首页 > 文献资料
-
红系衍生核因子相关因子2基因在芬维A胺诱导NB4细胞凋亡中的作用
目的:研究干扰红系衍生核因子相关因子2(NRF-2)基因表达对芬维A胺诱导NB4白血病细胞凋亡的影响,探寻白血病治疗的新思路.方法:采用核转染技术将NRF-2的小干扰RNA (siRNA)转入NB4细胞干扰NRF-2的表达,然后再用芬维A胺(1 μmol/L)处理NB4细胞,24、48 h后应用流式细胞术膜联蛋白(Annexin-V)异硫氰酸荧光素( FITC)/碘化丙啶(PI)双标记法检测细胞凋亡情况.结果:1μmol/L芬维A胺能明显诱导NB4细胞凋亡,并呈时间依赖性和药物剂量依赖性,在凋亡发生过程中NRF-2的mRNA和蛋白水平有上升趋势.通过RNA干扰NRF-2表达后,NRF-2的mRNA以及蛋白水平都明显下降,芬维A胺诱导NB4细胞凋亡的效能也随之减弱.流式细胞术分析干扰组细胞凋亡率仅(29.90±2.45)％,明显低于非干扰组的(43.85±14.40)％ (P=0.001).结论:NRF-2在芬维A胺诱导NB4细胞凋亡过程中扮演着重要的角色,提示芬维A胺可能通过氧化应激途径诱导细胞凋亡.通过这样的途径,设计提高白血病细胞的氧化应激能力可能成为靶向治疗白血病的新途径.
-
活性氧在芬维A胺诱导人肝癌细胞凋亡中的作用及其机制研究
背景：芬维A胺可提高细胞内活性氧（ ROS）水平，其抗肿瘤活性已在众多体内外实验和临床化学预防试验中得到验证。前期研究发现芬维A胺能体外诱导人肝细胞癌（ HCC）细胞凋亡，但确切机制不明。目的：探讨ROS在芬维A胺诱导人HCC细胞凋亡中的作用及其可能机制。方法：分别以抗氧化剂维生素E、芬维A胺单独或联合处理人HCC细胞株Huh-7，共聚焦显微镜和流式细胞术检测活细胞ROS，CellTiter-Glo发光法细胞活力检测试剂盒和Caspase-Glo3/7检测试剂盒分别检测细胞活力和细胞凋亡，免疫荧光染色和蛋白质印迹法分别检测核受体Nur77的表达、定位和应激诱导转录因子GADD153表达。结果：维生素E预处理能充分阻断芬维A胺诱导的ROS产生。在经维生素E预处理的Huh-7细胞中，芬维A胺的促凋亡效应显著降低（ P<0.05）。维生素E预处理能显著降低芬维A胺诱导的GADD153表达，对芬维A胺诱导的Nur77表达和出核则无明显影响。结论：以维生素E清除ROS可抑制芬维A胺促Huh-7细胞凋亡的效应，提示ROS参与了芬维A胺诱导的人HCC细胞凋亡，其机制可能与诱导GADD153蛋白表达有关。
-
芬维A胺和硼替佐米联用调节内质网应激蛋白促进肺癌A549细胞凋亡
目的 探讨芬维A胺[fenretinide,N-(4-hydroxyphenyl) retinamide(4-HPR),-种人工合成的维甲酸]与硼替佐米联合应用对非小细胞肺癌A549细胞的促凋亡作用.方法 将非小细胞肺癌细胞株A549用不同浓度的4-HPR(2.5、5、10、20 μmol/L)和硼替佐米(0.1、0.2、0.4、0.8 μmol/L)单独或联合处理24 h.应用MTT法检测4-HPR和硼替佐米单独或联合处理对细胞的生长抑制作用;碘化丙啶(PI)染色和流式细胞术检测细胞周期;Annexin Ⅴ-FITC和PI双染检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR和蛋白质印迹检测内质网应激相关凋亡蛋白CHOP的表达.结果 4-HPR和硼替佐米单独处理肺癌细胞株A549能够以剂量依赖性方式抑制细胞增殖,两药联用后抗增殖作用明显增强.细胞周期检测显示两药联用能导致细胞停滞于G0/G1期,S期细胞显著减少.与两药单独使用相比,4-HPR和硼替佐米联用能显著增强A549细胞凋亡,伴随内质网应激蛋白CHOP的mRNA和蛋白表达增强.结论 4-HPR和硼替佐米联用能促进肺癌A549细胞的凋亡,为药物联合治疗肺癌提供了实验基础.
-
芬维A胺联合索拉非尼对人肝癌细胞HepG2凋亡的影响
目的 探讨芬维A胺联合索拉非尼对肝癌细胞HepG2的凋亡作用及其可能的分子机制.方法 用芬维A胺和索拉非尼单药或联合作用于肝癌细胞HepG2细胞,通过CellTiter-Glo发光细胞活力检测试剂盒和Caspase-3/7检测试剂盒检测芬维A胺联合索拉非尼对肝癌HepG2细胞的凋亡作用.结果 芬维A胺、索拉非尼单用都不能显著抑制HepG2生长,但芬维A胺联合索拉非尼能显著抑制肝癌细胞HepG2生长(P＜0.01),并且芬维A胺联合索拉非尼能显著提高HepG2细胞中凋亡蛋白Caspase-3/7活性(P＜0.01).结论 芬维A胺联合索拉非尼可起到促进肝癌细胞HepG2凋亡,其作用机制可能与共同抑制ERK1/2通路诱导肝癌细胞凋亡有关.
