首页 > 文献资料
-
MACC1基因干扰对卵巢上皮性癌细胞增殖和顺铂耐药的影响
背景与目的：有研究发现，结肠癌转移相关基因1(metastasis-associated in colon cancer-1，MACC1)在多种肿瘤中高表达，其通过调节细胞外信号激酶(extracellular signal-regulated kinase，ERK)1/2信号通路影响肿瘤细胞的增殖、凋亡等过程。而对于MACC1在卵巢癌中的作用研究甚少。本研究应用RNA干扰(RNAi)技术逆转卵巢上皮性癌耐药细胞中MACC1基因的表达，并探讨MACC1基因表达与卵巢癌细胞顺铂耐药的关系。方法：前期设计的针对MACC1 mRNA的小发卡状RNA(shRNA)转染卵巢癌顺铂耐药细胞系SKOV3/DDP细胞，RT-PCR及Western blot检测MACC1 mRNA和蛋白表达的变化；四甲基偶氮唑蓝法检测转染前后SKOV3/DDP细胞的增殖及对顺铂的半数抑制浓度(IC50)，流式细胞仪测定顺铂处理前后各组细胞凋亡率。Western blot检测ERK1/2及p-ERK1/2蛋白的变化。实验分3组：空白组为未经处理的SKOV3/DDP细胞，阴性对照组转染空质粒p-super-EGFP-1，实验组转染重组质粒p-super-EGFP-MACC1 shRNA。结果：与其他两组细胞相比，实验组细胞MACC1 mRNA及蛋白降低，对顺铂的IC50较低(26.094 vs 47.501/47.089μmol/L， P<0.05)，p-ERK1/2蛋白表达下降(0.3979 vs 0.6712/0.6681，P<0.05)，顺铂处理前、后凋亡率增加(1.32%vs 0.66%/0.48%，P<0.05；36.70% vs 18.53%/16.60%，P=0.000)。结论：MACC1基因表达下调能在一定程度上恢复SKOV3/DDP细胞对顺铂的敏感性，可能与ERK1/2通路有关。
关键词： 结肠癌转移相关基因1 卵巢癌 顺铂 细胞外信号激酶 -
下调蛋白磷酸酯酶2A活性对抑郁症大鼠症状改善效果及其作用机制
目的 探讨下调蛋白磷酸酯酶2A(PP2A)活性对抑郁模型大鼠症状改善效果及其作用机制.方法 以慢性温和不可预知应激诱导抑郁症大鼠模型30只,分为对照A组、对照B组、低浓度冈田酸(OA)组、中浓度OA组、高浓度OA组及优浓度OA组各5只;检测对照A组、对照B组、低浓度OA组、中浓度OA组、高浓度OA组PP2A的活性,筛选优浓度OA;对照A组及对照B组分别从侧脑室微量注射无菌生理盐水5μl,低浓度OA组、中浓度OA组、高浓度OA组、优浓度OA组分别从侧脑室注射浓度为5 nmol/L、10 nmmol/L、20 nmol/L及优浓度OA溶液各5μ1.对对照B组及优浓度OA组进行蔗糖水消耗试验、旷场试验、体重及水迷宫等行为学测试,检测去甲肾上腺素(NE)、5-羟色胺(5-HT)、皮质醇(CORT)水平,检测脑组织中酪氨酸羟化酶(TH)、细胞外信号激酶(ERK)、丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)及糖原合酶激酶3β(GSK-3β)的蛋白水平及磷酸化水平检测.结果 OA组的浓度越高PP2A的活性越低(P＜0.01),将20 nmol/L OA组设为优浓度OA组;优浓度OA组旷野实验的水平及垂直得分均高于对照B组(P＜0.05);随观察时间延长,优浓度OA组的糖水饮用量、体重增加,水迷宫逃避潜伏期缩短(P＜0.05),且在给药后第8、15、22天,与对照B组比较,其糖水饮用量、体重均较高,水迷宫逃避潜伏期较短(P＜0.05);优浓度OA组NE、5-HT水平,TH、ERK、AKT蛋白水平以及TH、ERK、AKT、GSK-3β的磷酸化水平均高于对照B组(P＜0.05);优浓度OA组CORT水平以及GSK-3β蛋白水平均低于对照B组(P＜0.05).结论 PP2A的活性随OA浓度升高而降低,下调PP2A活性可能通过调节TH、ERK以及AKT/GSK-3β信号途径,从而改善大鼠的抑郁症状.
