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RNA干扰抑制c-Met表达对喉癌Hep-2细胞体内外生长的影响
目的 采用RNA干扰(RNAi)技术抑制人喉癌Hep-2细胞c-Met基因表达,观察对其体外生物学活性和体内生长的影响.方法 构建能够表达针对c-Met的小干扰RNA的RNAi质粒和表达不针对任何已知mRNA的siRNA的阴性对照RNAi质粒,采用阳离子脂质体Lipofectamine2000作为转染试剂将其转染人喉癌细胞株Hep-2,通过RT-PCR及Western Blot方法检测转染效率,筛选出抑制效果好的c-Met-siRNA序列;通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、运动实验及侵袭实验比较转染前后细胞的生长、运动及侵袭能力.在裸鼠喉癌皮下荷瘤模型模拟c-Met-siRNA基因治疗实验中,采用Western Blot法检测重组质粒对c-Met基因及MMP-9、VEGF基因表达的影响.结果 pSilencer2.0/c-Met-shRNA转染人喉癌细胞株Hep-2后,c-Met的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P值分别为0.003和0.02),细胞的生长、运动及侵袭均受到明显抑制(P值分别为0.001,0.004和0.004).肿瘤接种到裸鼠后第35天,重组质粒组肿瘤体积为(138±27)mm~3,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);重组质粒组瘤体内c-Met、MMP-9、VEGF基因表达率比对照组明显降低(P<0.05).结论 c-Met-siRNA能成功下调靶基因的表达,并能显著抑制喉癌Hep-2细胞的生长、运动、侵袭及移植裸鼠成瘤后的生长,siRNA表达质粒介导的基因治疗有希望成为喉癌靶向性c-Met治疗的新策略.
关键词： RNA干扰 喉肿瘤 细胞系 肿瘤 原癌基因蛋白质c-met -
血小板活化因子致角膜上皮伤口迟愈合的实验研究
目的利用兔去上皮角膜模型,研究血小板活化因子(PAF)对角膜伤口愈合的作用及其分子生物学机制.方法离体角膜上做正中直径7 mm 圆形去上皮角膜伤口.去上皮角膜分为3组,即对照、PAF及BN (PAF拮抗剂) 组,培养48 h后,行角膜上皮染色观察伤口愈合状况.分别对兔角膜上皮 (RCE) 和角膜基质 (RCK) 细胞进行体外传代培养,RCE和RCK细胞经PAF 和(或) BN处理,培养24 h,提纯RNA.应用RT-PCR及核酸杂交技术分别检测肝细胞生长因子 (HGF)、角质形成生长因子(KGF)及表皮生长因子(EGF)基因在RCK和RCE细胞及HGF受体 (HGF-R) 基因在RCE细胞中的表达强度.分别应用CyQUANT荧光结合和Boyden 小房技术检测PAF对RCE细胞黏附、增殖和迁徙的影响. 结果 PAF (100 nmol/L) 明显抑制角膜上皮伤口愈合,48 h对照、PAF和BN组角膜上皮未愈合面积经电脑图像分析分别为:(6.0±1.5) U、(58.0±7.0) U和(5.0±1.0) U.PAF明显增强RCE细胞黏附作用,对照、PAF和BN组每96孔板贴附细胞数荧光光度平均值分别为:3696±372、7908±671 和3487±324.RT-PCR结果显示:PAF使 HGF mRNA在RCK的表达强度降低4.1倍,同时明显减弱HGF-R在RCE细胞中的表达,核酸杂交实验证实PCR结果.结论 PAF明显增强RCE细胞的黏附作用,明显抑制HGF mRNA在角膜基质细胞和HGF-R基因在角膜上皮细胞中的表达强度,进而抑制去上皮角膜伤口愈合.PAF受体拮抗剂BN明显抑制PAF的上述作用,阻止PAF致角膜伤口的迟愈合.(中华眼科杂志,2004,40:151-155)
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胃癌组织c-met蛋白表达的意义及其与微血管密度的关系
目的探讨c-met蛋白在胃癌组织中的表达与胃癌临床病理特征及其肿瘤微血管密度的关系.方法对47例手术切除的胃癌组织采用免疫组织化学法检测c-met蛋白的表达及其肿瘤微血管密度.结果胃癌组织中c-met蛋白表达阳性率为85.1%,c-met阳性率与胃癌肿瘤的直径、有无淋巴结转移、浸润深度、TNM分期、是否有淋巴管及静脉癌栓有关;c-met阳性组胃癌微血管密度高于对照组.结论 c-met蛋白的表达促进了胃癌的生长、浸润及转移,并促进胃癌的血管生成,与胃癌预后不良及临床病理特征有重要关系.
