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脊髓Ⅱ板层NOS、BDNF、GDNF阳性神经膨体的组织化学双标研究
目的:我们前面的研究已发现,脊髓Ⅱ板层有大量NOS、BDNF及少量GDNF阳性神经膨体.为观察这些神经膨体是否同时含有NOS和BDNF或BDNF和GDNF,以间接了解背根节(DRG)小细胞是否同时含有这些物质(因Ⅱ板层的膨体主要源于DRG小细胞).方法:用成年猫L3脊髓制作20 μm厚冰冻切片并分两组,一组先行NOS酶组化染色,NBT兰色反应显色,而后用BDNF抗血清(1∶500, Santa Cruz)以免疫组化ABC法行双标染色,DAB棕色反应显色.另一组则先用BDNF抗血清以免疫组化ABC法染片,DAB棕色反应呈色,再用GDNF抗血清(1∶1500, Santa Cruz)同前染片,TMB兰色反应显色.常规脱水透明封片后,观察脊髓Ⅱ板层NOS、BDNF与GDNF阳性神经膨体的单、双标情况.结果:在NOS与BDNF双标组切片脊髓Ⅱ板层,分别观察到大量兰色反应的NOS阳性神经膨体和棕色反应的BDNF阳性神经膨体,但大多为单标染色,双标者极少.BDNF和GDNF组切片阳性神经膨体的标记与NOS和BDNF组类似,均主要是大量单标的神经膨体,双标者极少.结论:Ⅱ板层内虽有BDNF、GDNF、NOS阳性神经膨体,但各自来源可能不同,即大多数DRG小细胞并非同时含有NOS和BDNF或BDNF和GDNF.提示若从神经膨体内所含物质来讲,DRG小细胞的功能类型及源于这些小细胞的神经膨体可能是不完全一致的.
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脊髓中间外侧神经元NOS与FAS和NT3共存
目的:研究表明,脊髓中间外侧神经元含有NOS.但是,这些神经元是否含有Fas和NT3并不清楚.方法:取成年猫脊髓L3节段制作20 μm厚冰冻切片并分两组,两组切片均先以NADPH-d酶组化法染片,NBT兰色反应显色显示脊髓中间外侧NOS阳性神经元,而后各组切片分别再用Fas和NT3(1∶1500, Santa Cruz)兔抗血清以免疫组化ABC法染片,DAB棕色反应呈色,观察NOS与Fas和NT3在脊髓中间外侧神经元是否共存.结果:在脊髓中间外侧神经元观察到双标反应物,Fas主要位于细胞核,胞浆弱阳性反应,NOS的阳性反应物则主要位于细胞核,胞浆弱阳性反应,NOS的阳性反应物则主要位于细胞浆.相对之,NOS和NT3的阳性反应物则均位于细胞浆.神经突起内均见双标染色.结论:脊髓中间外侧神经元内NOS、Fas和NT3共存.由于NOS、Fas和NT3分属酶、凋亡基因和神经营养因子家族成员,提示脊髓中间外侧神经元至少可能含有上述三个家族的某一成员,进而也提示这些成员可能与脊髓中间外侧神经元的某些生理功能有关.
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双重酶标法检测溃疡性结肠炎凋亡上皮细胞Fas的表达
目的:探讨Fas/FasL介导的结肠上皮细胞凋亡在溃疡性结肠炎(UC)发病机制中的作用.方法:明确诊断的35例UC病人和15例对照人群的活检标本分别进行Fas、FasL的免疫组化染色,采用M30 Cytodeath特异性地检测结肠上皮细胞早期凋亡;对Fas及M30的表达进行相关性分析.观察连续切片和双重酶标染色中Fas和M30的共表达关系.结果:UC组上皮细胞表达Fas、FasL及M30的水平均比对照组明显增高(P＜0.01);Fas与M30的表达有相关性(P＜0.05);通过连续切片分别染色Fas与M30,以及双重酶标法同时染色Fas与M30,发现UC病变肠道凋亡的上皮细胞均为Fas表达阳性的细胞.结论:Fas/FasL介导的结肠上皮细胞过度凋亡可能是UC上皮层破坏的机制之一.
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脊髓Ⅱ板层NOS,BDNF和GDNF阳性神经膨体的组织化学双标研究
目的:为探讨神经膨体是否同时含有NOS和BDNF或BDNF和GDNF,以间接了解背根节(dorsal root ganglion,DRG)小细胞是否同时含有这些物质.方法:用成年猫L3脊髓节段制作20μm厚的冰冻切片并分两组.一组先行NOS酶组化染色,NBT兰色反应显色;继之用BDNF抗血清以免疫组化ABC法行双标染色,DAB棕色反应显色.另组先用BDNF抗血清以免疫组化ABC法染色,显色同前;随后用GDNF抗血清同前染片,TMB兰色反应显色.常规脱水透明封片.结果:在NOS与BDNF双标组,脊髓Ⅱ板层内有大量NOS阳性(呈兰色反应)和BDNF阳性(呈棕色反应)神经膨体,但大多为单标染色,双标染色者极少;BDNF和GDNF双标组阳性神经膨体的标记与NOS和BDNF组相类似,均主要是大量单标的神经膨体,双标者少.结论:脊髓Ⅱ板层虽有NOS,BDNF和GDNF阳性神经膨体,但各自来源有所不同,即大多数DRG小细胞并非同时含有NOS和BDNF或BDNF和GDNF.提示以上3种阳性神经膨体可能分别来源于不同功能类型的DRG小细胞.
