首页 > 文献资料
-
siRNA抑制缺氧诱导因子-1ɑ表达对人视网膜母细胞瘤细胞增殖与凋亡的影响
目的 观察siRNA抑制人视网膜母细胞瘤表达低氧诱导因子( HIF)对细胞增殖和凋亡的影响. 方法 以Y-79细胞系为研究对象,分别在正常氧和低氧环境下培养,MTT法检测细胞增殖,RT-PCR和Western blot 检测HIF-1ɑ mRNA和蛋白质水平的表达变化,siRNA抑制细胞表达HIF-1ɑ,膜联蛋白V-FITC和PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡情况,荧光评估测定法检测半胱天冬酶活性. SPSS 16.0软件包作统计学分析,配对t检验. 结果 与常氧和低氧环境培养Y79细胞比较,在0、4、8、12 h后HIF-1ɑmRNA和蛋白质数倍高表达. siRNA干扰技术处理24、48、72 h后,常氧环境培养下的Y-79细胞表达HIF-1ɑ呈时间依赖性轻度下降趋势,低氧条件下呈显著下降. siRNA HIF-1ɑ可能是通过上调Bax/Bcl-2 比率和活化caspase-9、caspase-3途径促进Y-79细胞凋亡. 结论 siRNA HIF-1ɑ下调人视网膜母细胞瘤表达低氧诱导因子,可抑制细胞增殖和促进细胞凋亡. 抑制HIF-1ɑ表达可能是治疗视网膜母细胞瘤的潜在新策略.
-
奥沙利铂对人视网膜母细胞瘤细胞增殖及凋亡的影响
目的 探讨不同浓度奥沙利铂对人视网膜母细胞瘤(RB)细胞Y79增殖及凋亡的影响.方法 将Y79细胞于RPMI 1640培养基中进行培养,分别给予0.000、0.125、0.250、0.500、1.000、2.000μmol·L-1奥沙利铂对Y79细胞进行处理,检测Y79细胞增殖情况、凋亡情况及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)活性变化.结果 不同浓度的奥沙利铂对Y79细胞增殖均有抑制作用,且随着浓度的增加,抑制作用逐渐增强(P＜0.05);与0.000 μmol·L奥沙利铂比较,0.250 μmol·L-1奥沙利铂对Y79细胞增殖已有较强的抑制作用(P＜0.05).0.000、0.250 μmol·L-1奥沙利铂处理下Y79细胞凋亡率分别为(2.18±0.43)％、(36.94±1.36)％,0.250 μmol·L-1奥沙利铂处理下Y79细胞凋亡率显著高于0.000μmol·L-奥沙利铂处理时(P＜0.01).0.000、0.250 μmol·L-1奥沙利铂处理下Y79细胞中Caspase-3活性分别为(1.97±0.72)％、(5.82±0.64)％,0.250 μmol·L-1奥沙利铂处理下Y79细胞中Caspase-3活性显著高于0.000 μmol·L-奥沙利铂处理时(P＜0.01).结论 奥沙利铂可抑制人RB细胞增殖,并促进其凋亡.
-
川芎嗪抑制人视网膜母细胞瘤SO-RB50生长机制的研究
目的:研究川芎嗪对人视网膜母细胞瘤(RB) SO-RB50细胞增殖的影响,并探讨其作用与趋化因子CXCR4表达水平之间的关系.方法:体外培养人SO-RB50细胞,经川芎嗪处理不同时间后,应用MTT法检测SO-RB50细胞的增殖抑制；采用荧光定量逆转录PCR和蛋白免疫印迹法分别从基因和蛋白质水平检测川芎嗪对SO-RB50细胞趋化因子受体CXCR4表达的影响,进而应用流式细胞仪检测SO-RB50细胞的细胞周期分布.结果:MTT结果显示川芎嗪对人SO-RB50细胞增殖有明显的抑制作用,与对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.01)；细胞周期结果显示川芎嗪处理后的SO-RB50细胞G0/G1期增多,S期细胞减少,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01)；通过荧光定量逆转录PCR及蛋白免疫印迹实验证明,川芎嗪能下调人SO-RB50细胞CXCR4的表达水平.结论:川芎嗪对人SO-RB50细胞的增殖有明显抑制作用,且能下调SO-RB50细胞中与肿瘤发生及生长密切相关的CXCR4表达水平.
