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玉米赤霉烯酮对MCF-7和T47D细胞凋亡的抑制作用
玉米赤霉烯酮(ZEA)是一种霉菌毒素[1],在奶制品及霉变谷类食物中含量较高.据报道,ZEA在结构上与内源性雌激素有相似之处,通过与雌激素受体结合而模拟雌激素效应,增加女性体内雌激素负荷,与乳腺癌发病率的升高有关[2].本实验室前一阶段的研究表明[3],ZEA可模拟雌激素作用,促进雌激素依赖性乳腺癌细胞MCF-7及T47D细胞增殖,促进细胞DNA合成,并推进细胞进入S期和G2/M期,是一种有效的促有丝分裂因子.本次实验集中探讨ZEA的这一作用是否与细胞的凋亡现象有关.
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氯化钴诱导人SK-N-SH细胞凋亡的研究
在神经系统中,脑组织的活动需要大量的能量,这些能量主要是由线粒体的有氧呼吸产生.虽然人脑组织的的重量仅占人体重的2%,但其耗氧量却极高,脑组织无疑是缺氧损伤的重要靶器官.近年来,关于脑缺氧损伤的研究比较多,但主要体现在缺氧导致的生理生化改变,很少在分子水平上阐述这一问题.鉴于此,我们拟建立神经细胞缺氧的体外模型,供今后研究神经细胞缺氧凋亡的机制.氯化钴(CoCl2)为红色单斜晶体,被广泛用于诱导细胞化学缺氧损伤.SK-N-SH细胞为人神经母细胞瘤细胞株.因此本研究利用CoCl2诱导SK-N-SH细胞,并检测此模型能否有效模拟缺氧条件下脑神经细胞的凋亡.
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氧化苦参碱对内毒素诱导心肌细胞凋亡及胞内MAPK/ERK5信号的影响
目的 探讨氧化苦参碱对内毒素诱导心肌细胞凋亡的干预作用.方法 实验分为3组:对照组、内毒素(LPS)处理组和氧化苦参碱(OMT 80μg/ml)+内毒素(LPS)处理组.MTT试剂检测细胞存活率;流式细胞仪检测各组心肌细胞凋亡;RT-PCR检测各组心肌细胞MAPK和ERK5 mRNA的表达;Western blot检测各组心肌细胞内MAPK和ERK5的蛋白表达.结果 OMT进行不同剂量干预后,内毒素诱导心肌细胞存活率明显上升,OMT剂量40μg/ml时,细胞存活率明显高于LPS组(P＜0.05),OMT剂量80μg/ml时,细胞存活率明显高于LPS组(P＜0.01).OMT 80μg/ml干预后,UR、LR区的细胞比例较LPS组下降(P＜0.05).OMT 80μg/ml干预后,能明显逆转内毒素诱导的心肌细胞内MAPK、ERK5 mRNA的表达(P＜0.05),同时,内毒素诱导心肌细胞内MAPK、ERK5蛋白的表达也得到明显逆转(P＜0.05),上述差异均有统计学意义.结论 OMT 80μg/ml抑制内毒素诱导的心肌细胞的凋亡可能是通过影响心肌细胞内MAPK/ERK5信号通路来实现的.
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氟化钠对人多发性骨髓瘤细胞RPMI8226的毒性作用
目的 研究人多发性骨髓细胞系RPMI8226暴露于不同浓度氟化钠时细胞增殖、凋亡和周期的变化.方法 采用CCK-8法检测不同剂量的氟化钠对RPMI8226细胞存活率的影响;采用Annexin V/PI流式细胞仪定量检测凋亡测定细胞周期和凋亡.结果 氟化钠浓度为5、10、20、40、80和160 μmol/L时细胞存活率均高于空白对照组,氟化钠浓度在320、640、1280和2560 μmol/L时细胞存活率低于空白对照组,氟化钠浓度为10、20、40、80、160、320、640、1280和2560 μmol/L时所测反映细胞增殖的吸光度(A)值差异均有统计学意义(P＜0.05);细胞周期实验结果显示在不同剂量(5、40、320和2560 μmol/L)时,随着氟化钠浓度的增加,G2期细胞相对数量减少,G1期细胞相对数量增多,就整个细胞周期而言,S期细胞相对数量比G1期、G2期均高,其中对照组与染毒组的相对细胞数量差异有统计学意义;细胞凋亡实验显示氟化钠浓度为320和2560μmol/L时均诱导细胞凋亡,其中细胞凋亡率在对照组与染毒组之间差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 氟化钠浓度为5、10、20、40、80和160 μmol/L时促进RPMI8226细胞的增殖.氟化钠浓度在320、640、1280和2560 μmol/L时抑制RPMI8226细胞的增殖.细胞周期和细胞凋亡实验显示DNA损伤程度与S期细胞相对数量一致,氟化钠对RPMI8226细胞造成的DNA损伤可能是细胞滞留在S期的一个重要原因.