关键词： 原癌基因蛋白质c-met 微血管密度 胃肿瘤 -
酪氨酸激酶类受体C-Met抑制剂研究进展
酪氨酸激酶类受体C-Met及其配体肝细胞生长因子(HGF)与肿瘤的发生、发展及预后密切相关,是肿瘤治疗的重要靶标.寻找高效C-Met抑制剂是目前抗肿瘤药物研究的热点之一.本文综述了这一领域的新研究进展.
关键词： 受体蛋白质酪氨酸激酶类 原癌基因蛋白质c-met 肝细胞因子 抗肿瘤药 -
c-Met和c-Src在非小细胞肺癌中表达及其与预后的关系
目的 探讨c-Met和c-Src在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其与临床病理特征和预后的关系.方法 2011年4月至2013年1月采用免疫组织化学方法检测88例NSCLC患者组织蜡块标本中c-Met和c-Src的表达水平,分析其与临床病理特征的关系及对预后的影响.结果 c-Met与c-Src在NSCLC患者肿瘤组织中表达,而在间质及正常肺组织中未见表达.NSCLC中c-Met和c-Src的表达与性别、分化程度、病理类型、T分期及TNM分期相关(P<0.05或<0.01),且c-Met表达与淋巴结转移相关(P<0.01).c-Met和c-Src表达与年龄无关,c-Src表达与淋巴结转移无关(P>0.05).Pearson相关性分析结果显示,肺癌组织中c-Met和c-Src表达呈正相关(r=0.662,P<0.01).Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,c-Met高表达患者(51例)无病生存期(DFS)和总生存期(OS)均明显短于c-Met低表达患者(37例)[(18.08±1.34)个月比(23.76±1.79)个月和(33.63±1.95)个月比(42.24±2.68)个月],c-Src高表达患者(25例)DFS和OS均明显短于c-Src低表达患者(63例)[(16.96±2.56)个月比(21.86±1.15)个月和(27.84±2.89)个月比(40.98±1.81)个月],c-Met和c-Src均高表达患者(25例)DFS和OS明显短于c-Met和c-Src均低表达患者(37例)[(16.96±2.56)个月比(23.76±1.79)个月和(27.84±2.89)个月比(42.24±2.68)个月],差异均有统计学意义(P<0.05).Cox多因素分析结果显示,T分期(RR=2.174,95％CI 1.354～3.490,P=0.001)及c-Met和c-Src均高表达(RR=1.447,95％CI 1.114～1.880,P=0.006)是影响NSCLC患者DFS的独立危险因素;病理类型(RR=0.610,95％CI 0.377～0.986,P=0.044)、T分期(RR=2.215,95％CI 1.357～3.616,P=0.001)及c-Met和c-Src均高表达(RR=1.979,95％CI 1.455～2.692,P=0.000)是影响NSCLC患者OS的独立危险因素.结论 c-Met和c-Src参与NSCLC的发生和发展,影响NSCLC患者的预后.
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MACC1:一个新的与肿瘤相关的基因
结肠癌转移相关基因1(metastasis-associated in colon cancer-1,MACC1)是通过全基因表达分析在结肠癌的原发灶和转移灶中发现的一个与结肠癌密切相关的基因.近两年,人们在MACC1基因对肿瘤发生发展的影响及其对癌症预后方面的影响进行了研究,发现MACC1基因极有可能成为治疗肿瘤转移的一个新靶点.现从MACC1基因的发现、结构、表达以及功能方面进行综述.