-
维甲酸X受体α在组蛋白去乙酰化酶抑制剂及芬维A胺诱导人肝癌细胞凋亡中的作用
目的:前期研究发现,组蛋白去乙酰化酶抑制剂Scriptaid、曲古抑菌素A(TSA)分别联合芬维A胺能诱导人肝癌细胞凋亡,本研究将探讨维甲酸X受体α (RXRα)在其中的作用.方法:Scriptaid(10 μmol/L)、TSA(1μmol/L)联合芬维A胺(10 μmol/L)分别处理人肝癌细胞株(Huh-7、HepG2)及正常的人原代肝细胞,采用RT-PCR及Western-blot分别检测RXRα mRNA及蛋白表达.结果:Scriptaid(10 μmol/L)、TSA(1 μmol/L)联合芬维A胺处理能显著降低人肝癌细胞株Huh-7、HepG2 RXRα表达(P＜0.01),而对正常的人原代肝细胞RXRα表达无影响.结论:组蛋白乙酰化酶抑制剂Scriptaid、TSA联合芬维A胺可能通过下调RXRα表达诱导肝癌细胞凋亡.
关键词： 肝肿瘤 芬维A胺 组蛋白乙酰化酶抑制剂 维甲酸X受体α -
芬维A胺通过抑制ERK1/2活化促进人肝癌细胞凋亡
目的:探讨芬维A胺对人肝癌细胞凋亡的影响及其可能机制.方法:用芬维A胺(10 μmol/L)处理人肝癌细胞株(SNU475,SNU449,SNU182,SK-HEP-1,PLC/PRF/5),通过CellTiter-Glo发光细胞活力检测试剂盒和Caspase-3/7检测试剂盒检测芬维A胺的凋亡效应；通过实时定量PCR检测核受体Nur77、维甲酸受体β (retinoic acid receptor,RARβ) mRNA的变化；并用Western-blot检测细胞ERKl/2蛋白的激活情况.结果:芬维A胺处理24h能诱导SK-HEP-1、PLC/PRF/5细胞凋亡;但对SNU475、SNU449、SNU182细胞凋亡影响不显著(P＞0.05).在敏感的SK-HEP-1、PLC/PRF/5细胞中,芬维A胺显著降低ERK1/2蛋白活化,但对核受体Nur77、RARβ mRNA表达无显著影响.结论:芬维A胺体外诱导人肝癌SK-HEP-1、PLC/PRF/5细胞凋亡可能通过抑制ERK1/2蛋白活化起作用.
关键词： 肝肿瘤 芬维A胺 细胞凋亡 ERK1/2 Nur77 RARβ -
RARβ和Nur77相互调控在芬维A胺及HDACi抗肝癌中的作用
目的 前期研究发现,组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi) Scriptaid、TSA分别联合芬维A胺能诱导人肝癌细胞凋亡,RARβ和Nur77可能在其中起重要作用.本研究将探讨RARβ和Nur77在芬维A胺及HDACi对肝癌作用中的相互调控.方法 利用RNA干扰技术人为敲低肝癌细胞Huh-7 RARβ或Nur77基因表达,用芬维A胺(10μM)、组蛋白去乙酰化酶抑制剂Scriptaid(10μM)、TSA(1μM)处理后,利用实时荧光定量PCR检测Nur77 mRNA及RARβ mRNA表达水平.结果 人为敲低RARβ基因表达,对HDACi及芬维A胺处理Huh-7细胞后Nur77 mRNA表达无显著影响(P＞0.05),同样,人为敲低Nur77基因表达,对HDACi及芬维A胺处理Huh-7细胞后RARβ mRNA表达亦无影响(P＞0.05).结论 在HDACi及芬维A胺对肝癌细胞作用中,未发现RARβ和Nur77之间存在基因转录水平的相互调控.
-
组蛋白去乙酰化酶抑制剂联合芬维A胺诱导人肝癌细胞凋亡的研究
目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂Scriptaid、TSA分别联合芬维A胺诱导人肝癌细胞凋亡作用.方法 组蛋白去乙酰化酶抑制剂Scriptaid(10μM)合芬维A胺(10μM)、TSA(1μM)联合芬维A胺(10μM)分别处理人肝癌细胞株(SNU475,SNU449,SNU398,SK-HEP-1,PLC/PRF/5).通过Caspase-3/7检测试剂盒和CellTiter-Glo发光细胞活力检测试剂盒监测组蛋白乙酰化酶抑制剂联合芬维A胺对肝癌细胞的影响.结果 组蛋白去乙酰化酶抑制剂Scriptaid(10μM)、TS(1μM)联合芬维A胺(10μM)处理细胞24 h能显著诱导人肝癌细胞株SNU475、SNU449、SNU389、SK-HEP-1、PLC/PRF/5凋亡(P＜0.01).结论 组蛋白乙酰化酶抑制剂Scriptaid、TSA联合芬维A胺能诱导肝癌细胞凋亡.
-
藤黄酸和芬维A胺协同抗肝癌的体外实验研究
目的：研究藤黄酸和芬维A胺联合用药对人肝癌HepG2细胞是否具有协同作用。方法人肝癌HepG2细胞经藤黄酸和（或）芬维A胺处理后，MTS法检测细胞活力，流式细胞术检测细胞凋亡，Western blot方法检测BIP、CHOP、Caspase-3、8、9和PARP凋亡相关蛋白的变化。结果藤黄酸和芬维A胺联合用药明显增强抑制HepG2细胞的活力，与单独用药组相比具有协同作用。藤黄酸联合芬维A胺可以明显诱导HepG2细胞凋亡。两药联合作用可以诱导BIP、CHOP表达增加，引起Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活化，PARP的切割。结论藤黄酸和芬维A胺联合用药具有协同作用，明显增强抑制HepG2细胞的活力和诱导细胞凋亡，其作用机制可能与内质网应激诱导Caspase系统活化相关。