关键词： 氟化钠 人多发性骨髓瘤细胞RPMI8226 细胞增殖 细胞凋亡 细胞周期 -
高频电磁场诱导卵巢细胞凋亡及其机制的研究
高频电磁场(high-frequency electromagnetic field,HF-EMF)是射频辐射的一种,在鞋业的高频胶合、塑料热合等行业中是常见的.近年研究发现,细胞凋亡是卵泡闭锁的潜在机制,其对于卵巢生殖细胞减少、卵泡闭锁和黄体溶解都起着重要作用[1].
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吡咯列酮对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用机制
目的 研究吡咯列酮对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用机制.方法 大鼠30只随机分为5组:假手术组,缺血再灌注组,吡格列酮5 mg/kg组,吡格列酮10 mg/kg组和吡格列酮20 mg/kg组,每组6只,采用在体左肾动脉钳夹暂时阻断肾血流法制备大鼠肾缺血再灌注模型,取大鼠左肾组织,检测细胞凋亡、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、p53、Bax、Bcl-2和半胱氨酸天冬酶9、3(Caspase 9和Caspase3)的变化.结果 与缺血再灌注组相比,吡格列酮5、10和20 mg/kg可呈剂量依赖性减少8-OHdG和MDA含量,降低p53和Bax蛋白表达,抑制Caspase 9和Caspase3酶活性,增加SOD酶活性和Bc-l2蛋白表达,抑制细胞凋亡.结论 吡格列酮预处理可降低大鼠肾缺血再灌注后细胞的氧化损伤水平,下调凋亡相关蛋白表达,减少肾细胞凋亡数以起到肾保护作用.
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冬凌草甲素对肺腺癌A549细胞凋亡的影响及相关机制的研究
目的 探讨冬凌草甲素(Oridonin)对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 采用MTT法观察不同浓度冬凌草甲素对A549细胞增殖的抑制作用;瑞氏-吉姆萨染色法检测细胞形态学的改变;Western blot法观察Bcl-2和Bax表达水平的变化.结果 冬凌草甲素明显抑制A549细胞的增殖,作用24、48和72 h的IC50分别是87.9、67.6和45.2 μmol/L,姬姆萨染色可观察到核染色质浓缩、胞浆空泡、核裂解等典型的凋亡细胞形态学改变,Western blot分析显示有Bcl-2表达的降低和Bax表达的上调.结论 冬凌草甲素对人A549细胞具有生长抑制和诱导凋亡作用,同时抗凋亡蛋白Bcl-2表达的降低和促凋亡蛋白Bax上调可能是冬凌草甲素诱导肺腺癌A549细胞发生凋亡的重要作用机制之一.
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tBHQ对CdTe QDs诱导AML 12细胞凋亡的拮抗作用研究
目的 结合叔丁基对苯二酚(tBHQ)的抗氧化效果,探讨碲化镉量子点(CdTe QDs)对小鼠正常肝细胞(AML 12)的毒性效应以及调控机制.方法 四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测量子点对AML 12细胞增殖活性影响；DCFH-DA法检测细胞内活性氧(ROS)产生；Annexin-V-FITC法检测量子点对细胞凋亡的影响；Real-time PCR法检测Fas、Bcl-2、Bax mRNA表达水平的改变.结果 CdTe QDs染毒24 h后,AML 12细胞有明显的生长抑制作用；随着染毒剂量增加,细胞内ROS水平增加,细胞凋亡发生率增加,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).经tBHQ预处理后,细胞内ROS水平及凋亡发生率降低,与同剂量未用tBHQ预处理的实验组结果比较,差异有统计学意义(P＜0.05).细胞内的Bcl-2 mRNA表达水平下调,Fas mRNA表达上调,且有剂量依赖效应,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05),经tBHQ预处理后的细胞,与同剂量未用tBHQ处理的实验组结果比较Bcl-2 mRNA表达上升,FasmRNA表达下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 CdTe QDs可以抑制AML 12细胞活力,诱导细胞内ROS产生,产生氧化应激,促进细胞凋亡发生,其凋亡机制可能与Fas mRNA表达上调以及Bcl-2 mRNA表达的下调有关.抗氧化剂tBHQ可以在一定程度上减轻CdTe QDs的毒性作用.