关键词： 结肠癌转移相关基因-1 原癌基因蛋白质c-met 妇科肿瘤 卵巢肿瘤 -
c-met在新疆哈萨克族与汉族食管鳞癌组织及血清中的表达及意义
目的：探讨新疆哈萨克族（哈族）与汉族食管鳞癌患者组织及血清中c-met蛋白的表达及其与临床病理特征的关系。方法收集哈族和汉族食管鳞癌组织及其对应的癌旁食管组织各50例，采用免疫组织化学法检测组织中c-met蛋白的表达；取以上食管鳞癌患者血清标本，另择哈族和汉族健康体检者血清各40例，采用酶联免疫吸附（ELISA）法测定血清中c-met蛋白的含量。结果 c-met蛋白在哈族和汉族食管鳞癌组织中的阳性表达率分别高于其对应的癌旁组织，且c-met蛋白在哈族和汉族食管鳞癌患者血清中的含量均分别高于其对应的健康体检者。食管鳞癌组织和血清中，c-met蛋白表达在不同肿瘤浸润深度、淋巴结转移、TNM分期间差异有统计学意义，其中浸润至深肌层及突破浆膜（T3+T4）高于浸润黏膜及黏膜下层组（T1+T2），有淋巴结转移高于无淋巴结转移，TNM分期ⅡB+Ⅲ期高于Ⅰ+ⅡA期；c-met蛋白表达在不同民族、性别、年龄、组织分化程度间的差异均无统计学意义。结论 c-met蛋白与哈族和汉族食管鳞癌的发生发展、浸润、转移及分期均有关，其在食管鳞癌组织和血清中的高表达，可能预示食管癌易浸润转移，并提示临床分期较晚。
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以c-Met为靶点的抗肿瘤系列化合物体内外药效筛选
目的：从8个LY系列肝细胞生长因子受体（c-Met）酪氨酸激酶抑制剂中筛选具有抗肿瘤活性的化合物，并进一步评价其体内外抗肿瘤作用。方法首先采用均相时间分辨荧光技术（HTRF）对LY系列化合物进行初步筛选，观察它们对c-Met酪氨酸激酶的抑制作用；采用CCK-8法观察筛选出的活性化合物在体外对人胃癌MKN-45、人神经胶质瘤U87MG、人肾癌Caki-1、人前列腺癌PC-3细胞株的增殖抑制作用。建立人恶性胶质母细胞瘤U87MG裸小鼠移植瘤模型，考察活性化合物的抑瘤效果。结果 HTRF结果显示有4个活性较好的化合物（LY22、LY25、LY28、LY32），其中LY28对c-Met抑制作用优于阳性对照药克唑替尼（Crizotinib）。CCK-8结果显示这些活性化合物对选用的4种靶细胞均有不同程度的抑制作用，其中LY28对肿瘤细胞增殖抑制作用明显。裸小鼠移植瘤实验显示，LY28可显著抑制U87MG裸小鼠移植瘤的增殖，40 mg/kg LY28抑瘤率达到78.13%。结论化合物LY28具有较好的抗肿瘤活性，具有进一步研发的价值。
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肺动脉高压大鼠肺组织肝细胞生长因子和c-met表达的变化
目的 观察肺动脉高压大鼠肺内肝细胞生长因子(HGF)及其受体(c-met)表达的变化.方法 雄性SD大鼠80只,7周龄,体重180～250 g,采用随机数字表法,将其随机分为2组(n=40):对照组(C组)和肺动脉高压组(PH组).PH组经左侧开胸行左肺切除术,手术结束后关胸,待自主呼吸恢复后拔除气管导管,2周后颈部皮下注射野百合碱60 mg/kg,制备肺动脉高压模型；C组仅开胸,2周后颈部皮下注射等容量生理盐水.分别于注射野百合碱前1 d(基础值)、注射野百合碱后7、14、21和28 d时,各取8只大鼠,监测肺动脉压(mPAP),计算右心室与左心室+室间隔质量比[RV/( LV+S)],计算肌型肺小动脉血管中膜相对厚度(RWT1和RWT分别表示直径为50～100 μm和100-150μm的血管中膜相对厚度).采用RT-PCR法检测肺组织HGF mRNA和c-met mRNA的表达,采用Western blot法检测肺组织HGF蛋白和c-met蛋白的表达,采用ELISA法检测肺组织转化生长因子-β(TGF-β)含量.结果 与C组比较,PH组注射野百合碱后14、21和28 d时mPAP、RV/ (LV+S)和RWT2升高,HGF蛋白表达下调,注射野百合碱后7、14、21和28 d时RWT1升高,肺组织HGF mRNA表达下调,TGF-β含量升高(P＜0.01),c-met mRNA及其蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 肺组织HGF合成不足可能参与了肺动脉高压的形成,其机制与肺组织TGF-β含量升高有关.
