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顺铂对豚鼠子代听觉发育的影响
目的 观察围产期顺铂暴露所致子代豚鼠听力及耳蜗毛细胞损伤.方法 将12只孕中期豚鼠按体重分为2组,从孕50 ～ 56 d,对照组经腹膜内注射生理盐水1.5 mg/(kg·d)、顺铂组经腹膜内注射顺铂1.5 mg/( kg·d).出生后14 d,检测子代豚鼠畸变产物耳声发射(distortion product otoacoustic emission,DPOAE)的改变,应用硝酸银染色全耳蜗铺片、耳蜗组织切片和扫描电镜观察.结果 围产期顺铂暴露致子代豚鼠DPOAE幅值降低和耳蜗毛细胞缺失明显(P＜0.05).结论 围产期顺铂暴露可能损伤子代豚鼠耳蜗毛细胞发育并造成听力下降.
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2-APB对顺铂诱导人卵巢癌SKOV3细胞内质网应激途径凋亡的影响
目的 观察2-APB对顺铂诱导人卵巢癌SKOV3细胞内质网应激途径凋亡的影响.方法 体外培养SKOV3细胞,分别加入3.5、7和14μg/ml顺铂作用12和24 h后,用MTT法检测顺铂对SKOV3细胞的抑制率,应用激光共聚焦显微镜观察细胞质内钙离子浓度变化;将SKOV3细胞随机分为空白对照组、顺铂组、2-APB组和顺铂+2-APB组,分别处理24 h后,用倒置相差显微镜观察顺铂对SKOV3细胞形态的影响,用激光共聚焦显微镜观察细胞质内钙离子浓度变化;分别处理12 h后,采用Western blot检测Caspase-3、CHOP和GRP78蛋白表达.结果 MTT结果显示,3.5、7和14 μg/ml顺铂作用SKOV3细胞12和24h,SKOV3细胞存活率明显降低,作用12和24 h的IC50分别为(14.7 ±0.1)μg/ml和(6.6±0.1)μg/ml.激光共聚焦显微镜检测发现,随顺铂浓度及作用时间的增加,SKOV3细胞质游离钙离子浓度逐渐增加.顺铂与2-APB联合作用后,经倒置相差显微镜观察,与顺铂组比较,顺铂+2-APB组细胞密度明显增多.MTT结果显示,与顺铂组比较,顺铂+ 2-APB组细胞存活率由56.8％±0.9％上升至74.4％±1.0％,激光共聚焦显微镜检测发现,游离钙荧光点数由(58.4+0.2) ×103个降低至(23.8±0.3) ×103个,差异有统计学意义(P＜0.01).Western blot结果表明,与顺铂组比较,顺铂+ 2-APB组的Caspase-3、CHOP和GRP78蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 细胞内钙离子参与调控顺铂诱导的SKOV3细胞凋亡.
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中药复方对顺铂肾形态学损害的保护作用
顺铂(cis-diaminodichloroplatin,CDDP,简称DDP),是一种广泛应用的抗癌药物.临床研究表明,DDP抗癌作用强,与其他抗肿瘤药无交叉抗药性,对多种恶性肿瘤的治疗有显著的疗效,但DDP有广泛的毒性,特别是严重的肾毒性,限制了它在临床上的应用.中医药防治其化疗毒副反应有独特的优势,我们拟益气补肾中药,从形态学观察该复方对DDP的肾毒性的保护作用.
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非蛋白巯基对顺铂在HEK293细胞内累积量的影响
谷胱甘肽(GSH)和N-乙酰-半胱氨酸(NAC)等非蛋白巯基(NPSH)化合物因含巯基(-SH)而具有亲核和还原特性,有参与解毒或保护上皮细胞免受氧化剂和其他活性亲电物的损伤.肝脏是血浆GSH的主要来源,肾小管上皮细胞主要从血浆摄取现成的GSH,也可通过摄取半胱氨酸或NAC自行合成GSH.肾毒物被摄取进入细胞内或在细胞外(即血浆)均可与NPSH相遇,或被解毒,或形成加合物而影响肾毒物的吸收[1].肾小管上皮细胞是抗癌药顺铂(CP)毒性作用的主要靶细胞,GSH和NAC对CP肾毒性均具有防护作用[2,3].本研究模拟体内模式探讨细胞内外GSH和NAC对CP在肾小管上皮细胞内的累积量的影响及与其防护CP肾毒性的关系.