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氟致培养大鼠大脑皮层星形胶质细胞凋亡
氟是人体必需的微量元素.缺氟可影响人和动物的生长发育和学习记忆能力,而长期、过量氟摄入也会对学习记忆、神经活动产生不良影响[1,2].以往氟中毒脑损伤的研究多局限于脑组织生化改变和神经元病理形态变化[3,5].
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氟化钠诱导大鼠肾脏细胞DNA损伤及细胞凋亡的实验研究
目的 研究氟对大鼠肾脏细胞DNA损伤和细胞凋亡的影响.方法 48只SD大鼠随机分为4组(对照组、低氟组、中氟组和高氟组),每组12只,分别饮用含氟化钠为0、50、100和200 mg/L的去离子水,染毒120 d.动物处死后,用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测氟化物对大鼠肾细胞DNA损伤,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡.结果 彗星实验表明,各染氟组肾细胞拖尾率明显高于对照组(P＜0.01).染氟组大鼠肾细胞DNA迁移长度均高于对照组,高氟组与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01),中氟组与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).流式细胞术结果表明低氟组肾细胞凋亡率较对照组显著增高(P＜0.05),中氟组、高氟组较对照组显著增高(P＜0.01).大鼠肾细胞DNA损伤与细胞凋亡之间存在明显的正相关关系(r=0.959,P＜0.01).结论 氟可导致大鼠肾细胞DNA损伤,诱导肾细胞凋亡,氟诱导的大鼠肾细胞凋亡可能与氟所导致的DNA损伤有关.
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三丁基锡对BRL-3A细胞活力以及凋亡的影响
三丁基锡(tributyltin,TBT),已经广泛应用于农业杀虫、材料防腐和海洋船体涂料等.由于TBT可以从涂料释放到水中造成污染,不仅毒害水生生物,破坏生态环境,而且不可忽视的是它们都在食用水生生物机体内富集,这些生物被食用可造成对人体的危害,因此引起了研究者们的关注.国外已有很多文献报道了TBT诱导凋亡的事实[1-2],但是国内在此领域的研究较少,本实验采用正常大鼠肝细胞(BRL-3A细胞),研究TBT对其细胞活力的影响和凋亡的诱导作用.
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内质网通路在氯胺酮致SH-SY5Y细胞凋亡中的作用初探
目的 研究内质网通路在氯胺酮(Ketamine)致SH-SY5Y细胞凋亡中的作用.方法 采用0.0、12.5、25.0、50.0和100.0 μg/ml的氯胺酮处理SH-SY5Y细胞48 h时,采用MTT比色法检测细胞的生长率;荧光探针检测细胞内活性氧;流式细胞仪检测细胞凋亡和胞内钙离子浓度;Western blot检测CHOP蛋白的表达量.结果 与空白对照组相比,所有氯胺酮处理组细胞活力均显著降低,活性氧显著升高(P ＜0.05或P＜0.01);胞内钙离子浓度和CHOP蛋白表达量,除12.5 μg/ml氯胺酮处理组外均显著升高(P＜0.05或P＜0.01).与未处理对照组相比,细胞凋亡率25.0、50.0和100.0 μg/ml氯胺酮处理组显著升高(P＜0.01).结论 一定浓度氯胺酮可通过内质网通路引起人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的发生.
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甲醛对人胚肺成纤维细胞的遗传毒性
整体动物中毒的表现都是继发于细胞中的异常变化.肺作为血气交换的重要场所,同时也是甲醛等众多气体污染物进入人体的门户及靶器官,是毒理学研究的重要对象.国际癌症研究机构将甲醛列为人体鼻咽癌可能致癌物,对细胞凋亡及细胞周期的研究尚未见报道,本实验通过研究甲醛对人胚肺成纤维细胞的致微核、细胞凋亡及对细胞周期的毒性作用,进一步探讨甲醛的遗传毒性,为甲醛的致突变性及其致癌机制提供新的信息.
