPK/Erk信号通路,检测MCF-7R细胞的迁移能力及EMT表型的变化.结果 MCF-7细胞间的联系紧密,发生他莫昔芬耐受后,细胞间隙明显增大;MCF-7细胞发生他莫昔芬耐受后迁移能力明显增强,并发现E-钙粘素(E-cadherin)分布从细胞膜向细胞质转移,波形蛋白(vimentin)及纤维粘连蛋白(fibronectin)表达水平明显升高(P＜0.05);在耐药细胞中PI3 K-Akt及MAPK/Erk信号通路均处于异常活化状态,抑制PI3 K-Akt信号通路能明显抑制细胞的迁移能力,同时能使波形蛋白和纤维粘连蛋白表达水平降低(P＜0.05).结论 乳腺癌MCF-7细胞发生他莫昔芬耐受后其迁移能力增强可能与其发生EMT样表型有关.