关键词： 肝细胞生长因子 原癌基因蛋白质c-met 高血压 肺性 -
沉默c-met基因表达对胃癌肝高转移潜能细胞生物学行为的影响
背景 胃癌肝高转移潜能细胞(XGC9811-L)是本实验组在前期工作中建立的一株具有肝脏高转移潜能的胃癌细胞系,c-met基因在其中高表达.c-met是肝细胞生长因子(HGF)的受体.目的 研究沉默c-met基因表达对XGC9811-L的增殖、侵袭和转移等生物学行为的影响.方法 2014年1-6月,采用细胞转染法将重组质粒pSuppressorRetro-c-met-siRNA导入XGC9811-L,建立稳定转染细胞系,按有无转染和转染目的基因的不同分为未转染组、空载体组、随机序列组和siRNA组.采用荧光定量反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测XGC9811-L中c-met mRNA相对表达水平,Western blotting法检测c-met相对表达水平,通过细胞增殖实验检测各组细胞增殖能力并绘制细胞生长曲线,通过侵袭实验和运动实验计算各组穿膜细胞数.结果 siRNA组c-met mRNA、c-met相对表达水平低于未转染组、空载体组、随机序列组(P＜0.05).siRNA组第3天、第5天、第6天、第7天细胞增殖能力低于未转染组、空载体组、随机序列组(P＜0.05).在侵袭实验中,siRNA组穿膜细胞数少于未转染组、空载体组、随机序列组(P＜0.05).在运动实验中,siRNA组穿膜细胞数少于未转染组、空载体组、随机序列组(P＜0.05).结论 沉默c-met基因的表达可以抑制XGC9811-L的增殖、侵袭和转移能力,c-met在胃癌肝转移的发生、发展过程中可能起重要作用,抑制c-met基因表达可能会抑制胃癌细胞向肝脏转移.
关键词： RNA 小分子干扰 基因沉默 原癌基因蛋白质c-met XGC9811-L -
SU11274逆转肝细胞生长因子诱导的非小细胞肺癌细胞对厄洛替尼耐药作用及其机制研究
背景 肝细胞生长因子(HGF)能够在体外诱导敏感非小细胞肺癌(NSCLC)细胞形成对表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)耐药,敏感NSCLC对厄洛替尼的耐药机制可能与HGF刺激c-Met磷酸化有关.目的 旨在研究c-Met抑制剂SU11274在逆转HGF诱导的裸鼠体内敏感NSCLC对厄洛替尼耐药作用及其机制.方法 于2014年3月-2015年1月选择NSCLC细胞株H292及人胚肺成纤维细胞(MRC-5),通过酶联免疫吸附(ELISA)法检测MRC-5培养上清液中HGF水平,MTT法检测细胞增殖情况,应用Western blotting法检测细胞中c-Met及其下游通道蛋白的变化.建立H292细胞的裸鼠移植瘤模型,设对照组(C组)、HGF处理组(H组)、HGF+SU11274处理组(HS组)、HGF+1%二甲基亚砜(DMSO)处理组(HD组)、厄洛替尼处理组(E组)、HGF+厄洛替尼处理组(HE组)、HGF+厄洛替尼+SU11274处理组(HES组),观察肿瘤生长情况,测量肿瘤体积,称取肿瘤质量.免疫组织化学法检测裸鼠移植瘤组织中c-Met及其下游通道蛋白的变化.结果 ELISA法检测结果显示,MRC-5培养上清液中HGF水平为(1 262±90)pg/ml.MTT法检测结果显示,H292与MRC-5培养上清液混合培养后,H292在厄洛替尼IC50时的增殖率为97.07%.H292 MRC-5阳性细胞p-Met、p-STAT3、p-AKT、p-ERK1/2表达水平高于MRC-5阴性细胞(P<0.05).处理方法与时间对肿瘤体积存在交互作用(P<0.001);处理方法对肿瘤体积主效应显著(P<0.001);时间对肿瘤体积主效应显著(P<0.001).其中HES组第7、11、14、18、21、25天肿瘤体积小于HE组(P<0.05).各组肿瘤质量比较,差异有统计学意义(F=39.120,P<0.001);其中HES组肿瘤质量小于HE组(P<0.05).各组c-Met、p-Met、p-STAT3、p-AKT、p-ERK1/2表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其中HES组c-Met、p-Met、p-STAT3表达水平低于HE组(P<0.05).结论 MRC-5分泌的HGF能够在裸鼠体内诱导敏感NSCLC细胞株H292对厄洛替尼产生耐药,c-Met抑制剂SU11274可逆转HGF诱导敏感NSCLC细胞株H292对厄洛替尼耐药,其机制可能与抑制了HGF活化的c-Met及其下游通道蛋白相关.