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氯化镉对C6胶质细胞毒性作用的初步研究
目的 观察氯化镉对C6细胞的毒性作用表现.方法 体外培养C6细胞,以0.1、0.27、0.7、1.8和5.0 μmol/L剂量染毒,利用MTT法评价氯化镉对C6细胞(未分化及分化)的增殖抑制作用,LIVE/DEAD检测细胞存活情况,hoechst33342染色后观察凋亡细胞的形态学变化,考马斯亮蓝染色观察细胞突起生长情况.结果 氯化镉作用24 h后,明显抑制细胞增殖,同时分化C6细胞比未分化C6细胞的抑制作用更敏感,与对照组相比,1.8和5μmoL/L剂量组死细胞构成比显著增高,同时存在一定的剂量依赖关系.考马斯染色发现,随染毒剂量的增加,细胞间突起变短.结论 镉可抑制C6增殖,且分化期C6细胞更加敏感,出现明显的细胞毒性,可诱导发生凋亡,影响细胞间突起的生长.
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2,5-己二酮对大鼠大脑皮层细胞凋亡及凋亡相关蛋白的影响
目的 初步探讨大鼠大脑皮层细胞凋亡在2,5-己二酮(HD)致大鼠神经退行性病变中的作用.方法 60只Wistar雄性大鼠,经腹腔染毒,剂量分别为100和300 mg/(kg·d),连续8周(每周5d).处死一半动物并分离、冻存大脑组织.另一半动物停止染毒、自然恢复8周后取材.采用TUNEL方法检测大鼠大脑皮层细胞凋亡指数(AI),采用免疫组化方法检测大鼠大脑皮层细胞Bcl-2和Bax的相对含量.结果 染毒8周后,100和300 mg/kg剂量组动物AI分别为22.25％ (P ＜0.05)和25.12％ (P ＜0.05),与对照组7.94％比较,阳性细胞数量明显增加.恢复8周后100和300 mg/kg剂量组动物AI分别为18.45％ (P ＜0.05)和17.20％ (P ＜0.05),与对照组7.48％比较,仍存在显著性差异,但300 mg/kg剂量组动物AI较染毒8周时有所减小;100和300 mg/kg剂量组动物在HD染毒8周和8周+恢复8周时,Bcl-2含量分别相当于对照组的89.2％、78.4％和80.9％、132.9％;Bax含量分别相当于对照组的126.3％、135.6％和74.6％、80.9％.结论 HD致大鼠退行性病变过程中可能伴有大脑皮层细胞凋亡的发生.
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双嘧达莫对诱导K562人慢性髓原白血病细胞凋亡的研究
目的 检测双嘧达莫对K562人慢性髓原白血病细胞的细胞生长的影响,观察药物作用后肿瘤细胞形态的变化,通过测定药物对细胞凋亡的影响探讨其作用机制.方法 用CASY细胞计数仪测定DPM作用于细胞24和48 h,10、20、40和60 μg/ml剂量组对K562细胞活细胞数目、活率及平均直径体积的影响,并在倒置显微镜下观察不同剂量药物作用后的细胞形态,采用流式细胞术测定细胞凋亡率.结果 双嘧达莫对K562细胞的生长有明显的抑制作用,且有较好的剂量-效应及时间-效应关系.低剂量组仅使活细胞数目减少,而高剂量组可使活细胞数及活率均显著减少(P＜0.01),细胞的平均直径与体积也相应减小.与对照组相比,镜下观察可见细胞分布稀疏,细胞浆内出现大小空泡,并产生凋亡小体.60 μg/ml双嘧达莫作用24 h可以使K562细胞凋亡早期细胞数量明显增加(P＜0.01),达13.2％.结论 双嘧达莫具有抑制K562细胞生长的作用,即抑制细胞增殖并杀死细胞,并使细胞形态发生改变,高剂量的双嘧达莫对细胞凋亡具有诱导作用.
