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Gd-DOTA-hTERT ASON磁共振肿瘤端粒酶靶向显像实验研究
背景与目的：研究表明，约有超过85%的恶性肿瘤高表达端粒酶活性。因此，端粒酶已成为肿瘤诊断和治疗研究领域的热点之一。目前，以放射性核素标记人端粒酶逆转录酶反义寡核苷酸(human telomerase reverse transcriptase antisense oligonucleotide，hTERT ASON)对高表达hTERT的恶性肿瘤进行靶向显像在国内外也有相关报道，但核医学图像在解剖和空间分辨率上存在着不足，难以获得高质量的图像。因此，本研究拟以磁共振成像方法对活体内肿瘤端粒酶的进行检测，并对其进行可行性评价。方法：以DOTA(1,4,7,10-Tetraazacyclododecane-N,N',N'',N'''-tetraacetic acid)为螯合剂对全链硫代修饰的hTERT ASON(3’末端连接一个伯氨)进行Gd3+标记制备反义探针并进行体外实验，以99mTc标记的DOTA-hTERT ASON生物分布实验；建立人黑色素瘤A375裸鼠模型，分别于腹腔注射前及注射后0.5、1、2、4、6、24 h在7.0T Magnetic Resonance Imaging(MRI)下行T1WI显像，以肿瘤及其周围正常组织作为感兴趣区(region of interest，ROI)计算信噪比(signal to noise ratio，SNR)并与Gd-DTPA进行比较；显像后48 h处死小鼠，以免疫组织化学方法检测肿瘤组织端粒酶活性。结果：Gd-DOTA-hTERT ASON的标记率约为65%，在37℃新鲜人血清中温育24 h后，探针的降解率低于3%；A375细胞对探针的摄取约为8.5%，Gd-DOTA-hTERT ASON转染的A375细胞信号强度明显高于Gd-DTPA和DOTA-hTERT ASON组；肿瘤在注射反义探针和Gd-DTPA均表现为明显强化，反义探针组SNR高可达2.37，大强化时间为注射后2~6 h，且可被DOTA-hTERT ASON所抑制(P＜0.05)，而Gd-DTPA组强化时间为注射后2 h；Gd-DOTA-hTERT ASON可抑制肿瘤端粒酶活性。结论：Gd-DOTA-hTERT ASON显示了良好的肿瘤靶向性，对端粒酶阳性表达的肿瘤具有潜在的定性诊断价值。
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新型双功能螯合剂DOTA及其衍生物在金属核素标记中的应用进展
DOTA及其衍生物是应用为广泛的新型双功能螯合剂之一.DOTA及其衍生物不仅具有成熟的合成工艺路线,还具有良好的配位和螯合能力,DOTA-多肽分子探针作为MRI对比剂、核素靶向显像剂和放射性药物在生物医学领域被广泛应用.笔者对DOTA双功能螯合剂的种类、DOTA-多肽标记前体的合成和DOTA-多肽金属配合物的应用进行综述.