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叶黄素预处理对顺铂所致大鼠急性肾毒性的防治作用
目的 探讨叶黄素(LU)预处理对顺铂(CP)所致大鼠急性肾损伤的保护作用及其机制.方法 将40只SD大鼠随机分为5组,分别为对照组、CP组、各剂量LU(10、20和40 mg/kg)+ CP组.大鼠连续灌胃LU 10 d,第7天灌胃后1h腹腔注射CP(5 mg/kg).CP处理后,在第5天采血,测定血清尿素氮(BUN)和肌酐(Cr).采血后处死动物,测定肾脏系数、肾皮质匀浆丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、一氧化氮(NO)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力,同时观察肾组织结构及超微结构变化.结果 肾病模型组大鼠血清BUN、Cr含量均明显高于对照组,肾皮质组织匀浆中MDA及NO含量显著增加,而GSH含量及SOD活力显著下降.叶黄素可降低肾损伤大鼠血清BUN及Cr水平,降低肾组织匀浆MDA及NO水平,提高组织GSH含量及SOD活力,并可改善顺铂损伤大鼠肾病理组织及超微结构.随着叶黄素剂量增加,其保护作用增强.结论 叶黄素可通过抗氧化作用减轻顺铂诱导的大鼠急性肾损伤.
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大黄素对顺铂所致人胚肺成纤维细胞毒性的作用
目的从细胞水平研究大黄素对顺铂引起人胚肺成纤维细胞毒性的效应.方法采用MTT法检测细胞毒性,荧光法检测细胞氧化性损伤.结果WI-38细胞经大黄素和顺铂同时处理22 h后,大黄素(30 mg/L)可明显减轻顺铂引起的细胞毒性,其IC50值由(16±3)mg/L增加至(34±6)mg/L;可使顺铂引起的细胞内氧自由基水平和细胞内脂质过氧化物水平的升高更加明显,使顺铂引起的还原性谷胱甘肽含量的下降更加明显.结论大黄素可对抗顺铂所致WI-38细胞毒性,但它不能减少顺铂对细胞的氧化性损伤作用,大黄素的预防作用与抗氧化机制无关.
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新型铂类化合物LLC-0601与顺铂、舒铂体外对L-02、HK-2细胞的毒性比较研究
目的 比较新型铂类化合物LLC-0601与舒铂、顺铂体外对人胚胎肝细胞(L-02)和人肾小管上皮细胞(HK-2)的毒性.方法 采用不同浓度的LLC-0601、顺铂、舒铂分别与L-02细胞和HK-2细胞作用48 h后,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测并计算细胞增殖抑制率,计算IC50；取细胞培养液全自动生化分析仪检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出量；显微镜下观察细胞形态改变.结果 LLC-0601、顺铂、舒铂作用两株细胞48 h后,同等剂量下LLC-0601对L-02细胞和HK-2细胞的抑制率都是低,舒铂次之,顺铂强,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05)；检测两株细胞培养液中LDH含量,LLC-0601在较高剂量下才出现LDH升高,而顺铂和舒铂在较低剂量下LDH既有明显变化,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05),其中顺铂又强于舒铂(P＜0.05).3个铂类化合物细胞形态改变均表现随给药浓度增加,出现细胞核空泡样改变,细胞膜不完整,继续增加给药浓度后细胞死亡.结论 LLC-0601体外对L-02和HK-2细胞的毒性明显低于顺铂、舒铂,是一个有开发前景的新化合物.
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一氧化氮在顺铂致大鼠肾损害过程中的作用
[目的] 探讨一氧化氮在顺铂肾毒性氧化应激机制中的作用.[方法] 采用少量多次给大鼠腹腔注射顺铂(CP)及经口给予水飞蓟素(SB)预处理后给予CP模型,观察血尿素氮(BUN)含量、一氧化氮(NO)含量、一氧化氮合酶(NOS)活性、丙二醛(MDA)形成、超氧化物歧化酶(SOD)活性等指标的变化.[结果] CP可诱导NOS活性增高,使NO生成量增多;BUN含量与MDA含量及SOD活性的变化并不完全一致,而与NO含量的时相变化趋势基本一致;SB可使BUN含量、MDA含量及NO含量降至对照组水平,同时可使SOD活性明显升高.[结论] NO可能在CP所致肾损害中起更重要的作用,SB可预防CP所致的肾损害,其机制可能与SB降低NO生成量、升高SOD活性有关.
