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人miRNA-埃博拉病毒相互作用的生物信息学研究
目的：初步探讨人微小RNA（ miRNA）与埃博拉病毒基因组5′尾标（ trailer）序列相互作用，为防治埃博拉病毒提供可能的靶向miRNA。方法运用Pita和RNAhybrid软件预测与埃博拉病毒5′尾标序列相互作用的人miRNA，并对其进行注释和分析。结果与结论发现人miRNA可能与埃博拉病毒5′尾标序列存在复杂的相互作用。根据以前关于宿主miRNA与病毒基因组相互作用的报道，我们认为，人miRNA与埃博拉病毒基因组5′尾标的相互作用可能会影响埃博拉病毒在人体内的复制以及人体细胞的正常功能。该研究将为埃博拉病毒的防治提供新的思考。
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运用酵母双杂交系统筛选与埃博拉病毒GP、VP30、NP、L蛋白存在相互作用的宿主蛋白
目的 运用酵母双杂交技术从人肝cDNA文库中筛选出与埃博拉病毒(EBOV)GP、VP30、NP、L蛋白存在相互作用的宿主蛋白,用于研究GP、VP30、NP、L蛋白在EBOV传染病中的生物学功能.方法 利用重组PCR技术构建诱饵质粒pGBKT7-GP、pGBKT7-VP30、pGBKT7-NP、pGBKT7-L,将诱饵菌株与人肝cDNA文库菌株进行杂交筛选,对筛选到的阳性克隆进行DNA测序和生物信息学分析,然后再利用酵母回复性实验进一步验证,排除假阳性结果.结果 成功构建了诱饵质粒pGBKT7-GP、pGBKT7-VP30、pGBKT7-NP、pGBKT7-L,筛选出6个可能与GP、VP30、NP、L蛋白有相互作用的宿主蛋白,分别是COMMD1、ALB、PSMD8、APOA2、CYP2E1、HP.酵母回复性实验进一步说明了COMMD1和APOA2与NP蛋白可能存在相互作用.结论 酵母双杂交筛选出多个可能与EBOV的GP、VP30、NP、L蛋白存在相互作用的捕获蛋白,为研究EBOV的致病机制提供了参考.
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应用DNA四面体探针电化学生物传感器检测埃博拉病毒核酸
目的：建立一种基于电化学生物传感器的快速检测埃博拉病毒核酸的方法。方法利用一步热变性法自组装成带有固定探针的DNA四面体后，通过Au-S键固定至金电极表面制备成新型核酸探针。与合成的埃博拉病毒核酸序列特异性结合后引入Bio-ssDNA检测序列，通过生物素和链霉亲和素的特异性结合作用引入avidin-HRP放大信号，利用计时电流法进行检测。结果该传感器可特异性识别和定量检测人工合成的埃博拉病毒的核酸序列，通过实验条件优化，测定核酸的浓度范围在1．0×10－9～5．0×10－6 mol／L呈良好的线性关系，检测下限为5．2×10－10 mol／L。结论所构建的DNA四面体探针修饰的电化学生物传感器实现了对埃博拉病毒核酸的灵敏、特异检测。
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英国军队援塞抗埃行动及与我军对比分析
文章介绍了英国军队在2014年援助塞拉利昂抗击埃博拉疫情（援塞抗埃）行动中，服从于国家战略，突出国际主导地位；全方位立体投送，力量覆盖范围广泛；预设自我保障标准，兼顾国际协作伙伴；实施基地化训练，支援地方和国际机构等做法。对比分析了我军援塞抗埃行动与英军在任务定位、组织指挥、力量抽组、培训及投送、展开作业、自我保障、国际行动经验、援助效果等方面的异同，提出了完善组织指挥架构，建立健全配套制度体系；发展常备卫勤力量，开展基地化训练；深化软硬件建设研究，建立标准作业流程；建设国防医学战略智库，提高决策支持力度等启示和思考。
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EBOV三聚体糖蛋白在新型糖基工程酵母中的表达与纯化