-
miR-130b在人视网膜母细胞瘤中的表达及促癌机制研究
目的:检测miR-130b在人视网膜母细胞瘤(RB)中的表达并初步探究其促癌机制.方法:采用qRT-PCR检测miR-130b在人RB癌组织及癌旁组织、人RB细胞系(HXO-Rb44与Y79)中的表达;采用qRT-PCR、Western Blot及免疫荧光实验检测miR-130b过表达及干扰前后HXO-Rb44与Y79细胞中PTEN的表达水平;采用双荧光素酶报告基因试验验证miR-130b与PTEN的靶向关系;采用共转染实验考察PTEN与miR-130b影响RB细胞系PI3K/Akt信号通路表达的关系.结果:miR-130b在RB癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05).与ACBRI-181细胞比较,miR-130b在HXO-Rb44与Y79细胞中的表达水平显著增高(P<0.05).与RB癌组织比较,PTEN在其癌旁组织中的表达水平显著增高(P<0.05);miR-130b表达水平与PTEN表达水平呈负相关性(P<0.001).过表达miR-130b后的HXO-Rb44细胞PTEN mRNA与蛋白表达水平均显著降低,而干扰miR-130b后的Y79细胞PTEN mRNA与蛋白表达水平均显著升高(P<0.05).与miR-130b mimics+PTEN-NC组比较,miR-130b mimics+wt-PTEN组荧光素酶活性明显降低(P<0.05).共转染miR-130b mimics+PTEN-NC HXO-Rb44细胞p-Akt 308与p-Akt 473蛋白表达水平显著增高(P<0.05),PTEN蛋白表达水平显著降低(P<0.05);共转染miR-130b mimics+PTEN HXO-Rb44细胞中,以上三种蛋白表达水平均未发生明显改变.结论:miR-130b在RB组织及细胞系中呈高水平表达,PTEN为miR-130b的靶基因,miR-130b可能是经负向调控PTEN对PI3K/Akt信号通路的表达产生影响,终发挥促癌作用.
关键词： 人视网膜母细胞瘤 miR-130b PTEN PI3K/Akt信号通路 -
绿原酸对视网膜母细胞瘤细胞株HXO-RB44的生长抑制作用
目的 探讨绿原酸(CHA)对体外培养人视网膜母细胞瘤(Rb)细胞株HXO-RB44的作用及机制.方法 应用CCK-8体外抑制实验,筛选CHA对体外培养传6代的人Rb细胞株HXO-RB44的佳抑癌浓度.Western blot检测人Rb细胞株HXO-RB44中抑癌基因Rb1和P16及细胞周期蛋白(Cyclin D2)和细胞周期蛋白依赖激酶(CDK 4)的表达变化;ELISA检测培养基中乳酸脱氢酶(LDH)水平.结果 CCK-8体外抑制实验结果显示,CHA对人Rb细胞株HXO-RB44的佳抑癌浓度为80 μmol/L.经80μmol/L CHA处理5d的HXO-RB44细胞株中,抑癌基因Rb1和P16均有少量表达,而在阳性对照组(HT1080细胞)和未处理的HXO-RB44细胞几乎没有表达.CHA处理5d的HXO-RB44细胞株的Cyclin D2和CDK4的表达明显低于阳性对照组(HT1080细胞)和未处理的HXO-RB44细胞(P＜0.01).CHA处理5d的HXO-RB44的培养基中LDH的含量为(226.75±42.74)U/L,明显低于正常培养的细胞培养基(425.84±31.67)U/L(P＜0.01).结论 80 μmol/L CHA可能通过增加HXO-RB44抑癌基因的表达,降低细胞周期蛋白的表达及LDH水平,而抑制HXO-RB44细胞株的增殖.