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顺铂诱导Hela细胞内质网应激途径凋亡的研究
目的 观察顺铂对Hela细胞内质网应激和凋亡的影响及其机制.方法 体外培养宫颈癌Hela细胞,通过MTT法测得顺铂适应激剂量为4.5μmol/L,实验分为对照组、顺铂4h组、顺铂8h组、顺铂12 h组,以观察顺铂作用Hela细胞后,其内质网应激及相关凋亡的动态变化.Western Blot法检测各组细胞内质网应激、凋亡相关蛋白表达.流式细胞术检测凋亡.结果 与对照组相比,内质网应激相关蛋白GRP78,内质网应激信号凋亡调节蛋白IRE1α、p-JNK表达水平明显升高,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ表达增加;内质网应激诱导的凋亡蛋白Caspase-4和凋亡执行分子Caspase-3的裂解形式蛋白表达水平明显升高.流式细胞术检测结果 显示,顺铂作用后与对照组相比,细胞凋亡率明显增加.结论 顺铂可能诱导Hela细胞发生内质网应激,从而促进细胞凋亡的发生.
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姜黄素对顺铂所致大鼠肾毒性的防护作用
目的研究姜黄素(CMN)对顺铂(CDDP)所致肾损害的防护作用,并探讨其可能机制.方法将42只大鼠按体重随机分6组,分别为对照组、CMN组、CDDP组、CMN(20、40和80 mg/kg)+CDDP组.CMN连续给予大鼠灌胃3 d,第2天灌胃后1 h腹腔注射CDDP(5.5 mg/kg).CDDP处理后,分别在第1、3和5天采血,测定血清尿素氮(BUN)和肌酐(CRE).第5天采血后处死动物,测定肾脏系数、肾皮质匀浆丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力以及肾组织铂(Pt)含量等.同时利用体外实验观察对抗增殖作用的影响.结果 CMN预处理可减轻CDDP引起的肾脏系数升高及BUN、CRE水平升高;能抑制CDDP引起的MDA形成增高;并能提升CDDP引起的GSH含量和GSH-Px活力下降.CMN低剂量的上述作用明显(P＜0.05或P＜0.01).CMN防护组与CDDP组的人卵巢癌细胞系和膀胱癌细胞系的半数抑制浓度差异无显著性.结论 CMN经口给予能防护CDDP所致的肾损害,其机制可能与其抗氧化作用和清除自由基活性有密切关系.较高剂量CMN未见防护CDDP所致肾毒性的作用,其原因可能与其助氧化作用有关.CMN对CDDP抗肿瘤细胞增殖作用无明显影响.
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大蒜油与顺铂对人卵巢癌SKOV3细胞生长抑制的联合作用
目的 研究大蒜油(garlic oil,GO)、顺铂(cisplatin,CDDP)对人卵巢癌SKOV3细胞的生长抑制作用及二者合用时的联合作用.方法 体外培养人卵巢癌SKOV,细胞,分别用GO、CDDP、GO+CDDP处理24 h,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测GO、CDDP、GO+CDDP对SKOV3细胞的生长抑制作用,用Chou-Talalay联合指数法评价两药合用对SKOV3细胞生长抑制的联合作用.结果 单独应用GO作用于SKOV,细胞24 h后,MTT检测发现随着GO浓度的增加,抑制率明显增高.GO和CDDP合用时,二者各自对SKOV3细胞的生长抑制作用增强,GO单用时中效浓度(Dm)为670.5 mg/L,与CDDP按浓度比1:1合用时Dm为138.2 mg/L,单用时的Dm是合用时的4.852倍;CDDP单用时Dm为7.088 mg/L,与GO按浓度比1:1合用时Dm为1.037mg/L,单用时的Dm是合用时的6.835倍.GO和CDDP合用时,在不同抑制率下联合指数CI均小于1,所以两药合用时对SKOV3细胞的生长起协同抑制作用.结论 在本试验条件下,GO能抑制人卵巢癌SKOV3细胞的生长,同时与CDDP合用时表现为协同作用.
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葡甲胺对顺铂所致大鼠肾毒性的预防作用
目的研究葡甲胺(N-MG)对顺铂(CDDP)所致大鼠肾毒性的预防作用及其可能机制.方法大鼠1次腹腔注射5 mg/kg CDDP动物模型,于CDDP处理前1 h经口给予N-MG预处理.检测指标包括血尿素氮BUN、尿蛋白、尿铂(Pt),肾组织匀浆中NOS、NO、MDA、SOD及肾组织Pt含量,同时观察抗肿瘤活性.结果给药后第3、5天N-MG预处理组可明显预防CDDP所致大鼠肾功能损害,降低肾组织中NOS、NO、及MDA含量,增加SOD活性(P＜0.05或P＜0.01).另外,给药后第3天尿Pt(0.425 μg/mg Cr)排泄量非常显著地高于CDDP组(0.245 μg/mg Cr,P＜0.01),肾组织Pt含量于给药后第3、5天显著低于CDDP组(P＜0.05).N-MG预处理对荷瘤小鼠的肿瘤抑制率与CDDP组无显著性差异.结论 N-MG预处理能明显预防CDDP所致大鼠的肾损害,其预防作用机制可能是N-MG促进Pt经尿排出,并减少了肾组织Pt蓄积,从而CDDP产生的自由基减少,脂质过氧化程度减轻.N-MG对CDDP抗肿瘤活性无明显影响.