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C-met和CD147在肝细胞癌中的表达及临床意义
目的 研究c-met、CD147在肝细胞癌中的表达,探讨两者的表达与肝癌侵袭转移的关系.方法 采用免疫组织化学法对62例肝细胞癌手术切除标本中c-met、CD147的表达进行检测,评估c-met的表达与肝细胞癌临床病理因素的关系及与CD147表达的关系.结果 c-met、CD147在肝细胞癌组织中的阳性表达率分别为55%、61%,与正常肝组织比较差异有统计学意义(分别为5%、15%,P＜0.01); c-met阳性表达率与肝细胞癌的转移及肿瘤分化有关(P＜0.05),而与性别、年龄、肿瘤的大小、分期无关;CD147的阳性表达率与肝细胞癌的转移、肿瘤分化及分期有关(P＜0.05),而与性别、年龄、肿瘤的大小无关;c-met阳性表达与CD147的异常表达有关(P＜0.05).结论 在肝细胞癌的转移中,HGF/c-met与肝细胞癌的转移有关,并且与CD147存在联系,可能影响基质金属蛋白酶(MMPs)的表达,对于肝细胞癌的转移防治及预后具有一定的临床意义.
关键词： 癌 肝细胞 原癌基因蛋白质c-met 肿瘤转移 CD147 -
c-Met在肝细胞癌发生发展中的作用
c-Met在肝细胞癌的发生、发展中起着关键作用,可导致肿瘤细胞的增殖、存活、细胞骨架重组、分离扩散及血管生成等,同时还是评价预后的一个重要指标.c-Met在肝细胞癌中主要通过激活一系列信号通路发挥作用.近年来提出的小分子激酶抑制剂可阻止c-Met胞内羧基末端磷酸化,进而阻止信号转换器的募集及下游信号通路的传导,从而发挥抗肿瘤作用.基于对c-Met的了解及其在肝细胞癌中的致癌作用,指出了选择性c-Met抑制剂靶向治疗肝细胞癌的应用前景.
关键词： 癌 肝细胞 原癌基因蛋白质c-met 信号传导 综述 -
携带c-Met短发夹结构重组腺相关病毒的包装及滴度测定
目的:包装带有人U6启动子及c-Met短发夹环的重组腺相关病毒,为抑制c-Met的表达及进行肿瘤基因治疗研究奠定基础.方法:通过PCR方法将带有c-Met短发夹结构的片段构建至人U6启动子下游,将U6shMet构建至腺相关病毒载体质粒pSNAV中,将pSNAVUshMet转染BHK细胞,经G418筛选后加辅毒rHSV1-repcap包装成携带U6shMet的重组腺相关病毒.SDS-PAGE电泳分析病毒纯度,斑点杂交测定病毒滴度.结果:获得了2段带有c-Met短发夹结构的片段U6shMet1和U6shMet2,成功包装了2个带有U6shMet序列的重组腺相关病毒rAAVUshMet1和rAAVUshMet2,纯化后的病毒电泳分析条带清晰、杂带少,病毒滴度均为4×1012mg·L-1.结论:成功构建了带有U6shMet的重组腺相关病毒rAAVUshMet,病毒纯度好、滴度高,为抑制c-Met的表达及进行肿瘤基因治疗提供了运载工具.