目的 用新型糖基工程酵母表达并纯化得到具有类似哺乳动物细胞糖基化修饰的埃博拉病毒三聚体糖蛋白(EBOV-GP),为其亚单位疫苗研究提供基础.方法 人工合成EBOV-GP基因,将编码全长EBOV-GP基因和编码缺失黏蛋白样域(MLD)与穿膜区的EBOV-GPΔMLDΔTM基因分别克隆到pPICZ-αA载体上,电转化糖基工程酵母,与在HEK-293T细胞中表达的EBOV-GP进行比较,利用PNGaseF和EndoH酶切分析其糖基化修饰,利用亲和层析与离子交换层析纯化目的蛋白,蛋白质N端测序分析其在蛋白翻译修饰过程中是否正确切除了信号肽,同时利用凝胶柱分析是否能形成三聚体结构.结果 PNGaseF酶切结果显示,用糖基工程酵母和HEK-293T细胞表达的EBOV-GP糖蛋白相对分子质量大小与N-糖基化程度均一致,EndoH酶切显示EBOV-GPΔMLDΔTM的N-糖基化修饰是非高甘露糖形式的复杂型糖基化修饰;经三步纯化得到的目的蛋白,N端测序显示为GP蛋白成熟肽序列,其自身信号肽被正确切除;凝胶柱分析显示纯化得到的目的蛋白以三聚体形式存在.结论 用糖基工程酵母表达制备了具有复杂型糖基化修饰的EBOV-GP.
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埃博拉病毒复制、转录和翻译过程中宿主互作因子的研究进展
埃博拉病毒(EBOV)是一种可在人类及非人灵长类间通过接触传播的烈性病原微生物,致死率25％～90％.针对该病毒的早期研究主要聚焦到病毒自身蛋白的作用,但近年来,研究重心逐渐转向病毒增殖过程中宿主相互作用因子的研究.该文综述了EBOV在复制、转录和翻译过程中宿主互作因子的研究进展,旨在增强对EBOV在胞内增殖过程中与宿主细胞相互作用情况的了解,为今后制定研究策略、开发新型抗病毒药物提供理论参考.
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埃博拉病毒生物学特性研究进展
埃博拉病毒病是一种能够引发埃博拉出血热的人畜共患烈性传染病。2014年蔓延西非三国的埃博拉病毒（Ebola virus，EBOV）已经成为全球性公共卫生新的重大威胁。该文综述了EBOV的结构特征、传播特点、作用方式、动物模型等方面的研究进展，旨在对EBOV生物学特性的全面了解及针对该病新型疫苗和抗病毒药物的研制奠定基础。
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全球埃博拉病毒病应对及其对我国烈性传染病防控的启示
始于2014年西非的埃博拉病毒病疫情是全球关注的重大烈性传染病疫情,给人类造成了巨大的生命财产损失.疫情发生过程中,国际组织及各国纷纷采取响应措施,积极预防和控制疫情的传播,主要包括发布指导性文件、援助西非疫情严重的国家、加强本国防范及开展检测、诊断和治疗方法研究等.该文分析了全球应对埃博拉病毒病疫情的经验教训,由此提出我国未来应对烈性传染病疫情的建议.
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基于高通量测序数据的快速病毒物种分析工具
目的 基于高通量测序技术,开发一款轻量级的、使用方便的快速病毒鉴定工具.方法 构建本地化的病毒核酸序列数据库,对大型公共数据库中的病毒核酸序列,按同源性进行去冗余等处理.基于该数据库,实现自动化的数据库比对、de novo拼接和再比对的生物信息学流程,解读数据中病毒的信息.采用Django框架,对数据库、流程和结果进行封装,使用中文操作界面,并采取一键出结果的方式,用图表的形式在浏览器端展示病毒分析结果.结果 该工具可安装运行于普通个人计算机.利用5例腺病毒非培养样本高通量测序数据(1.78 Gbp)和5例埃博拉病毒非培养样本数据(0.93 Gbp)进行测试,分别在2.9和67.9 min完成整个分析流程,并返回正确、易读的病毒物种的分析结果.结论 该工具部署方便、操作简单,可快速实现病毒物种水平的鉴定,适用于生物安全事件的快速响应,为病毒病原体进一步确证和研究提供依据和参考.