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胞浆内Ca2+浓度的变化在顺铂诱导的肝癌HepG2细胞凋亡中的作用
目的 探讨胞浆内的Ca2+在顺铂诱导的肝癌HepG2细胞凋亡过程中的作用及其可能机制.方法 体外培养人肝癌HepG2细胞,分组并按实验目的加药,检测胞浆内Ca2+浓度的变化和Grp78蛋白的表达;MTT法检测细胞的活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 顺铂诱导了肝癌HepG2细胞内胞浆Ca2表达增加,促进细胞凋亡,同时也上调了Grp78蛋白的表达.与顺铂组相比,顺铂联合BAPTA/AM或2-APB降低了顺铂诱导的胞浆Ca2+浓度,减弱了顺铂对细胞的增殖抑制作用和Grp78蛋白的表达.结论 顺铂诱导HepG2细胞发生内质网应激,导致Ca2+从内质网释放,使胞浆内Ca2+上调,并进一步诱导内质网应激介导的凋亡.
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谷胱甘肽对顺铂致猴和大鼠肾细胞毒性的影响
目的探讨顺铂对猴和大鼠肾小管上皮细胞的毒性及半胱氨酸和GSH合成抑制剂BSO对其影响.方法从猴和大鼠的肾脏分离培养的肾小管上皮细胞接种于96孔培养板,培养24h后加入一系列浓度的顺铂,或在加入顺铂前16和4 h,分别加入GSH合成抑制剂BSO和GSH的前体物半胱氨酸,继续培养,分别在8、24和48 h 3个时间点用MTr方法检测细胞存活率.结果顺铂对猴和大鼠肾小管上皮细胞有明显的毒性,在不同的时间点有各自的剂量-反应关系,顺铂对大鼠肾小管上皮细胞在8、24和48 h 3个时间点半数抑制浓度(IC50)分别为1 105.12、513.25和71.24μmol/L;BSO能使3组IC5o均降低,分别为66.00、21.43和7.23 μmol/L,而半胱氨酸则使3组IC5o均升高,均大于5 000 μmol/L;顺铂对猴肾小管上皮细胞在3个时间点IC5o分别为3 026.00、1238.35和664.44μmol/L;BSO使3组IC50分别降为480.10、108.61和31.43 μmol/L,而半胱氨酸则可使3组IC50均大于5 000μmol/L.结论顺铂对猴和大鼠肾小管上皮细胞均具有明显毒性作用,对猴的毒性低于大鼠;BSO可增强顺铂的细胞毒性,对大鼠的影响大于猴,而半胱氨酸对两种细胞的保护作用无显著性差异,提示细胞内GSH对顺铂所致肾小管上皮细胞毒性有保护作用.
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谷胱甘肽对顺铂致大鼠肾小管上皮细胞毒性的影响
目的探讨顺铂对不同年龄大鼠肾小管上皮细胞的毒性及谷胱甘肽(GSH)对其影响.方法从不同年龄的雄性大鼠分离的肾小管上皮细胞接种于96孔培养板,培养24h后加入一系列浓度的顺铂,或在加入顺铂前16和4 h,分别加入GSH合成抑制剂BSO和GSH的前体物半胱氨酸,再培养24 h后用MTT方法检测细胞存活率.结果顺铂对5、2月龄和3周龄大鼠肾小管上皮细胞半数抑制浓度(IC50)分别为243.42、178.16和159.06 μmol/L;BSO能使3组IC50分别降低到1.62、1.30和1.47 μmol/L,而半胱氨酸则可使3组IC50均大于5 000 μmol/L.结论顺铂对不同年龄大鼠肾小管上皮细胞均具有明显的毒性,BSO和半胱氨酸可分别增强和减弱顺铂的毒性,间接证明细胞内GSH对顺铂所致大鼠肾小管上皮细胞毒性有保护作用.