关键词： 原癌基因蛋白质c-met 腺相关病毒 RNA干扰 -
肝细胞生长因子受体在宫颈癌组织中的表达及其与增殖细胞核抗原的关系
目的:研究肝细胞生长因子受体(c-met)在宫颈癌中的表达,探讨其与增殖细胞核抗原(PCNA)的关系.方法:运用免疫组化(SP)方法检测14例慢性宫颈炎和50例宫颈癌组织中c-met及PCNA的表达率.结果:在慢性宫颈炎组织,c-met表达阳性率为14.3%(2/14),而在宫颈癌组织,其表达阳性率为62.0%(31/50),两者比较差异有显著性(P<0.05).组织分化程度低组c-met表达率高于分化程度高组(P<0.05),淋巴结转移组的c-me t表达率明显高于无淋巴结转移组(P<0.05),鳞癌组与腺癌组c-met表达率比较差异无显著性(P>0.05),临床Ⅰ期和Ⅱ期组c-met表达量比较差异无显著性(P>0.05).在慢性宫颈炎组织中,PCNA指数为24.79%±5.1%,在宫颈癌组织中,PCNA指数为39.9%±15.46%,两者比较差异有显著性(P<0.05).组织分化程度越低、临床分期越晚PCNA的表达量越高(P<0.05),鳞癌组与腺癌组的PCNA表达量比较差异无显著性(P>0.05).c-met阳性表达组的PCNA指数明显高于c-met阴性表达组(P<0.01).结论:c-met的表达与PCNA密切关联,可作为评估宫颈癌预后的一个指标.
关键词： 宫颈肿瘤 原癌基因蛋白质c-met 增殖细胞核抗原 免疫组织化学 -
胃癌及胃癌前病变中APC、bcl-2和c-met基因的表达及意义
目的:探讨APC、bcl-2和c-met基因在胃癌发生、发展中的作用以及在胃癌早期诊断中的意义.方法:应用免疫组化技术检测APC、bcl-2、c-met蛋白在30例胃癌、30例不典型增生、30例肠上皮化生(肠化)、10例胃腺瘤及20例正常胃黏膜组织中的表达.结果:①APC阳性表达率在肠化、不典型增生、胃癌及胃腺瘤组织中表达率分别为66.7%、53.3%、53.3%和50.0%,与正常胃黏膜组织(90.0%)比较明显降低(P＜0.05),其中中重度不典型增生APC表达率(47.1%)低于轻度不典型增生(61.5%)(P＜0.05).APC在无淋巴结转移的胃癌组织中表达率高于有淋巴结转移的胃癌组织(P＜0.05).②bcl-2阳性表达率在胃癌(66.7%)、不典型增生(43.3%)、肠化(40.0%)胃黏膜组织中表达率均明显高于正常对照组(5.0%)和胃腺瘤组(10.0%)(P＜0.05);轻度不典型增生组阳性表达率(30.8%)低于胃癌组(P＜0.05);中重度不典型增生组(52.9%)与胃癌组比较差异无显著性(P＞0.05).中高分化胃癌组织中bcl-2表达率者高于低分化者(P＜0.05),Lauren分型肠型胃癌中表达率高于弥漫型(P＜0.05).③c-met阳性表达率在胃癌(63.3%)、肠化(63.3%)和不典型增生组织(60.0%)均明显高于正常胃黏膜组(10.0%)和胃腺瘤组(10.0%)(P＜0.05);中重度不典型增生组阳性表达率(70.6%)明显高于轻度不典型增生组(46.1%)(P＜0.05);中重度肠化组阳性表达率(75.0%)明显高于轻度肠化组(55.6%)(P＜0.05).中高分化胃癌c-met阳性表达率高于低分化胃癌(P＜0.05),有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者(P＜0.05).结论:APC基因的失活、bcl-2和c-met基因的过表达对胃癌的发生、发展起促进作用;对中重度不典型增生胃黏膜进行APC、bcl-2和c-met基因检测有助于胃癌的早期诊断.
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高糖诱导人肾间质成纤维细胞c-met的表达及黄芪对其的调节作用
目的:体外研究高糖对人肾脏问质成纤维细胞c-met表达的影响,并观察黄芪药物血清对其的调节作用.方法:体外培养人肾脏间质成纤维细胞,按培养液不同分为正常对照组、高糖组和甘露醇组.于作用后6、12、24、48和96 h,采用逆转录一聚合酶链反应方法检测c-met和转化生长因子β1(transforming growth factor-betal,TGF-β1)Mrna表达,蛋白印迹分析检测c-met蛋白的表达.制备含药血清,将成纤维细胞分高糖组、对照血清组和10%黄芪含药血清组,作用24 h和48 h后,检测c-met蛋白和Mrna表达情况.结果:与正常对照组比较,高糖组细胞培养12 h时c-met Mrna表达增加(P<0.05),24 h达高峰(P<0.01),之后表达逐渐下降;高糖组细胞培养24 h时,TGF-β1的表达开始增加(P<0.05),96 h达到高峰(P<0.01).与高糖组以及对照血清组比较,黄芪含药血清可使细胞c-met Mrna和蛋白表达增加(P<0.01,P<0.05).结论:高糖刺激早期诱导c-met表达,之后表达下降.黄芪可以通过诱导c-met表达延缓糖尿病肾病的进展.