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埃博拉出血热药物和疫苗研究开发态势分析
2014年2月暴发于西非地区的埃博拉出血热是历史上严重的一次疫情，药物和疫苗的研究开发受到特别关注。该研究利用Thomson Reuters （汤森路透）的Cortellis数据库和既往研究积累对埃博拉出血热药物和疫苗研究开发整体态势进行分析，为正确把握开发情况提供参考。研究结果显示，疫苗、中和抗体、小分子抗病毒药物、RNA干扰技术药物和核苷酸是抗埃博拉病毒的5个重要类别，每个类别都有前景看好的品种，值得继续跟踪和关注。
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埃博拉病毒NP抗原表位区段的克隆和表达
目的分析埃博拉病毒核蛋白（ NP）抗原表位，克隆表达埃博拉病毒NP抗原，为免疫学诊断试剂的研究奠定基础。方法采用BioSun生物学软件预测分析埃博拉病毒NP抗原的氨基酸表位区间，采用大肠杆菌优势密码子反向翻译成基因序列，采用PCR退火合成法合成NP优势密码子抗原基因，并利用载体pBVIL1进行克隆表达。采用间接ELISA技术评价获得NP抗原的特异性。结果确定埃博拉病毒NP抗原的氨基酸表位位于360～739 aa，共设计36条引物，扩增合成1140 bp的NP抗原基因，克隆表达后，融合蛋白相对分子质量为58×103，测序结果显示插入的NP基因正确。初步结果显示，NP抗原的特异性为99．24％（130／131）。结论获得埃博拉病毒NP抗原，为进一步研制特异的埃博拉病毒快速诊断试剂提供了抗原储备。
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埃博拉病毒研究文献计量与可视化分析
目的：对国内外埃博拉病毒研究文献进行文献计量及可视化知识图谱分析。方法基于Web of Knowl-edge文献数据平台（SCI）综合应用Pajek、Vosviewer、Bibexcel、Ctiespace软件；基于中国知网平台（CNKI），使用Excel软件。结果从文献分析结果来看，美国在埃博拉病毒研究领域处于绝对领先地位，尤其是美国军方（陆军传染病研究所）的研究实力强。相比之下，我国科学家在此领域的发文量则相对较少。结论埃博拉病毒是重要生物战剂，有些研究不一定以文献的形式公开发表，因此，文献计量结果只能从一个侧面反映埃博拉病毒研究态势；另外，应密切关注埃博拉病毒研究的生物安全风险。
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埃博拉病毒与埃博拉出血热
埃博拉病毒病(EVD)又称埃博拉病毒性出血热,是由埃博拉病毒(EBV)引起的人类病毒性传染性疾病,其病死率可高达90％.EVD主要发生在中非和西非靠近热带雨林的边远地区.EBV通过野生动物传到人,再通过接触等途径在人际间传播、蔓延;大蝙蝠科果蝠是EBV的自然宿主.目前,EVD尚无有效的疫苗或治疗药物,病情严重者需要重症支持治疗.
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埃博拉病毒传播途径及个人防护要点分析
2014年埃博拉疫情在西非再次暴发,给全球公共卫生防疫工作提出了新要求.国内外已陆续研发相关疫苗与药物并投入使用,但其实际临床效果仍有待进一步验证.深入了解埃博拉病毒的传播途径,并以此为基础制定科学合理的个人防护措施,是当下防护埃博拉疫情极为有效的途径之一.
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埃博拉疫情期间其他传染病感染状况调查
目的:调查了解埃博拉病毒病(EVD)疫情暴发期间其他地方性传染病在疫区的感染情况.方法:对塞拉利昂EVD疫情暴发期间,发热患者血液标本中EVD、疟疾、伤寒和获得性免疫缺陷综合征(AIDS)等传染病的抗原或抗体进行定性检测.结果:疑似EVD 57例中,EVD核酸检测阳性率为40.4％,疟疾全抗体检测阳性率为29.8％,伤寒抗体检测阳性率为5.3％;埃博拉病毒(EBOV)核酸检测阳性100例中人类免疫缺陷病毒(HIV)全抗体(IgG、IgM和IgA)筛查阳性标本3例,而在EBOV核酸检测阴性的100例中HIV全抗体阳性24例,EBOV核酸检测阴性标本的HIV阳性率显著高于EBOV核酸检测阳性标本(P＜0.05).结论:EVD疫情暴发期间,疫区的其他地方性烈性传染病仍处于高发状态,应高度重视相应防控措施的开展.
