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黑龙江省乙型肝炎病毒拉米夫定耐药株YMDD变异与基因型、BCP区变异的相关性研究
目的 探讨黑龙江省乙型肝炎病毒(HBV)拉米夫定耐药株YMDD变异与基因型、HBV BCP变异之间的相关性.方法 对收集的245例经拉米夫定治疗的慢性乙型肝炎患者血清标本,采用多重PCR法检测HBV的基因型；荧光标记杂交双探针PCR融解曲线法(FH-PCR-MC)检测HBV YMDD变异及变异类型；巢式PCR法扩增HBV C基因区,测序分析BCP位点变异并进行统计学分析.结果 在HBV YMDD野生株、变异株中,基因型B、C、B与C混合型分别为8.8％、89.2％、2.0％；6.3％、93％、0.7％,基因型构成比无统计学的差异.HBV BCP的变异率在YMDD野生株与变异株分别为69.6％、76.9％,无统计学的差异.在HBV YMDD野生株中,HBV B基因型BCP的变异率22.2％,C基因型BCP的变异率73.6％存在统计学差异(P＜0.01),但在YMDD变异株中,无统计学的差异.在YIDD、YVDD变异株HBV BCP变异率分别为83.0％和64.6％,存在统计学的差异(P＜0.05).结论 在HBV YMDD野生株中,与B基因型相比,C基因型更易发生BCP变异；YMDD变异株中,BCP变异率在B、C基因型间无统计学差异,BCP变异在变异类型间(YIDD、YVDD)存在统计学差异；与YVDD变异株相比较,YIDD变异株易发生HBV BCP的变异.
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HBV C基因基本核心启动子变异对乙型肝炎患者血清病毒复制和细胞因子水平的影响
目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)DNA C基因基本核心启动子(BCP)变异对机体免疫状态及乙型肝炎病毒复制的影响.方法 采用PCR微板核酸杂交结合ELISA技术检测HBV DNA BCP变异;采用双抗体夹心ELISA法检测患者血清IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-10水平;采用荧光定量PCR法测定HBV DNA水平.结果 HBV DNA BCP变异病人和非变异病人血清IL-2水平分别为61.4±24.7ng/L和65.1±25.3ng/L,IFN-γ为82.0±50.1ng/L和71.8±67.0ng/L,IL-4为62.3±46.0ng/L和59.4±51.0ng/L,IL-10为74.0±88.2ng/L和81.4±67.0ng/L(P均＞0.1); HBV DNA BCP变异病人的HBV DNA水平为1×105.82±2.04copies/ml,明显高于非变异病人的1×104.71±1.28 copies/ml(P＜0.01).结论 HBV DNA BCP变异对机体血清细胞因子水平无明显影响,但对HBV DNA的复制具有一定的促进作用.
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乙型重型肝炎患者血清HBV前C/BCP变异检测及临床意义
目的探索乙型重型肝炎患者HBV前C/BCP区变异与临床病情关系.方法用荧光定量PCR法检测血清HBVDNA载量;PCR扩增前C/BCP区基因后进行序列测定.结果30例乙型重型肝炎患者中BCP变异有18例,HB-VDNA平均水平为2.71×107 copies/mL,未发生BCP变异者有12例,HBVDNA平均水平为5.35×106 copies/mL,两者间有显著差异.测序结果显示HBV前C区nt1896G→A终止变异和BCP变异(nt1762A→T和1764G→A)在乙型重型肝炎患者中发生率分别为43.3%(13/30)和60%(18/30),在慢性乙型肝炎患者则分别为40%(12/30)和30%(9/30),两组BCP变异(nt1762A→T和1764G→A)相比有显著差异(P=0.02).结论BCP变异可影响病毒复制,BCP变异可能与肝病的严重程度存在着相关性.
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慢性肝病与HBVBCP变异、IL-10、IL-12、TNF-α及IFN-γ关系研究
目的:探讨不同临床类型慢性肝病与HBV BCP变异及IL-10、IL-12、TNF-α和IFN-γ关系.方法:以176例HBV感染慢性感染者(慢性乙型病毒性肝炎轻、中、重度,肝炎肝硬化,慢性重型肝炎和原发性肝癌)作为研究对象.采用PCR微板核酸杂交结合ELISA检测显示技术,对患者血清进行检测HBV BCP区核苷酸(nt)1762碱基A→T和1764G→A联合突变;采用双抗体夹心ELISA检测技术,检测IL-10、IL-12、TNF-α和IFN-γ水平.结果:BCP变异与不同临床类型肝病呈正相关(r=0.259,P=0.001).IL-12、TNF-α和IFN-γ的水平除了慢性肝炎中度组外,其余各组与慢性肝炎轻度组间的比较有显著差异(P＜0.05).而IL-10水平比较在慢性肝炎轻度组与其他组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论:BCP变异与慢性感染的不同临床类型呈正相关,随着病情的加重BCP变异的阳性率有随之增高趋势.IL-12、TNF-α和IFN-γ在HBV感染不同临床类型肝病中可能起到主要作用.
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乙型肝炎病毒感染者C基因启动因子变异分析
目的了解乙型肝炎病毒C基因启动因子(BCP)在不同乙型肝炎患者中的变异情况及其与HBeAg的关系.方法采用芯片微流阵列技术,对100例乙型肝炎病毒感染者BCP区核酸1762碱基A→T进行检测.结果 HBeAg阳性的乙型肝炎患者血清中BCP区T1762变异率10.9%(6/55),HBeAg阴性的乙型肝炎患者血清中BCP区T1762变异率68.9%(31/45).其中,急性乙型肝炎患者T1762位点均无突变(0/12),慢性乙型肝炎患者T1762位点突变率34.4%(20/58),乙肝肝硬化患者T1762位点突变率66.7%(16/24),乙肝肝癌患者T1762位点突变率100%(6/6).结论乙型肝炎病毒BCP区T1762变异随乙型肝炎病毒感染者病情加重而升高,且HBeAg阴性感染者高于HBeAg阳性感染者.
