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反油酸对人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞线粒体功能和细胞自噬的影响
目的 研究反油酸对人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞线粒体功能和细胞自噬的影响.方法 体外培养人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞,加入不同剂量(0、10、20、50和100 μmol/L)的反油酸,24 h后收集细胞,采用透射电镜观察细胞自噬小体;采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞活力;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)和蛋白免疫印迹(western blot)方法检测细胞自噬相关的基因和蛋白表达水平.结果 透射电镜观察细胞结构发现,50和100 μmol/L反油酸可使细胞内出现自噬小体,并可以引起细胞活力下降,差异均有统计学意义(P＜0.01);100 μmol/L反油酸作用24和48 h后,细胞活力明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05);100 μmol/L反油酸可使SH-SY5Y细胞中细胞色素C(cytochrome c,cyt-c)基因Mrna表达水平明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05);随着反油酸浓度的升高,细胞浆中cyt-c蛋白表达水平逐渐升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).但是不同剂量的反油酸对SH-SY5Y细胞自噬微管相关蛋白轻链3B(LC3B)基因、Beclin1基因、p62基因、自噬相关基因5(atg5)、自噬相关基因12(atg12)Mrna水平表达差异无统计学意义(P＞0.05);但与对照组比较,50和100 μmol/L反油酸可使SH-SY5Y细胞LC3B和Beclin1蛋白表达水平逐渐上调,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 反油酸可以引起人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞活力下降,可能与其引起细胞自噬小体形成,上调自噬相关蛋白表达水平,促进线粒体cyt-c蛋白释放入细胞浆有关.
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反式脂肪酸对人脂肪细胞脂联素mRNA表达的影响
目的 研究油酸( oleic acid,OA)及其反式异构体反油酸(elaidic acid,EA)对人成熟脂肪细胞脂联素mRNA表达的影响.方法 原代培养人脂肪组织来源的间质干细胞(human adipose tissue-derived stromal cells,hATSCs),诱导分化为成熟脂肪细胞,分别暴露于0(对照)、1、5、25 μmol/L的OA和EA溶液72 h.采用实时定量PCR(real time PCR)方法 检测脂联素mRNA的相对表达水平.结果 与对照组比较,当人成熟脂肪细胞暴露于5、25 mol/L OA时,脂联素mRNA表达水平降低,差异有统计学意义(P＜0.05)；当人成熟脂肪细胞暴露于1、5、25 μmol/L EA时,脂联素mRNA表达水平升高,差异有统计学意义(P＜0.05).且人成熟脂肪细胞脂联素mRNA表达水平随着OA染毒浓度的升高而下降,随着EA染毒浓度的升高而上升.与相同暴露剂量的OA组比较,EA暴露组人成熟脂肪细胞脂联素mRNA表达水平均高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 OA具有抑制人成熟脂肪细胞脂联素mRNA表达的作用,而EA具有增强作用.
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反油酸对人脂肪细胞因子表达的影响
目的 观察反油酸(elaidic acid,EA)对人成熟脂肪细胞因子表达的变化,探讨其对人脂肪细胞内分泌功能的可能影响.方法 将人脂肪组织来源间质干细胞(human adipose tissue-derived stromal cells,hADSCs)经体外原代培养,诱导分化为成熟脂肪细胞,分别于0(对照)、1、5和25 μmol/L的EA暴露72 h.采用实时定量PCR(real time PCR)方法检测成熟脂肪细胞因子瘦素( leptin)、脂联素(adiponectin)和抵抗素(resistin )mRNA的表达水平.结果 与对照组比较,各剂量EA暴露组人成熟脂肪细胞脂联素mRNA的表达水平均较高,仅25 μmol/L EA暴露组人成熟脂肪细胞抵抗素mRNA的表达水平均较低,差异均有统计学意义(P＜0.05);而各剂量EA暴露组人成熟脂肪细胞瘦素mRNA的表达水平均无显著变化.结论 人脂肪细胞因子对外源性干预物EA的反应不一致,EA具有上调脂联素mRNA表达、下调抵抗素mRNA表达的作用.
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反油酸对血管内皮细胞功能及形态的影响
目的 通过建立血管内皮细胞(EC)与血管平滑肌细胞(SMC)的联合培养模型,探讨反油酸对内皮细胞的损伤作用.方法 将与平滑肌细胞联合培养的内皮细胞用浓度为50μmol/L的油酸和反油酸分别作用48h.试剂盒测定乳酸脱氢酶(LDH)活力、一氧化氮(NO)含量;RT-PCR测定细胞粘附因子(VCAM-1、ICAM-1和E-slectin)基因表达量;激光共聚焦显微镜观察处理后的内皮细胞形态.结果 反油酸促进LDH渗出,且紧密接触模型中内皮细胞LDH渗出率较旁分泌模型显著增加;反油酸抑制内皮细胞NO分泌,两种模型间无显著性差异;紧密接触模型中内皮细胞与旁分泌模型中的内皮细胞相比,VCAM-1、ICAM-1、E-slectin基因表达量均显著上升,且反油酸促粘附因子表达作用强于油酸;与平滑肌细胞紧密接触的内皮细胞出现形态不规则,反油酸使内皮细胞变形.结论 与平滑肌联合培养可增加反油酸对内皮细胞的损伤.
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反油酸对人脐静脉平滑肌细胞活力的影响
平滑肌细胞是血管壁中膜的主要细胞成分,是动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)和血管成形术后再狭窄(restenosis after angioplasty,RAA)等病理过程形成和发展的重要部位,对血管壁的完整性和紧张性的调节也起重要作用[1],其异常增殖及形态学转变将导致动脉粥样硬化过程中泡沫细胞形成,促进病情发展和恶化[2-3].反式脂肪酸(TFA)是在反式构型中至少有一个双键不饱和脂肪酸,常在氢化植物油中有较高含量[4],研究显示TFA的摄入量和心血管疾病的发生率有密切关系[5],特别是和动脉粥样硬化的发生呈正相关[6],本研究以体外培养人脐静脉平滑肌细胞株为实验材料,反油酸(transC18∶1)为诱导因素,通过MTT法及流式细胞术观察其对HUVSMC活力的影响,初步探讨TFA与动脉粥样硬化之间的关系.
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麇鹿角中脂肪酸的分析研究
目的:分析评价麋鹿角样品中脂肪酸类成分.方法:采用溶剂法提取脂肪酸类成分,经甲酯化,以气相色谱-质谱联用技术(GC-Q TOF/MS)对不同年龄及不同部位的麋鹿角样品进行分析.采用Agilent HP-5MS石英毛细管色谱柱(30 mm×0.25 mm,0.25μm);程序升温,起始温度50℃,以10℃·min-1速率升至140℃,保持4 min;再以2℃·min-1速率升至180℃;以1℃·min-1速率升至225℃,保持3 min;以10℃·min-1速率升至280℃,保持2 min.进样口温度230℃;载气为氦气,流速1.0 mL·min-1;分流比为20∶1.结果:麋鹿角中含有多种脂肪酸类成分,所测成分中相对含量高的是反油酸(16.609％),相对含量低的是顺-11,14-二十碳二烯酸(0.001％).不同部位麋鹿角脂肪酸种类差异不显著;但相对含量差异较大,其基部含量较高,中部和尖部含量明显下降.不同部位麋鹿角样品各脂肪酸在总脂肪酸中的比例差异不显著.结论:以GC-QTOF/MS联用技术分析了麋鹿角样品中脂肪酸类成分,为后续麋鹿角资源的利用与开发提供了一定的依据.
