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GbpB-壳聚糖纳米颗粒系统的构建及其经鼻免疫大鼠的实验研究
目的:构建葡聚糖结合蛋白B(glucan binding protein B,GbpB)-壳聚糖纳米颗粒系统,并检测其经鼻免疫大鼠的效果.方法:制备GbpB-壳聚糖纳米颗粒系统,经鼻黏膜免疫SD大鼠,用ELISA法检测血清中针对GbpB的特异IgG抗体滴度及唾液中针对GbpB的特异SIgA抗体滴度.与阳性对照GbpB蛋白组及未免疫组、空白壳聚糖纳米颗粒组作比较.结果:该载体系统经鼻免疫SD大鼠所产生的血清及唾液中针对GbpB的IgG和SIgA抗体滴度远大于未免疫组和空白载体组,而与阳性对照组抗体滴度相当.但维持的抗体滴度更稳定和持久.结论:壳聚糖纳米颗粒系统可作为经鼻运输多肽防龋疫苗的载体系统.
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变形链球菌葡聚糖结合蛋白B基因在大肠杆菌中的表达及纯化
目的:在大肠杆菌中表达变形链球菌葡聚糖结合蛋白B基因(glucan binding protein B,gbpB),并对重组蛋白进行初步纯化,为下一步制备多抗和进行相关的研究奠定基础.方法:将克隆到的gbpB全长编码区基因克隆到表达载体pPROEXTMHTb,构建表达质粒pPROEXTMHTb-gbpB,以大肠杆菌E. coli BL21(DE3)为宿主菌进行诱导表达,表达产物经镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)柱进行亲和层析纯化.结果:工程菌经IPTG诱导3 h后,在SDS-PAGE上出现一条新的蛋白条带,相对分子量(Mr)为4.5～5.0×103,以可溶形式存在,经Ni-NTA柱纯化后获得纯度较高的重组葡聚糖结合蛋白B.结论:获得Mr为4.5～5.0×103的重组葡聚糖结合蛋白B.
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变形链球菌葡聚糖结合蛋白B功能区片段的分子克隆及表达
目的:克隆变形链球菌葡聚糖结合蛋白B(GbpB)功能区的基因片段,并在大肠杆菌中表达.方法:通过PCR技术克隆GbpB功能区的基因片段并通过蛋白重组融合表达技术使其在大肠杆菌中表达.结果:成功克隆了GbpB功能区的基因片段,并在大肠杆菌中得到其融合蛋白的表达.结论:利用分子生物学技术能够成功克隆GbpB功能区基因并获得其融合蛋白的表达,为后续研究奠定了基础.
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变形链球菌GbpB融合蛋白免疫SD大鼠实验研究
目的研究变形链球菌GbpB融合蛋白免疫SD大鼠时,其所诱导的血清和唾液的特异性免疫反应.方法用纯化的变形链球菌GbpB融合蛋白皮下免疫SD大鼠,免疫后间隔一定时间收集大鼠的血清及唾液,间接ELISA检测血清及唾液中特异性抗GbpB抗体.结果 GbpB融合蛋白免疫大鼠,可引起血清中IgG及唾液中IgA的显著提高.另外,GbpB融合蛋白免疫大鼠,38天采血,血清中抗GbpB抗体效价高,以后逐渐降低.结论变形链球菌GbpB融合蛋白具有免疫原性,可供研制防龋疫苗.
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变异链球菌葡聚糖结合蛋白B的生物学特性研究进展
变异链球菌是人类龋病的主要致病菌,葡聚糖结合蛋白是其重要的毒力因子之一.葡聚糖结合蛋白B在变异链球菌的致龋、维持细菌形态、发挥细胞壁生理功能等方面有重要作用,同时其N端具有免疫原性,可应用于免疫防龋.下面就葡聚糖结合蛋白B的生物学特性研究进展作一综述.
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变形链球菌葡聚糖结合蛋白B基因防龋疫苗的构建及其在哺乳动物细胞中的表达
目的: 观察变形链球菌葡聚糖结合蛋白B(gbpB)真核表达质粒pcDNA3.1(+)-gbpB在哺乳动物细胞COS-7的表达情况.方法:通过基因重组技术构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-gbpB通过脂质体转染法将其转染至COS-7细胞通过免疫组化SABC法检测其在COS-7细胞的表达.结果:pcDNA3.1(+)-gbpB质粒转染的细胞胞浆中呈棕黄色染色胞核中无着色pcDAN3.1(+)空载体转染的细胞胞浆及胞核无着色空白对照组也无着色.结论:质粒pcDNA3.1(+)-gbpB转染COS-7后能够在细胞内翻译、表达表达的蛋白质位于胞浆中可与抗GbpB抗体特异性结合具有抗原性可作为基因疫苗.
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菌斑中变链菌GbpB的免疫电镜观察
目的:了解GbpB在菌斑形成过程中的结构形式.方法:采用胶体金免疫电镜方法观察GbpB.结果:显示菌斑中胶体金颗粒分布不均匀,呈单层分布于变链菌表面;变链菌团块状聚集处的染色颗粒较为密集.结论:提示变链菌在菌斑中不是散在分布的,而是呈团块状聚集,在其黏附过程中,其表面特有的黏附分子起非常关键的作用.