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68Ga-DOTA-iNGR的佳制备条件及在小鼠体内的分布研究
目的 摸索68Ga标记的、经DOTA螯合的、含CendR基序的iNGR多肽(68Ga-DOTA-iNGR)的佳制备条件,观察其在小鼠体内的生物分布,并初步评价其在荷瘤裸鼠的靶向显像能力.方法 取68Ga新鲜淋洗液200μl(92.5～ 129.5 MBq),通过调节pH值、反应温度、反应时间及DOTA-iNGR用量,摸索佳标记条件.测定标记产物的体外稳定性、体内稳定性及脂水分配系数.正常小鼠经尾静脉注射68Ga-DOTA-iNGR后,分别于10、20、40、60及120 min处死,取血及主要脏器,测质量及放射性计数.建立人纤维肉瘤细胞HT-1080(表达CD13)和人结肠癌细胞HT-29(不表达CD13)荷瘤裸鼠模型,经尾静脉注射68 Ga-DOTA-iNGR,60 min后用microPET采集静态图像.采用独立样本t检验分析数据.结果 68Ga放射性活度92.5～129.5 MBq、DOTA-iNGR用量2μg、pH值4.0、90～100℃加热5～10 min时的标记率高,可达(97.5±1.3)％.68Ga-DOTA-iNGR在生理盐水(室温)及鼠血清(37℃)中放置4h后,放化纯均大于95％,在体内代谢1h后,尿液中68Ga-DOTA-iNGR的放化纯仍大于85％.脂水分配系数为-2.71±0.18.68Ga-DOTA-iNGR在小鼠体内经肾代谢,血液清除迅速,其他脏器放射性摄取少.荷瘤裸鼠microPET显像显示,HT-1080肿瘤部位有明显放射性浓聚.结论 68Ga-DOTA-iNGR标记方法简便,标记率高,无需进一步纯化,体外及体内稳定性好,生物分布理想,能靶向结合CD13阳性肿瘤,有望成为一种新型的CD13阳性肿瘤靶向显像剂.
关键词： 天冬酰胺-甘氨酸-精氨酸 DOTA 同位素标记 镓放射性同位素 小鼠 -
68Ga-DOTA-cRGD的制备及对荷肺腺癌裸鼠的显像研究
目的 制备68Ga-DOTA-环RGD(cRGD),评价其在正常小鼠体内的生物分布,并进行荷肺腺癌裸鼠的靶向显像.方法 以HEPES为缓冲体系(pH值5.0),水浴合成68Ga-DOTA-cRGD.采用HPLC法测定其标记率及放化纯,观察其在正常小鼠体内的生物分布.建立荷A549肺腺癌裸鼠模型,并行68 Ga-DOTA-cRGD microPET显像,勾画ROI,计算T/NT比值.用免疫组织化学及流式细胞术检测αvβ3表达水平.结果 68Ga-DOTA-cRGD的标记率为(97.8±0.1)％,标记后2h其放化纯仍高达95％.正常小鼠体内生物分布结果显示,该标记化合物血液清除迅速,5和120 min血液放射性摄取值分别为(1.65±0.85) ％ID/g和(0.06±0.02) ％ID/g,主要经肾脏排泄,肝、胃和肠道摄取较少.荷肺腺癌裸鼠microPET显像可见肿瘤部位有放射性浓聚影,注射68Ga-DOTA-cRGD后60 min的T/NT比值高达5.93±0.43.免疫组织化学及流式细胞分析结果均提示,肺腺癌瘤组织中有αvβ3表达.结论 68 Ga-DOTA-cRGD的标记率和放化纯高,体外稳定性好,生物分布特性良好,对αvβ3阳性肺腺癌具有较好的靶向诊断性.
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以dotA基因为靶标的LAMP法快速检测嗜肺军团菌
目的 建立一种简便、高效、特异、灵敏的快速检测军团菌肺炎致病原-嗜肺军团菌的方法.方法 本研究分析了NCBI数据库中嗜肺军团菌ⅣB型分泌系统的序列,经过筛选建立了以dotA基因为靶标的环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测法.为了验证该法的特异性,提取了约旦军团菌、马氏军团菌、沙门菌、不同血清型的嗜肺军团菌基因组DNA进行检测;为了验证该法的灵敏度,对梯度浓度的阳性模板进行了检测,并与普通PCR对比;后还将该法实际应用于环境水样的检测.结果 本法可于30 min内完成扩增;扩增产物电泳呈现LAMP特有的梯形条带,酶切产物的片段大小符合理论值;阳性产物中可见白色沉淀,加入溴乙锭后在紫外光下可见明亮的荧光,阴性产物无此现象.结论 该dotA-LAMP嗜肺军团菌检测法的特异性好,灵敏度高于普通PCR,可在简易的实验环境中快速、特异、灵敏、直观地检测出嗜肺军团菌,具备现场检测及基层推广的应用潜力.
