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氟中毒大鼠脑组织和PC12细胞中脂质和尼古丁受体的改变
目的观察氟中毒对大鼠脑组织和神经细胞中细胞膜性脂质和神经型尼古丁受体的影响,探讨氟中毒引起神经系统功能紊乱的分子作用机制.方法用不同剂量氟饲养大鼠和处理体外培养的大鼠嗜铬神经细胞瘤细胞株(PC12神经细胞),用生物化学方法测定细胞3-4,5-二甲基噻唑-2,5-二酚基四唑溴化物(MTT)还原能力、脂质过氧化和蛋白氧化水平,用高效液相色谱方法测定细胞膜性脂质,用放射核素标记放射性配体-受体实验方法测定不同的尼古丁受体类型,用蛋白印迹方法测定α3、α4、α7和β2尼古丁受体亚单位蛋白水平.结果经氟处理的神经细胞中MTT水平降低36%,氟中毒大鼠和高浓度氟处理的神经细胞中氧化应激水平升高55%～89%,细胞膜性磷脂减少24%～34%,辅酶Q减少13%～30%,含α3、α4和α7亚单位的尼古丁受体类型在受体-配体结合率和蛋白水平均降低20%～44%,用抗氧化剂处理可减弱氟中毒对受体的损害作用.结论氟中毒导致神经型尼古丁受体水平降低,其原因可能与氟中毒时氧化应激水平升高及所引起的细胞膜性脂质结构异常改变有关,这些可能是氟中毒时神经系统功能紊乱的重要发生机制.
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细胞因子刺激下PC12神经细胞中诱导型NO合酶及精氨酸循环相关酶的表达
①目的研究PC12神经细胞在炎症因子的刺激下,一氧化氮合酶(NOS)底物精氨酸的来源,探讨减轻一氧化氮(NO)介导的炎症反应途径.②方法用神经生长因子(NGF)处理PC12细胞使之分化成神经细胞,用IFNγ/TNFα激活,利用Northern及Western方法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸代琥珀酸合成酶(AS)、精氨酸代琥珀酸裂解酶(AL)、正性氨基酸转移酶1和2(CAT-1、CAT-2)mRNA及其酶蛋白的表达.同时检测地塞米松或dibutyryl cAMP对上述各种酶表达的影响.③结果 iNOS mRNA、AS mRNA和其酶蛋白明显被诱导;AL mRNA和其酶蛋白少量被诱导,同时产生大量的NO;CAT-1和CAT-2没有被诱导.地塞米松或dibutyryl cAMP抑制iNOS的诱导及NO的合成,两者共同作用时,其抑制作用更明显.④结论在细胞因子活化的PC12神经细胞中iNOS被诱导,产生大量的NO;此时其底物精氨酸主要来源于精氨酸的再生系--瓜氨酸-NO循环.