关键词： 原癌基因蛋白质c-met 糖尿病肾病 黄芪 成纤维细胞 转化生长因子β1 -
抗纤灵方对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织肝细胞生长因子mRNA及细胞外信号调控蛋白激酶1/2和p38磷酸化的影响
目的:研究中药复方抗纤灵方对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)所致肾纤维化大鼠肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)基因表达和丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路的影响,初步探讨其发挥疗效的作用机制.方法:雄性SD大鼠18只随机分为3组,每组6只.用单侧输尿管结扎术建立大鼠肾纤维化模型,抗纤灵灌胃给药2周后检测血肌酐(serum creatinine,Scr)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)及梗阻肾羟脯氨酸含量;采用逆转录-多聚酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测HGFmRNA表达;采用蛋白免疫印迹法检测其受体c-Met蛋白表达及MAPK通路信号分子细胞外信号调控蛋白激酶工/2(extracellular signal-regulated protein kinase 1/2,ERK1/2)和p38磷酸化情况.结果:与假手术组比较,模型组大鼠Scr、BUN及梗阻肾羟脯氨酸含量均显著增高;肾组织HGF mRNA水平显著下调,c-Met蛋白表达显著上调,且ERK1/2和p38明显磷酸化. 中药干预后,BUN及羟脯氨酸含量显著降低,肾组织HGF mRNA水平明显上调,ERK1/2和p38磷酸化被显著抑制.结论:抗纤灵方可通过增加肾纤维化保护性因子HGF mRNA的表达及抑制肾组织MAPK通路分子ERKl/2和p38磷酸化以改善肾间质纤维化大鼠肾功能,减少其胶原含量.
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C-MET蛋白表达与Ⅲ期胃癌患者生存关系的回顾性分析
背景：C-MET表达于多种肿瘤中，其表达或可有助于预测胃癌患者的预后。目的：探讨Ⅲ期胃癌患者中C-MET蛋白表达情况与生存的关系。方法：连续纳入2010年4月—2014年4月北京市平谷区医院178例Ⅲ期胃癌初治患者，使用免疫组化法检测C-MET蛋白表达。采用Kaplan-Meier法分析C-MET蛋白高表达者和低表达者的生存情况，采用COX比例风险模型分析各因素对预后的影响。结果：139例（78.1%）胃癌患者C-MET蛋白低表达，39例（21.9%）高表达。C-MET 蛋白高表达者的中位生存期（25.1个月对45.0个月）、1年生存率（69.2%对91.4%）、2年生存率（41.0%对84.0%）显著低于C-MET蛋白低表达者，差异均有统计学意义（ P<0.05）。C-MET蛋白表达、N分期和年龄为胃癌患者预后的影响因素（ P<0.05），而性别和肿瘤分化程度与预后无关（ P>0.05）。结论：C-MET蛋白在Ⅲ期胃癌患者中的表达率为21.9%，其表达与生存期显著相关，高表达者预示1年生存率更低。
关键词： 胃肿瘤 原癌基因蛋白质c-met 预后 -
甲状腺肿瘤中肝细胞生长因子及其受体蛋白的表达研究
用免疫组化检测甲状腺良恶性肿瘤组织中肝细胞生长因子(HGF)及其受体(c-Met)的表达.结果 显示HGF和c-Met蛋白阳性表达率在腺癌组中显著高于腺瘤组,尤其滤泡性腺癌组显著高于滤泡性腺瘤组,二者表达强度在乳头状腺癌组呈显著正相关.提示HGF和c-Met的异常表达可能对甲状腺良恶性肿瘤的鉴别诊断、预后判断有一定参考意义.
关键词： 甲状腺肿瘤 肝细胞生长因子 原癌基因蛋白质c-met 免疫组织化学