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蒸制轮叶党参对顺铂致小鼠肾损伤的保护作用及机制
目的 探讨蒸制轮叶党参(steamed codonopsis lanceolata,SCL)对顺铂(Cisplatin)致小鼠肾损伤的保护作用及机制.方法 雄性ICR小鼠一次性腹腔注射20 mg/kg顺铂诱发急性肾损伤模型,观察SCL给药后的改善作用.相关试剂盒测定小鼠血清中肌酐(CRE)、尿素氮(BUN)、炎症因子(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)和肾组织中丙二醛(MDA)的含量.苏木素-伊红(HE)和Hoechst 33258染色观察肾组织病理学改变.免疫组化法检测肾组织中相关凋亡蛋白的表达.结果 与模型组比较,SCL均能不同程度的降低血清中CRE、BUN、TNF-α、IL-1β及组织中MDA的水平(P＜0.05),改善顺铂所致的炎症反应,同时SCL能够下调肾组织中Bax,上调Bcl-2的蛋白表达水平.结论 SCL对顺铂致肾损伤具有保护作用,其主要部分通过减少炎症反应,抑制脂质过氧化及抗细胞凋亡而实现的.
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顺铂染毒大鼠睾丸定量组织学分析及睾丸酶活力的变化
目的 探讨顺铂(CP)染毒大鼠睾丸组织病理学和睾丸酶活力的变化.方法 选择健康成年雄性Wistar大鼠,随机分为CP 1.0、2.5和5.0 mg/kg组及对照组,连续腹腔注射染毒3d.染毒结束后,制备PAS(Periodic Acid-Schiff)染色病理切片,观察睾丸组织病理变化并行定量组织学分析.分光光度法测定琥珀酸脱氢酶(SDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和Na+-K+-ATPase活力.实时荧光定量PCR检测iNOS和Na+-K+-ATPasemRNA表达水平.结果 CP染毒后大鼠睾丸组织病理学改变主要见于睾丸生精上皮精子发生周期第Ⅱ-Ⅲ期.定量组织学分析发现,在生精上皮第Ⅱ-Ⅲ期CP 2.5和5.0 mg/kg组大鼠睾丸生精小管相对面积和直径变小,管腔相对面积增加(P＜0.05).CP各剂量组生精上皮占生精小管面积百分比和生精小管管腔直径均变小(P＜0.05),CP5.0 mg/kg组睾丸间质血管面积增加(P＜0.01).与对照组比较,CP 5.0 mg/kg组精子数减少,精子活力降低(P＜0.05).CP各染毒组SDH活力均低于对照组,而MDH和iNOS活力仅5.0 mg/kg组低于对照组(P＜0.05).CP 5.0 mg/kg组ACP、AKP和Na+-K+-ATPase活力均明显高于对照组(P＜0.05).RT-PCR结果显示,Na+-K+-ATPase和iNOS mRNA表达水平与酶活力改变一致.结论 顺铂可能参与改变睾丸细胞能量代谢相关酶活力而致睾丸细胞损伤.
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表皮生长因子对肿瘤敏感性和肾毒性的影响
为探讨外源性表皮生长因子在肿瘤治疗中的可能应用,小鼠接种肉瘤(S180),于接种后第2,6天腹腔注射顺铂(CDDP)2mg/kg,在CDDP处理的同时0小时,前12,前24小时皮下注射EGF 5μg/只及前24小时腹腔注射EGF 5μg/只;大鼠一次腹腔注射CDDP 5mg/kg,于CDDP处理前24小时皮下注射EGF 20μg/只.结果显示EGF腹腔及皮下处理均能促进S180生长;EGF只有于CDDP前皮下处理才能增高S180对CDDP敏感性;EGF增高敏感性的同时,小鼠去瘤体重及大鼠血清BUN、Cr水平均与对照组无差别.
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姜黄素对顺铂所致大鼠肾毒性的防护作用及其可能机制
目的顺铂(Cis-diamminedichloroplatinum,CDDP)是当前临床上应用较广泛的一种肿瘤化疗药物.目前,在国内外多种实体瘤治疗中被推荐为首选药物.CDDP却有诸多令人遗憾的毒副作用,特别是肾毒性.
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葡甲胺对顺铂所致肾损害的预防作用
葡甲胺(NMG)是医药工业中常见的助溶剂.国内外尚无NMG作为解毒剂的文献报道.顺式二氯二氨铂(顺铂,CP),是临床应用广泛的一种化疗药物,其疗效显著.但CP的毒副作用较多.其中肾损害是限制其使用剂量从而影响疗效的主要毒副作用.在预试验中偶然发现,NMG明显抑制CP染毒大鼠血尿素氮(BUN)升高.我们通过大鼠在体试验观察NMG对CP所致肾损害的影响,初步探讨其可能预防机制.
