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藤龙补中汤对结肠癌细胞LS174T增殖和凋亡的影响
目的:观察藤龙补中汤对结肠癌细胞LS174T增殖和凋亡的影响.方法:用不同浓度藤龙补中汤处理人结肠癌细胞LS174T和人结肠上皮细胞CRL-1790.用细胞计数检测试剂盒检测细胞增殖,平板法检测细胞克隆形成数目并计算抑制率,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,比色法检测细胞中半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3(caspase-3)、caspase-8和caspase-9的活性.结果:与对照组比较,藤龙补中汤对人结肠上皮细胞CRL-1790增殖无明显影响;1 mg/mL藤龙补中汤作用72 h,2 mg/mL藤龙补中汤作用48、72 h,5～20 mg/mL藤龙补中汤作用24～72 h均可显著抑制LS174T细胞增殖;1～20 mg/mL藤龙补中汤可显著抑制LS174T细胞克隆形成;5～20 mg/mL藤龙补中汤可诱导LS174T细胞凋亡,使LS174T细胞阻滞在G0/G1期,增强LS174T细胞caspase-3、caspase-8和caspase-9活性.结论:藤龙补中汤可抑制结肠癌LS174T细胞增殖,阻滞LS174T细胞于G0/G1期,促进LS174T细胞凋亡;藤龙补中汤促LS174T细胞凋亡作用可能与增加caspase-3、caspase-8、caspase-9活性相关.
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多西他赛调控LS174T细胞血管生成因子的作用
目的探讨多西他赛(Docetaxel)非细胞毒浓度下调控LS174T细胞血管生成因子的作用.方法采用四唑盐比色实验(MTT)判定药物对LS174T没有细胞毒作用的大浓度.明胶酶谱分析、Western blot、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)等方法研究药物对其胶原酶活性、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、基质金属蛋白酶2和9(MMP2和9)表达的作用.结果判定1.0 ng/mL为药物对LS174T细胞株没有细胞毒作用的大浓度.与溶剂对照组相比较,0.1、0.5、1.0 ng/mL多西他赛组对LS174T细胞VEGF、bFGF、MMP2和MMP9的mRNA和蛋白表达均具有不同程度的下调作用,各组明胶酶的活性也呈下降趋势,各组间两两比较均具有显著性差异(P＜0.01).结论非细胞毒浓度的多西他赛具有抑制LS174T细胞VEGF、bFGF、MMP2和9表达的作用,该药为有良好应用前景的血管生成抑制剂.
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醋酸甲羟孕酮对人结肠癌LS174T细胞体内生长抑制的作用
目的检测醋酸甲羟孕酮(MPA)对人结肠癌细胞LS174T移植瘤生长的抑制作用并初步分析其机制.方法建立人结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型.随机分为3组,每组10只,对照组:静脉注射或以同等容量的生理盐水灌胃;处理组分为MPA治疗组和MPA+5-Fu治疗组,MPA治疗组:每只每次灌胃MPA 30 mg/kg;MPA+5-Fu治疗组:每只每次静脉注射5-Fu 30 mg/kg;每只每次MPA 30 mg/kg灌胃,MPA灌胃每周5次,5-Fu静脉注射每周3次,共用3周.5周后处死动物,切除瘤灶、称瘤重、测瘤体积、计算抑瘤率;标本用流式细胞仪分析移植瘤细胞周期、凋亡率和细胞表面Fas/FasL表达;免疫组织化学SABC法检测移植瘤组织Fas/Fas-L表达.结果对照组、MPA治疗组、MPA+5-Fu合用组肿瘤体积分别为(1.65±0.68)cm3、(0.78±0.31)cm3、(0.23±0.12)cm3;抑瘤率分别为0、52.7%、86.1%.流式细胞仪分析细胞周期,移植瘤LS174T细胞经MPA处理后阻止G1期细胞向S期的进程,S期和G2/M期细胞相对减少,MPA+5-Fu合用组作用更明显.对照组、MPA治疗组、MPA+5-Fu合用组细胞凋亡率分别为3.6%、13.7%、28.6%,MPA作用后移植瘤LS174T细胞表面Fas和FasL表达显著增强.结论MPA对人结肠癌移植瘤LS174T细胞生长具有显著的抑制作用和诱导凋亡作用,其机制可能与MPA使LS174T细胞停滞于G1期及细胞表面Fas和FasL表达上调有关.
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促肾上腺皮质激素释放因子对肠道杯状细胞分泌产物的影响
目的 探讨促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)对肠道杯状细胞分泌产物的影响.方法 首先用不同浓度的CRF作用于LS174T细胞以确定佳作用浓度;用10-10 mol/L的CRF作用于LS174T细胞,利用Real-time qPCR、Western blotting、免疫荧光染色和ELISA技术对肠道杯状细胞分泌产物的表达量进行检测.结果 Real-time qPCR结果显示,与PBS对照组相比,CRF作用6h后,黏蛋白2(MUC2),岩藻糖基转移酶-2(FUT2)和三叶因子-3(TFF3)的mRNA表达量均下降(P＜0.05).细胞免疫荧光和ELISA的结果显示,CRF作用6h后,MUC2的蛋白表达量降低(P＜0.05).Western blotting结果显示,CRF作用24 h后,FUT2和TFF3的蛋白表达水平均下降(P＜0.05).结论 CRF可以通过改变LS174T细胞分泌产物的表达,从而破坏肠黏膜屏障功能.
关键词： 促肾上腺皮质激素释放因子 肠黏膜屏障 LS174T细胞 -
Ascl2 RNA干扰对结肠癌LS174T细胞EMT相关microRNA表达的影响
目的：探讨转录因子Ascl2对结肠癌细胞上皮间质转化（EM T ）相关的微小RNA （microRNA ）的影响。方法对结肠癌LS174T细胞进行 Ascl2的 RNA 干扰质粒转染，对照质粒 shRNA-control/EGFP和干扰质粒 shRNA-Ascl2/EGFP 转染LS174T细胞，经G418筛选建立了稳定转染的细胞系，并分别命名为shRNA-Ctr/LS174T和shRNA-Ascl2/LS174T细胞，实时荧光定量PCR（real-time PCR）和蛋白印迹（Western-blot）实验确定干扰效果后，采用 Transwell小室侵袭实验观察Ascl2干扰对细胞侵袭能力的影响，再进一步行microRNA芯片筛选与EM T相关的microRNA并行real-time PCR验证。结果干扰后细胞中Ascl2的mRNA和蛋白质表达均明显减少（P＜0．01）。Ascl2干扰后LS174T细胞的侵袭能力明显下降（P＜0．01）。microRNA芯片筛选出与 EM T 相关的 microRNA-200家族（包括 microRNA-200b、microRNA-200a、microRNA-429、microRNA-200c、mi-croRNA-141）在Ascl2干扰后均出现2倍以上的上调（P＜0．01）。结论 Ascl2可能通过转录调节microR-200家族，进而调控EM T从而影响结肠癌的浸润转移。