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膳食钙对饮水型氟暴露致子代肝脏损伤的干预作用
目的 探讨膳食钙对氟暴露致子代肝脏损伤的分子机制.方法 取初断乳SD大鼠雌鼠100只,雄鼠50只.雌鼠随机分成对照、染氟、低钙、低钙染氟、高钙染氟5组.3个月后合笼,取14和28日龄仔鼠进行相关实验.结果 与对照组相比,其他各组仔鼠肝细胞的凋亡数量明显增多,28日龄仔鼠低钙染氟组Bcl-2蛋白表达降低(P＜0.05),染氟组和低钙染氟组14日龄雄性、28日龄雌雄仔鼠肝组织Caspase12蛋白表达水平升高(P＜0.01);与染氟组相比,低钙染氟组的细胞凋亡数量明显增多,高钙染氟组的细胞凋亡数量有所下降,各日龄仔鼠低钙染氟组Bcl-2蛋白表达降低(P＜0.05),28日龄雄性仔鼠高钙染氟组Caspase12蛋白表达降低(P＜0.05),低钙组降低(P＜0.01).结论 氟中毒致子代肝损伤的机制可能是氟暴露导致子代肝组织上调内质网途径凋亡通路中Caspase12表达,下调Bcl-2的表达,低钙与染氟表现出协同作用,高钙则能缓解氟中毒症状.
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钒化钠对人食管癌细胞系EC109的增殖抑制作用与诱导凋亡作用
目的 探索不同浓度钒化钠对食管癌细胞系EC109的抑增殖和促凋亡作用.方法 体外培养食管癌细胞系EC109,给予0、0.1、1.0、5.0、10.0、50.0、100.0和200.0μmol/L钒化钠处理,分别培养15、30min、1、2和4h后,通过Western blot检测细胞周期蛋白Cyclin D1与细胞凋亡蛋白Caspase-3在不同时间、不同浓度的表达变化.给予以上相同浓度的钒化钠分别处理细胞4、12、24和48h后,MTT法与流式细胞术检测不同时间、不同浓度的钒化钠对食管癌细胞系EC109细胞株的增殖与周期影响.结果 蛋白印迹结果显示,在100～200μmol/L的浓度范围内随着钒化钠药物浓度的增加,药物处理时间的延长,Cyclin D1的表达呈现逐渐下降的趋势(P＜0.05);当钒化钠浓度小于10μmol/L时,Caspase-3的表达变化无统计学意义(P＞0.05),当处理浓度达到50μmol/L或者更高以及处理时间达到30min甚至更长时,Caspase-3的蛋白表达水平明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).MTT法结果显示,钒化钠浓度达到50～200μmoL/L时,EC109细胞的增值受到抑制(P＜0.05).流式细胞仪检测结果显示,当钒化钠浓度为50～200μmol/L时,随着处理时间24和48h时的增加,EC109细胞被阻滞在S期,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 一定浓度的钒化钠能明显抑制食管癌细胞系EC109的生长,表现出一定的抗肿瘤作用,为钒化钠成为食管癌的临床治疗药物提供实验依据.
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乙醇对PC12细胞p53蛋白的影响
过量饮酒也称酗酒,在大多数国家是一个严重的社会和公共卫生问题.酗酒不但导致各种刑事犯罪、交通事故、意外伤害和自杀及家庭破裂等,而且可引起多系统、多脏器和多功能损害,对神经系统损害尤为突出[1].乙醇是一种亲神经物质,极易透过血脑屏障,对中枢神经系统有抑制作用.体内试验表明神经元和星形胶质细胞是乙醇作用的靶细胞[2,3].许多体外试验也证实,乙醇作用神经元和神经胶质细胞后,可使其细胞数目减少及增加细胞死亡数[4].转录因子p53在细胞凋亡与细胞周期过程中蛋白分子调控网络起着"分子警察"的关键作用.本研究通过体外培养的PC12(pheochromocytoma)细胞探讨p53蛋白在乙醇诱发的神经细胞毒性中所起的作用.
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新型汽油防爆剂MMT对人前列腺细胞系PC-3M的凋亡作用
2000年1月1日,我国颁布新的汽油标准,改用甲基环戊二烯羰基锰(MMT)替代四乙基铅作为新的汽油防爆添加剂,使人群,尤其是交通警察、炼油厂工人、加油站职工和繁华马路附近居民等通过大气接触MMT的机会大大增加[1].研究表明锰在肾脏和前列腺中蓄积量高[2].因此对新型大气污染物MMT的前列腺毒性进行研究,阐明其作用机制十分必要.本实验利用人前列腺细胞系PC-3M研究MMT对PC-3M细胞的影响.