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抗埃博拉病毒疫苗和核酸类药物研究进展
埃博拉病毒（EBOV）致病性和传染性强，死亡率高，常在西非热带地区暴发流行。目前相应的抗病毒药物和疫苗正加紧研发。 EBOV疫苗依据抗原递送方式主要可分为3类，包括基于非复制性病毒载体的疫苗、基于复制性病毒载体的疫苗和基于病毒蛋白抗原的疫苗。ChAd3-ZEBOV和VSV-EBOV是具潜力的抗埃博拉疫苗。随着埃博拉病毒感染分子基础研究的深入，抗埃博拉病毒的核酸和核苷类似物药物也成为研究热点。
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抗埃博拉病毒小分子抑制剂的研究进展
埃博拉病毒(EBOV)是导致人和灵长类动物发生埃博拉出血热的烈性RNA病毒,感染者死亡率极高.目前临床上对于EBOV感染以支持治疗为主,尚无经系统临床验证有效的特异性治疗手段.处于研发阶段的抗EBOV药物主要包括小分子抑制剂、蛋白和核酸等三大类,其中小分子抑制剂类药物的种类多,作用机制为多样.本文针对EBOV的感染复制周期中的病毒及宿主靶标,总结了临床前和处于临床试验阶段的抗EBOV小分子抑制剂的研究进展.
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扎伊尔型、苏丹型埃博拉病毒TaqMan探针实时定量PCR核酸检测方法的建立
目的 建立针对扎伊尔型(ZEBOV)及苏丹型埃博拉病毒(SEBOV)特异、灵敏和快速的TaqMan探针实时定量PCR核酸检测方法.方法 选用世界卫生组织(WHO)参比实验室所使用的引物和探针序列,建立针对扎伊尔型及苏丹型埃博拉病毒的NP基因序列保守区的TaqMan探针实时定量PCR核酸检测方法,验证检测方法的灵敏性、特异性和稳定性,并与常规PCR检测方法进行比较.结果 所建立的实时定量PCR方法可用于ZEBOV及SEBOV的特异性检测,较传统PCR方法反应快捷、灵敏,分别可达:ZEBOV 34拷贝/反应、SEBOV 24拷贝/反应;具有良好的特异性、稳定性和可重复性.结论 建立了ZEBOV及SEBOV TaqMan探针实时定量PCR核酸检测方法,该方法可有望用于埃博拉病毒(EBOV)的实验室、临床及现场核酸检测.
关键词： 埃博拉病毒 扎伊尔型 苏丹型 TaqMan探针实时定量PCR 核酸检测 -
扎伊尔型、苏丹型埃博拉病毒TaqMan探针实时定量PCR核酸检测方法的建立
目的 建立针对扎伊尔型(ZEBOV)及苏丹型埃博拉病毒(SEBOV)特异、灵敏和快速的TaqMan探针实时定量PCR核酸检测方法.方法 选用世界卫生组织(WHO)参比实验室所使用的引物和探针序列,建立针对扎伊尔型及苏丹型埃博拉病毒的NP基因序列保守区的TaqMan探针实时定量PCR核酸检测方法,验证检测方法的灵敏性、特异性和稳定性,并与常规PCR检测方法进行比较.结果 所建立的实时定量PCR方法可用于ZEBOV及SEBOV的特异性检测,较传统PCR方法反应快捷、灵敏,分别可达:ZEBOV 34拷贝/反应、SEBOV 24拷贝/反应;具有良好的特异性、稳定性和可重复性.结论 建立了ZEBOV及SEBOV TaqMan探针实时定量PCR核酸检测方法,该方法可有望用于埃博拉病毒(EBOV)的实验室、临床及现场核酸检测.
关键词： 埃博拉病毒 扎伊尔型 苏丹型 TaqMan探针实时定量PCR 核酸检测
